Livin、Smac在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的:探讨凋亡抑制蛋白Livin和凋亡促进因子Smac与上皮性卵巢癌临床病理学特征的关系。方法:利用免疫组化技术SABC法检测50例上皮性卵巢癌、20例良性卵巢瘤和20例正常卵巢组织中Livin和Smac的表达情况。结果:Livin在卵巢恶性肿瘤中的表达明显高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织。在上皮性卵巢癌组织中,Livin的表达与组织病理学分级成正相关,与分期无关;Smac在卵巢癌中的表达低于良性卵巢瘤及正常卵巢组织,与组织病理学分级、分期成负相关,表达出现逐渐降低的趋势。结论:Livin表达升高和Smac表达降低在上皮性卵巢癌的发生、分化进展过程中起重要作用。Livin和Smac基因有可能成为治疗卵巢癌的新靶标。

凋亡蛋白抑制因子Livin shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定凋亡蛋白抑制因子Livin基因短发夹状干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,以便进一步研究Livin的功能。方法针对已经筛选确定的Livin基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pGCL-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接、转化,产生pLV-shLivin慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLV-shLivin,pHelper1.0和pHelper2.03种质粒共转染包装细胞人胚肾293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功构建Livin shRNA的慢病毒载体LV-shLivin。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为3×108TU/ML。结论成功构建Livin基因shRNA慢病毒载体,为应用RNAi研究Livin功能奠定基础。

慢病毒介导的Canstatin基因转移对脐静脉血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的:构建携带Canstatin基因的慢病毒载体,体外转染脐静脉血管内皮细胞ECV304,观察其体外培养的脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响。方法:应用基因重组技术构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Canstatin,通过酶切、测序验证Canstatin基因后,将pGC-FU-Canstatin质粒和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Canstatin基因重组慢病毒GC-FU-Cansta-tin,并测定病毒滴度。将重组慢病毒转染靶细胞人脐静脉血管内皮细胞ECV304,通过Western blotting检测靶细胞中Canstatin的表达。采用MTT法观察Canstatin基因对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增殖的影响。TUNEL染色、流式细胞仪AnnexinV/碘化丙啶双染法,检测慢病毒介导的Canstatin基因诱导脐静脉血管内皮细胞的凋亡。结果:pGC-FU-Canstatin中携有正确的Canstatin基因序列;pGC-FU-Cansta-tin和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染包装细胞293T产生重组病毒GC-FU-Canstatin;检测病毒滴度为1×109TU/ml;Western blotting检测到Canstatin蛋白在靶细胞中持续表达。Canstatin(感染复数分别为25和50)作用72h后,ECV304细胞增殖数目显著少于PBS组和空载体组(P<0.01);TUNEL染色,以MOI为25的重组慢病毒GC-FU-Canstatin作用于人脐静脉血管内皮细胞ECV304细胞72h后,出现典型的凋亡形态学改变。以感染复数为25的GC-FU-Canstatin处理ECV304细胞72h后,细胞凋亡率为(21.63±1.32)%,PBS组为(2.87±0.76)%,空载体组为(2.66±0.69)%,转基因组与空载体组、PBS组相比差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论:慢病毒介导的Canstatin基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外增殖,同时对人脐静脉血管内皮细胞的凋亡具有促诱导作用。

宫内生长受限大鼠肝脏Toll样受体4表达的变化

目的检测宫内生长受限(IUGR)大鼠肝脏中Toll样受体4(TLR4)及细胞因子的表达,探讨IUGR个体革兰阴性(G-)细菌感染率增加的分子机制。方法采用孕期蛋白质营养不良法建立IUGR大鼠模型,应用荧光定量RT-PCR技术检测3周龄子鼠肝脏中TLR4的mRNA含量变化,Western blot方法检测子鼠肝脏TLR4的蛋白表达,并应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的水平。结果与对照组相比,IUGR组子鼠肝脏TLR4的mRNA和蛋白表达都明显降低(P<0.01);而TNF-α和IL-1β的表达水平明显增高,且与TLR4蛋白含量呈负相关(P<0.05)。结论宫内生长受限引起肝脏中细胞因子TNF-α和IL-1β的浓度增高,可能导致TLR4表达下降,后者可引起IUGR个体革兰阴性细菌炎症和败血症增加。

论妇产科专业学位硕士研究生科研能力的培养

目前,医学研究生教育的主要目标是培养出具有良好临床实践能力和科研能力的高素质综合型人才。随着教育部推进"双轨合一"培养模式的开展,专业学位硕士研究生的临床实践能力得到有效锻炼,而对其科研能力的培养就会显得不足,如何提高专业学位硕士研究生的科研能力成为当下研究热点之一。妇产科作为临床手术科室对研究生实践操作能力要求较高、临床轮转任务较重,因此对研究生科研能力的培养更需要引起足够重视。以中国医科大学专业学位硕士研究生培养为例,从基础知识技能储备、科研意识和科研思维的培养、导师的指引和学校资源合理化应用、研究生的综合人文素质培养等多方面对妇产科专业学位硕士研究生科研能力的培养进行探讨。

浅谈妇产科学专业学位研究生的人文教育

我国医学人文教育较西方发达国家有很大差距,加强临床医学专业学位研究生人文教育迫在眉睫。妇产科因其患者的独特性,对医生人文素养要求很高。妇产科学专业学位研究生人文教育应做到理论与实践并重,建立完善的知识体系和教学制度,培养出优秀的妇产科医生。

妇产科留学生教学探索与思考

留学生教育是医学教育的重要组成部分,妇产科学作为重要的临床课程,成为妇产科留学生教学重点。总结妇产科留学生教学经验,探索教学方法,提高教学质量。

宫腔镜下选择性活检与诊刮的比较——宫腔镜阴性结果的评价

目的 为探讨宫腔镜下选择性活检对评价子宫异常出血的价值 ,确认宫腔镜检阴性结果时是否需要进一步诊刮来评价子宫内膜情况。方法 回顾分析了 2 5 1例子宫异常出血患者的宫腔镜检查结果 ,2 0 8例用诊刮获得内膜标本。结果 宫腔镜下选择性活检在 13 1%患者更准确 ,而仅在 0 4 %不如诊刮准确。两者的特异度均为10 0 % ,而敏感度宫腔镜检查为 98 7% ,超过诊刮 (5 8 2 % )。内膜炎是宫腔镜唯一漏诊的疾病。诊刮漏诊的病种包括子宫肌瘤、内膜息肉。 117例宫腔镜检查为阴性结果中仅有 1例被诊刮确诊为内膜炎。结论 在评价子宫异常出血上宫腔镜下选择性活检比诊刮更准确 ,宫腔镜检阴性结果可能不需要进一步做活检。

人肿瘤抑素Tumstatin基因慢病毒表达载体的构建及其蛋白表达

目的构建Tumstatin基因慢病毒表达载体,进一步研究Tumstatin基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用。方法采用PCR技术从含有Tumstatin基因的质粒pSPORT1-Sfi扩增目的基因Tumstatin,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Tum,通过酶切、测序验证Tumstatin基因后,将pGC-FU-Tum质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Tumstatin基因和EGFP基因的重组慢病毒GC-FU-Tum,并转染人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,Wstern blot检测目的蛋白Tumstatin的表达。结果pGC-FU-Tum中携有正确的Tumstatin基因;pGC-FU-Tum共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒GC-FU-Tum;目的基因Tumstatin能被重组慢病毒高效地转导入HUVEC,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,Western blot能检测到Tumstatin蛋白在靶细胞中的表达。结论成功构建了携带Tumstatin基因的重组慢病毒载体;其蛋白表达与EGFP一致。。

Livin基因RNAi表达载体的构建及其沉默效应观察

目的:构建针对人Livin基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)表达载体,并观察该载体对Livin基因表达的沉默效应。方法:设计并合成4个Livin靶向的发夹状siRNA靶序列,退火后分别连接入pGCL-GFP慢病毒表达载体,转化,扩增后测序。以含有Livin基因的质粒为模板,扩增Livin基因cDNA序列的特异性片段,连接,克隆入真核表达载体pdsRED2-N1-3FLAG。将构建好的Livin基因过表达克隆质粒和不同靶点的RNAi表达载体质粒,经lipfectamine2000包裹,共转染入人293T细胞,Western blot和荧光显微镜检测Livin蛋白的表达情况,判断不同靶点的干扰效果。结果:Livin基因RNAi的表达载体pGCL-GFP-shLivin和Livin基因过表达载体pdsRED2-N1-Livin的阳性克隆序列正确。人293T细胞Livin蛋白表达90%被阻断。结论:成功构建高效阻断Livin基因表达的RNAi慢病毒表达载体,为应用RNAi进一步研究Livin基因的生物学功能奠定基础。

KLF4与S100A14在子宫内膜异位症相关性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探求子宫内膜异位症相关性卵巢癌中Krüppel样因子4(KLF4)与钙离子结合蛋白14(S100A14)的表达情况及临床意义。方法:免疫组化判定KLF4及S100A14分别在36例正常/良性卵巢组织(对照组)、30例卵巢子宫内膜异位症组织(ovarian endometriosis,OE)和49例子宫内膜异位症相关性卵巢癌组织(endometriosis associated ovarian carcinoma,EAOC)中的表达情况,并分析二者与EAOC患者相关临床参数的关系。结果:KLF4在对照组、OE组以及EAOC组中的阳性表达率分别为72.2%(26/36)、63.3%(19/30)、32.7%(16/49),差异有统计学意义(P<0.01)。S100A14在三组中表达的阳性率分别为61.1%(22/36)、63.3%(19/30)、87.8%(43/49),差异有统计学意义(P<0.05)。在EAOC中,KLF4表达与淋巴结转移有显著相关性(P<0.05)。KLF4与S100A14呈负相关(r=-0.138)。结论:KLF4低表达和S100A14高表达可能参与了卵巢子宫内膜异位症恶变,同时KLF4可能促进了EAOC的转移。

子宫内膜异位症患者腹腔液中sICAM-1表达水平及临床意义

目的:测定子宫内膜异位症患者腹腔液中可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)的表达水平,并探讨其临床意义。方法:应用酶联免疫吸附法检测21例子宫内膜异位症患者(实验组)与10例同期对照者腹腔液中sICAM-1的表达水平结果:实验组与对照组相比,腹腔液中sICAM-1表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。实验组中Ⅰ～Ⅱ期病例与Ⅲ～Ⅳ期病例腹腔液中sICAM-1水平差异无统计学意义。结论:sICAM-1可能与子宫内膜异位症的发生有关,并可以为子宫内膜异位症的监测及治疗提供依据。

保持宫腔完整的黏膜下大肌瘤腹腔镜剔除术

目的探讨大的黏膜下子宫肌瘤腹腔镜剔除术时即保持宫腔完整又减少术中出血的手术方法的疗效。方法2006年3月～2007年3月对21例直径达6～9cm的部分位于黏膜下的大肌瘤采用假包膜套扎法进行腹腔镜下肌瘤剔除手术。结果所有21例患者均十分成功地完成保持宫腔完整的大黏膜下肌瘤腹腔镜下剔除术,术中无1例宫腔开放,术后无1例宫腔出血。手术时间61～98min,平均(72.8±17.6)min,术中出血25～85mL,平均(55.7±21.6)mL,术后8～12h,平均(9.5±0.7)h离床活动,术后排气时间14.5～20.6h,平均(17.6±1.5)h,术后住院天数3～5d,平均(3.8±0.5)d。19例术后随访3～12个月,术前有膀胱或直肠压迫症状者,术后均已消失。经血过多及经期延长症状均明显好转。结论肌瘤假包膜套扎法腹腔镜下大黏膜下肌瘤剔除术既确保术中宫腔的完整性,又减少术中出血,同时又不影响术后子宫的血运,是一种既安全可靠又效果显著的手术方法。

Livin与Smac在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探讨Livin与Smac在子宫内膜异位症(EM)发生、发展中的意义。方法采用免疫组化S-P法,检测Livin与Smac蛋白在40例EM异位内膜和34例EM在位内膜及30例正常子宫内膜组织中的表达。结果 Livin在正常子宫内膜、EM在位内膜及EM异位内膜组织中的表达强度逐渐增高,3组间差别有统计学意义(P<0.01)。Livin的表达与月经周期无关(P>0.05)。Smac与Livin相反,在3组间的表达强度呈递减趋势,差别有统计学意义(P<0.01)。Smac在EM在位及异位内膜组织中的表达与月经周期无关(P>0.05),而在正常子宫内膜组织中分泌期的表达高于增生期(P<0.05)。Livin与Smac在EM中的表达强度呈明显的负相关(r=-0.890,P<0.01)。二者在EM中的表达强度与R-AFS分期无关(P>0.05)。结论 Livin与Smac蛋白在子宫内膜异位症在位及异位内膜组织中的异常表达对子宫内膜异位症的发生可能起着重要作用。

骨桥蛋白和基质金属蛋白酶9在上皮性卵巢癌中的表达及二者相关性

目的探讨骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在上皮性卵巢癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组化S-P法检测60例上皮性卵巢癌、20例良性卵巢肿瘤、20例交界性卵巢肿瘤以及10例正常卵巢组织中OPN和MMP-9的表达情况。结果OPN和MMP-9在上皮性卵巢癌中表达(109.86±21.51)明显高于交界性卵巢肿瘤(45.81±8.93)、良性卵巢肿瘤(11.86±3.01)及正常卵巢组织(5.32±2.74)。OPN和MMP-9在上皮性卵巢癌中的表达与组织病理分级、临床分期、淋巴结转移均有关,与组织学分型无关;二者在上皮性卵巢癌中的表达呈正相关(r=0.80,P<0.05)。结论OPN和MMP-9表达升高在上皮性卵巢癌的发生、分化、进展过程中起重要的作用,OPN和MMP-9有可能成为治疗卵巢癌的新靶点。

CB和MMP-2在上皮性卵巢癌中的表达及其相关性的研究

目的:探讨组织蛋白酶B(cathepsin B,CB)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在上皮性卵巢癌中的表达及其相关性。方法:采用免疫组化法检测60例上皮性卵巢癌组织、20例卵巢良性肿瘤、20例交界性上皮性卵巢肿瘤以及10例正常卵巢组织中CB和MMP-2的表达情况。结果:CB和MMP-2在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤、上皮性卵巢癌中表达水平呈明显上升趋势,CB和MMP-2在上皮性卵巢癌中的表达与组织病理分级、淋巴结转移均呈正相关,与临床分期、组织学分型无关。二者在上皮性卵巢癌中的表达呈正相关。结论:CB和MMP-2表达升高在上皮性卵巢癌的发生、分化、进展过程中起重要的作用。

宫内生长受限子鼠肝脏脂肪代谢关键酶表达的研究

目的通过检测胎儿宫内生长受限(intrauterine growth restriction,IUGR)子鼠肝脏中脂肪代谢关键酶及可促进脂肪合成的核转录因子固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)的表达,探讨IUGR个体发生脂肪性肝病的分子机制。方法通过孕期低蛋白饮食法复制大鼠IUGR模型,采用定量逆转录-聚合酶链反应和Western blotting技术检测孕20 d(E20)胎鼠和12周成年子鼠(A12)肝脏中SREBP1c的mRNA和蛋白含量,同时检测肝脏脂肪酸合酶(FAS)和肝脂肪酶(HL)的表达变化。结果 IUGR成年子鼠肝脏三酰甘油浓度增加(P<0.01)。IUGR胎鼠和成年子鼠肝脏SREBP1和FAS的mRNA和蛋白表达均明显高于同龄对照,且FAS与SREBP1c的mRNA水平成正相关(均P<0.05)。IUGR胎鼠肝脏HL表达正常但成年后表达增高(均P<0.05)。结论 "胎儿程序化"影响使IUGR子代自围产期至成年肝脏中脂肪合成的调控因子SREBP1表达增加,诱导生脂酶FAS的表达,可能是成年肝脏脂质堆积及脂肪性肝病高发的机制之一。

ATF4与RPL41在输卵管癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测ATF4与RPL41在输卵管癌组织中的表达情况,并探讨其表达特点以及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测输卵管癌标本50例和正常输卵管标本26例中ATF4与RPL41的表达情况,并分析其与输卵管癌临床病理参数之间的关系。结果:ATF4在输卵管癌组织中阳性表达率为86.0%,明显高于正常输卵管组织中的38.5%,差异具有统计学意义(P<0.001);RPL41在正常输卵管组织中阳性表达率为80.8%,明显高于输卵管癌组织中的38.0%,差异有统计学意义(P=0.001<0.05)。且ATF4与RPL41在输卵管癌组织中的表达有相关性(r=-0.296,P=0.037<0.05)。结论:ATF4与RPL41可能在输卵管癌的发生中起重要作用,高表达的ATF4对诊断原发性输卵管癌可能有指导意义。

ATF4与RPL41在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的:通过检测宫颈癌中ATF4与RPL41的表达情况,探讨其表达特点以及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测正常宫颈组织、CIN和宫颈癌组织中ATF4与RPL41的表达情况,并且分析两者与宫颈癌的关系及其意义。结果:ATF4、RPL41在宫颈癌与宫颈正常组织中阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。ATF4蛋白的表达与宫颈癌临床分期、高危型HPV感染密切相关(P<0.05)。RPL41蛋白的表达与宫颈癌临床分期密切相关(P<0.05)。二者在宫颈癌组织中的表达有相关性(r=-0.254,P<0.05)。结论:ATF4与RPL41可能在宫颈癌的发生发展、局部侵袭中起着重要作用。