大鼠肝细胞与胰岛内皮细胞融合细胞系的建立及鉴定

目的 通过电融合法构建由肝细胞系及原代内皮细胞融合而成的杂交细胞。方法 利用EMS诱变构建BRL-3A HGPRT缺陷型细胞;利用胆总管灌注法及胰酶消化法获得胰岛内皮细胞;利用CRY-3B细胞电融合仪及HAT筛选策略获得融合细胞;利用流式细胞仪对融合细胞的体积、细胞内颗粒密度及DNA含量进行检测;通过实时PCR及Western blotting检测融合细胞特异性基因的表达情况。结果 成功构建了一株由大鼠肝细胞系BRL-3A与原代大鼠胰岛内皮细胞融合而成的四倍体BRL-ies细胞。这株细胞既具有内皮细胞表型,表达CD31,又具有肝细胞特性,表达较高水平的谷氨酰胺合成酶。结论 肝细胞系BRL-3A可与原代内皮细胞融合形成较稳定的四倍体细胞,同时两者特征表型得以保留。

动物源菌株对7种消毒剂的抗药性分析

【目的】探明不同种类的消毒剂对动物源菌株的消毒效果。【方法】将宠物收容站、肉鸡养殖场和鹌鹑养殖场来源采集的样品进行分离培养和生化鉴定;采用微量肉汤法测定7种常用消毒剂对不同动物源菌株的最小抑菌浓度(MIC);通过PCR方法检测动物源菌株携带的消毒剂抗性相关基因。【结果】从动物源样品中分离鉴定得到1株Escherichia coli、Pasteurella、Staphylococcus aureus、Streptococcus和3株Salmonella。药物敏感性试验结果表明鹌鹑源Salmonella typhimurium F35对部分阳离子表面活性剂类、过氧化物类消毒剂抗药;宠物源Staphylococcus aureus和Streptococcus对多种消毒剂抗药性增加。抗药基因检测鹌鹑源Salmonella F35菌株携带mer A、int I1、qac EΔ1基因,宠物源Staphylococcus aureus检测出teh A基因,宠物源Streptococcus检测出teh A和int I1基因。【结论】鹌鹑源Salmonella typhimurium F35通过整合子以及外排泵等机制介导其对阳离子表面活性剂类消毒剂耐受;宠物源Staphylococcus aureus和Streptococcus通过外排泵机制介导对阳离子表面活性剂类、含氯消毒剂以及季铵盐类消毒剂耐受。

高尔基体磷蛋白3在肝细胞癌中的表达特点及其临床病理学意义

目的探讨高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)在肝细胞癌中的表达特点及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法检测132例肝细胞癌与配对的癌旁组织中GOLPH3蛋白的表达情况,分析肝细胞癌组织中GOLPH3表达水平与患者组织病理学特征的关系。利用激光共聚焦显微镜检测GOLPH3蛋白在肝细胞癌细胞的亚细胞定位。结果 GOLPH3在肝细胞癌组织中的阳性表达率为70.0%(92/132),在癌旁组织中为42.4%(56/132),GOLPH3在肝细胞癌组织中的表达水平明显高于其癌旁组织(P<0.001)。肝细胞癌组织中,GOLPH3高表达组门静脉癌栓的发生率为21.2%(14/66),而GOLPH3低表达组为6.1%(4/66),GOLPH3高表达组门静脉癌栓的发生率明显高于GOLPH3低表达组(P<0.05)。激光共聚焦免疫荧光结果显示GOLPH3主要存在于肝细胞癌细胞的细胞质中,且在细胞核内存在散在性分布。结论 GOLPH3可作为一种癌基因在肝细胞癌的发生发展中发挥重要作用。

DNA甲基转移酶抑制剂SGI-1027对人肝细胞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨SGI-1027对肝细胞癌细胞增殖及凋亡的影响。方法给予不同浓度(0、5、10、15、20、25、30和35μmol/L)的SGI-1027处理Huh7细胞24 h后,MTS法检测SGI-1027对Huh7细胞增殖活性的影响。实验组Huh7细胞中加入SGI-102730μmol/L,对照组Huh7细胞中仅加入等量0.1%DMSO;碘化丙啶染色和流式细胞仪检测SGI-1027对Huh7细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞仪检测SGI-1027对Huh7细胞凋亡的影响;TUNEL染色观察SGI-1027处理后Huh7细胞形态变化。结果 SGI-1027在Huh7细胞中的IC_(50)为27.3μmol/L,SGI-1027能够抑制Huh7细胞增殖,并呈剂量依赖性。SGI-1027不影响Huh7细胞周期;SGI-1027能够诱导Huh7细胞凋亡,对照组和实验组的凋亡率分别为(3.242±0.204)%和(46.57±2.512)%(P<0.05)。TUNEL染色观察对照组细胞呈圆形,而实验组细胞呈典型凋亡表现,对照组和实验组凋亡细胞百分率分别为(1.077±0.407)%和(58.24±8.427)%(P<0.05)。结论 SGI-1027能够抑制Huh7细胞增殖,并且能够诱导其凋亡。

高校学生网络信息平台的建设方案

本文介绍了在无计算机网络专业知识的情况下,如何廉价高效地打造一个覆盖计算机互联网,手机移动互联网,适合高校学生,适合高校学生管理的网络信息平台。

CB2选择性激动剂作为器官移植免疫抑制剂的前景

目前大麻素以其自身的抗炎效应,被应用于一些自身免疫性疾病。研究表明这种抗炎性质主要源于大麻素对免疫细胞的抗增生、抗分化和促凋亡作用。从理论上讲,这种作用将缓解器官移植后产生的排斥反应,可被当作免疫抑制剂。同时大麻素具有抗肿瘤作用,可降低由于长期使用免疫抑制剂而带来的肿瘤发生率。但由于大麻素的精神效应致使其无法长期应用于临床。那么无精神效应的大麻素——Ⅱ型大麻素受体选择性激动剂(后文简称CB2SA),将可能作为一种新型的免疫抑制剂应用于器官移植。

短肽FLPNF对地塞米松诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用

目的探讨短肽FLPNF对地塞米松诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用及对葡萄糖刺激胰岛素分泌功能的影响。方法用短肽FLPNF、地塞米松单独及联合处理大鼠胰岛INS-1细胞,CCK-8法检测各组INS-1细胞的增殖活性;ELISA法检测葡萄糖刺激胰岛素分泌功能;TUNEL法观察和评估细胞凋亡情况;流式细胞术检测各组的细胞凋亡率;Western blotting法检测凋亡相关蛋白及Glut2蛋白的表达情况。结果地塞米松抑制了INS-1细胞的生长,细胞损伤明显,可以观察到核皱缩破裂,凋亡率可达(40.6±2.4)%,凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显降低,Bax、caspase-3的表达明显升高,Glut2蛋白的表达明显降低。在联合应用短肽FLPNF后,胰岛细胞的凋亡率降低至(27.2±2.0)%(P <0.001),细胞形态明显改善,凋亡相关蛋白及Glut2的表达明显改善。结论FLPNF具有保护地塞米松诱导的胰岛细胞凋亡的作用,并且能够改善胰岛细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌功能。

肝细胞癌微血管侵犯相关危险因素

肝癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,我国是目前肝癌发病率最高的国家。肝癌起病隐匿,患者早期常常无明显症状,然而疾病进展十分迅速,大多数患者确诊时已经发展为肿瘤晚期,且约10%的患者初次病理诊断即伴有微血管侵犯。尽管目前肝癌的治疗手段在不断的提升和进展,但患者术后复发率并没有显著下降,多项研究支持微血管侵犯是与肝癌复发相关的独立危险因素之一,病理诊断伴有微血管侵犯的患者往往提示预后不佳。然而目前临床尚缺乏术前对于微血管侵犯的评判方法,通过对关于微血管侵犯近3~5年的研究进行分析与整合,望更全面深入的了解与微血管侵犯相关的研究进展。

基于凝血酶原时间、纤维蛋白原和血小板平均容积的PFM评分系统对晚期胰腺癌病人生存的预测价值

目的研究基于凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FBG)和血小板平均容积(MPV)的新的评分系统(PFM评分系统)对晚期胰腺癌病人生存的预测价值。方法回顾性收集2013年6月至2018年12月在中国医科大学肿瘤医院肝胆胰外科确诊并治疗的196例晚期胰腺癌病人的临床资料。运用受试者工作特征(ROC)曲线法或者中位数对连续变量进行分组。PFM评分系统由PT、FBG和MPV三个变量组成,其中PT<11.2 s、FBG<2.6 g/L和MPV<12.3 fl分别赋予0分,而PT≥11.2 s、FBG≥2.6 g/L和MPV≥12.3 fl则分别赋予1分。3个变量的评分相加即为PFM评分。根据PFM评分进一步将病人分为低危组(0或1分)、中危组(2分)和高危组(3分)。分析PFM评分与病人临床资料的相关关系,运用Kaplan-Meier法和Log-Rank检验比较PFM评分不同亚组之间的生存差异。运用Cox比例风险回归模型对生存状况进行单因素和多因素分析,确定独立预后因素。采用针对删失数据的时间依赖ROC曲线比较不同预测指标的预测性能。结果截至末次随访时,共178例(90.8%)病人死亡,18例(9.2%)病人存活;病人的中位总生存期(overall survival,OS)为6.8个月(1~32个月)。在单因素分析中,病人年龄、TNM分期、治疗前CA19-9、PT、FBG、MPV水平以及营养支持、免疫治疗与病人的OS显著相关(P<0.05);在多因素分析中,TNM分期、治疗前CA19-9、PT、FBG、MPV水平及营养支持、免疫治疗是OS的独立预测因素(P<0.05)。在整个队列以及Ⅲ期和Ⅳ期病人中,不同PFM评分的3组在OS上差异均有统计学意义(P<0.05),PFM评分是OS的独立预测因素。PFM评分系统在预测病人生存准确度上性能优于其组成性变量。结论PT、FBG和MPV是晚期胰腺癌病人生存的独立预测因素,由三者组成的PFM评分系统同样也是晚期胰腺癌病人生存的独立预测因素,且PFM评分系统的预测性能优于其组成各变量。

鹌鹑源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

【背景】在鹌鹑养殖过程中,抗菌药物和消毒剂的不规范使用加剧了耐药菌株在动物、场所和食品之间的相互传播,因此,掌握致病菌株在养殖动物中的耐药状况至关重要。【目的】检测北京周边地区鹌鹑蛋源致病菌株的耐药特征和耐药基因的流行情况。【方法】在天津市武清区部分鹌鹑养殖场采集鹌鹑泄殖腔粪便、鹌鹑蛋表、养殖环境和鹌鹑饮水的样品,通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、沙门氏菌inv A基因序列测定等方法对分离菌株进行鉴定。同时进行小鼠攻毒试验,测定小鼠半数致死量(median lethal dose,LD50)。再通过药敏试验和PCR方法对分离菌的耐药表型、耐药基因及毒力基因进行检测。【结果】分离菌株菌落颜色、镜检形态和生化试验结果符合沙门氏菌特性,沙门氏菌inv A基因序列测定与鼠伤寒沙门氏菌参考株相似度为99.44%,鉴定为鼠伤寒沙门氏菌,血清型为1,4,[5],[12]:i:l,2。该菌株对小鼠有致病作用,小鼠LD50为2.10×107 CFU/mL;药敏试验结果显示该菌株对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻呋、链霉素、磺胺甲啞唑、磺胺异啞唑、诺氟沙星、环丙沙星表现耐药,对头孢唑林等10种抗菌药物敏感;对阳离子表面活性剂和过氧化物类消毒剂的抗性增加;菌株携带blaTEM等4种耐药基因及mog A等13种毒力基因。【结论】从鹌鹑养殖场分离得到一株致病性鼠伤寒沙门氏菌,具有多重耐药特性并携带多种毒力基因。试验结果为鹌鹑源沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供了参考。

短肽FLPNF抑制大鼠胰岛素瘤INS-1细胞内hIAPP聚集的研究

目的探讨自行设计并合成的短肽FLPNF抑制过表达人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)的大鼠胰岛素瘤INS-1细胞内hIAPP的聚集作用和机制,及其对hIAPP-INS-1细胞增殖活力及胰岛素分泌功能的保护作用。方法以慢病毒转染人hIAPP基因构建的hIAPP-INS-1细胞株为研究对象,用不同浓度的FLPNF处理hIAPP-INS-1细胞并分组,硫黄素T染色法检测细胞内hIAPP的聚集情况,MTS法检测细胞增殖活力,ELISA法检测细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能;根据FLPNF、脑啡肽酶抑制剂单独及联合处理hIAPP-INS-1细胞分组,应用酶活性测定法检测FLPNF对脑啡肽酶活性的影响及硫黄素T染色法检测细胞内hIAPP的聚集情况。结果与空白对照组相比,200μmol/L FLPNF可以明显抑制细胞内hIAPP聚集,绿色荧光强度明显降低(F=14.442,P<0.01),细胞的增殖活力明显增加(F=4.151,P<0.01),葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能有升高趋势(F=0.603,P>0.05)。FLPNF可使hIAPP-INS-1细胞内脑啡肽酶活性明显增加,为空白对照组的2.356倍(F=84.265,P<0.01)。同时加入脑啡肽酶抑制剂时,FLPNF抑制hIAPP聚集的作用较单独加入FLPNF组明显降低(F=9.868,P<0.01)。结论FLPNF在hIAPP-INS-1细胞内可以通过增强脑啡肽酶活性,抑制hIAPP的聚集,对细胞的增殖活力及胰岛素分泌功能具有一定的保护作用。

智能手机APP快速生成产业的初步探索

随着WIFI的普及、3G/4G技术的发展、手机支付技术的成熟,互联网接口已经由传统的PC过度到了智能手机。在触控屏上轻触一下取代了在浏览器地址栏输入复杂域名,这种方便快捷的体验得到了广大用户的认可。大批门户网站、电商等为了不在这场互联网用户保卫战中丢失用户,无一例外,全部开发出自己专属的智能手机APP。作为高校学生网站站长,为了更好地为同学提供信息服务,也投入其中,寻找适合的APP解决方案。最终通过提供快速的、免费的APP生成服务的运营商解决了APP编译的问题。文中笔者将对部分APP生成运营商提供的服务进行浅析。

胰腺癌组织中Survivin表达与临床意义研究

目的探讨Survivin在人体胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法选取自2014年5月至2015年12月在辽宁省肿瘤医院接受治疗的33例胰腺癌患者的胰腺组织标本为观察组,另选取33份非肿瘤性胰腺组织标本为对照组。应用免疫组化S-P法对两组胰腺组织标本中的Survivin表达情况进行检测。结果观察组胰腺组织的Survivin蛋白阳性表达率为66.7%(22/33),对照组的胰腺组织未检测到Survivin表达;在观察组中,Survivin表达与肿瘤的临床病理分期、分化程度均存在显著相关性(P<0.05);Survivin表达与肿瘤部位及大小、患者性别及年龄均无显著相关性(P>0.05)。结论胰腺癌组织中的Survivin表达水平与胰腺癌的发生、发展存在密切联系,其对疾病的诊断、预后判定均具有重要意义。

ω-3脂肪酸对肝切除患者肝功能影响的Meta分析

摘要目的系统评价ω-3脂肪酸对肝切除患者术后肝功能的影响。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library数据库，并辅以手工检索、文献追溯，收集2016年9月以前发表关于ω-3脂肪酸对肝切除患者术后临床疗效影响的随机对照试验（RCT）。采用PRISMA要求进行RCT文献数据提取及质量评价。采用GRADE Profiler系统评价证据质量。采用RevMan 5.3.5软件进行Meta分析。结果根据纳入标准，共入选5篇文献。Meta分析显示，ω-3脂肪酸可以明显降低肝切除患者术后第3天丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平[均数差（MD）=-74.89，95% CI-110.02～39.76，P〈0.01]和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平（MD=-60.87，95% CI-96.05～-25.68，P〈0.01），增前白蛋白（Pre-Alb）水平（MD=9.61，95% CI 4.22～15.00，P〈0.01），但未改善术后第3天总胆红素（TBil）水平（MD=-1.13，95% CI-2.48～0.21，P〉0.05）和白蛋白（Alb）水平（MD= 1.16，95% CI-0.35～2.68，P〉0.05）。结论肝切除患者应用ω-3脂肪酸可以明显降低肝切除患者术后第3天ALT和AST水平，升高Pre-Alb水平，但未改善术后第3天TBil和Alb水平。

ω-3脂肪酸对肝切除患者并发症影响的荟萃分析

目的系统评价ω-3脂肪酸对肝切除患者术后临床疗效的影响。方法计算机检索Pub Med,Embase,Cochrane Library数据库,并辅以手工检索、文献追溯,收集2016年9月前发表的关于ω-3脂肪酸对肝切除患者术后临床疗效影响的随机对照试验文献(RCT)。本研究按照系统综述和荟萃分析优先报告的条目(PRISMA)要求进行RCT文献数据提取及质量评价。采用GRADE Profiler系统评价方法来评价所获取证据的质量。采用Q检验和I2检验评价统计学异质性,分析术后总并发症发生率、术后感染并发症发生率、住院时间以及术后病死率,采用Z检验分析荟萃分析的合并效应量。结果根据纳入标准,本研究共筛选6篇文献。ω-3脂肪酸组肝切除患者术后总并发症发生率低于对照组[25.5%(66/259)vs 42.7%(111/260)],差异具有统计学意义(RR=0.60,95%CI0.46~0.76,Z=4.11,P<0.001);术后感染并发症发生率低于对照组[10.3%(30/290)vs 21.2%(62/292)],差异具有统计学意义(RR=0.49,95%CI 0.33~0.73,Z=3.54,P<0.001);患者住院时间短于对照组[(8.4~12.7)d vs(8.6~15.9)d],差异具有统计学意义(SMD=-0.49,95%CI-0.81^-0.16,Z=2.89,P=0.004),但2组患者术后病死率差异无统计学意义(RR=0.46,95%CI 0.16~1.31,Z=1.45,P=0.15)。结论肝切除患者应用ω-3脂肪酸可降低术后总并发症发生率、感染并发症发生率并缩短住院时间,但对术后病死率无明显改善。

左半结肠癌肝转移灶分布与门静脉系统解剖关系的研究

目的对左半结肠癌肝转移患者肝脏转移灶分布情况及其门静脉(PV)系统三维结构进行回归分析,获取一种可通过PV三维结构影像预测左半结肠癌患者肝脏转移灶分布情况的策略。方法收集2015—2020年间就诊于辽宁省肿瘤医院肝胆胰外科且明确诊断为左半结肠癌肝转移患者资料,最终共纳入符合标准患者90例。应用3D Slicer4.11对患者上腹部增强CT检查影像资料的DICOM文件进行肝脏PV系统的三维重建,获得PV系统的解剖结构。根据时间先后将患者分为建模组65例,验证组25例。利用Logistic回归模型对建模组进行单因素和多因素分析,预测PV解剖结构与左半结肠癌肝转移灶分布的相关性。利用ROC曲线评估预测模型对左半结肠癌肝转移灶分布趋势的诊断能力。应用25例验证组验证该预测模型的预测能力。结果90例患者中男61例、女29例。通过PV期增强CT三维重建共得到7种PV系统结构分型,其中PV主干在肝门处分出PV左支和PV右支,并且在肠系膜下静脉(IMV)汇入肠系膜上静脉(SMV),即A1B3分型占比最高60%(54/90)。结论PV系统解剖结构复杂多变;单纯使用IMV与SMV夹角、PV左右支夹角、PV右前支右后支夹角可以对左半结肠癌肝转移灶的分布趋势做出预测。联合IMV与SMV夹角、PV左右支夹角以及联合SMV夹角、PV左右支夹角、PV右前支右后支夹角对左半结肠癌肝转移灶的分布进行预测也有意义。