人胚颞颌关节软骨细胞培养及生物学特性研究

采用机械分离及胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化的方法，简便、快速地获得大量成活率高的人ＴＭＪ软骨细胞。在ＤＭＥＭ培养基中进行原代和传代培养，并对原代培养软骨细胞进行了组化及免疫组化鉴定，相差显微镜、光镜及超微结构的观察。结果显示，光镜观察，原代培养细胞呈多角形，单层排列，电镜可见细胞内有丰富的粗面内质网及线粒体，细胞呈多极性，表面有突起。ＴＭＪ软骨细胞免疫组化Ⅱ型胶原染色阳性。甲苯胺蓝染色细胞质内有大量异染基质颗粒，说明本实验培养的ＴＭＪ软骨细胞保持了体内的基本特征。

IL-1诱导髁状突软骨细胞凋亡的实验研究

观察IL - 1对髁状突软骨 (Mandibularcondylarcartilage ,MCC)细胞增殖及凋亡的影响。 方法下颌骨髁状突软骨取自 6只新生的日本大耳白兔 ,经机械分离及胰蛋白酶、胶原酶联合消化获得MCC细胞。取第2代软骨细胞 ,培养过程中培养液中加入不同浓度 (0 .1μg/L、10 0 μg/L)的IL - 1,采用相差显微镜、流式细胞术及透射电镜对髁状突软骨细胞生物学行为变化进行研究。结果 IL - 1在 1μg/L～ 10 0 μg/L范围内 ,呈剂量效应关系抑制髁状突软骨细胞增殖 ,流式细胞术结果表明MCC细胞多数阻断于G0 /G1期 ,S期细胞比例显著低于对照组(P <0 .0 5 )。同时 10 μg/L及 10 0 μg/LIL - 1可显著诱导细胞凋亡 (凋亡率分别为5 9.47%及 6 3 .73 % ) ,细胞收缩 ,形态变圆。电镜下观 ,胞浆浓缩 ,染色质边集 ,粗面内质网扩张。结论 IL - 1抑制MCC的细胞增殖 ,诱导细胞凋亡的发生 ,可能是其在骨关节病发病中重要作用途径之一。

下颌骨髁突软骨细胞传代过程中生物学特性变化

目的:观察体外培养及传代对人髁突软骨细胞生物学特性的影响。方法:采用体外细胞培养、免疫生化及分子生物学方法观察传代过程中人髁突软骨细胞形态、型胶原及蛋白多糖合成及、、型前胶原的mRNA水平变化。结果:传代过程中人髁突软骨细胞型胶原合成及其mRNA水平逐渐降低,至第7代已基本丧失。而、型胶原的mRNA水平随传代逐渐升高,同时伴有细胞蛋白多糖合成的减少,细胞壁形态由圆形或多角形转变为长梭形占优势。结论:体外培养及反复传代可影响软骨细胞的表型特征。髁突软骨细胞的反分化标准应从胶原。

生长因子对人髁突软骨细胞DNA及胶原合成的影响

目的:研究胰岛素样生长因子(IGF-)、碱性成纤维样生长因子(bFGF)及转化生长因子-β1(TGF-β1)对人髁突软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法:采用体外细胞培养技术及同位素掺入法。结果:在0.4%新生小牛血清(NCS)条件下,bFGF对人髁突软骨细胞DNA合成有显著的促进作用,浓度在1ng/ml以上具显著性(P<0.05)。IGF-在10～100ng/ml呈剂量效应地促进3H-TdR的掺入,而TGF-β1无显著作用。bFGF在0.1～100ng/ml可显著促进人髁突软骨细胞3H-Proline掺入,最大效应剂量为10ng/ml(增加60%)。IGF-在10～100ng/ml能够明显促进细胞胶原合成,最大值在100ng/ml(增加98%)。TGF-β1在1～10ng/ml明显抑制3H-Proline掺入,最大抑制浓度为1ng/ml,抑制率约为24%。结论:生长因子可有效促进软骨细胞增殖及基质合成。

纤维连接素对髁突软骨细胞在Cytodex-3微载体表面贴附、铺展及增殖的影响

目的 :研究纤维连接素 (FN)对下颌骨髁突软骨 (MCC)细胞在Cytodex 3微载体表面生长的影响。方法 :采用机械分离及酶消化法获得MCC细胞 ,将细胞以 1× 10 8/L密度分别接种于含有空白及FN(2 0mg/L)包埋的微载体的自制转瓶细胞培养系统 ,利用环境扫描电镜对培养MCC细胞在两组微载体表面的生长方式进行动态观察。结果 :MCC细胞可快速贴附于FN包埋的Cytodex 3微载体表面 ,铺展速度快于空白微载体组 ,细胞形态不规则 ,更为扁平 ,有较多伪足。细胞在包埋微载体表面生长速度显著快于空白微载体组 ,细胞指数生长期提前 ,细胞倍增时间缩短 ,最终生长密度高于对照组。结论 :细胞在微载体表面的生长有赖于适当的细胞外基质成分 ,FN可促进MCC细胞在微载体表面的贴附及增殖 ,可用于MCC细胞大规模扩增的微载体表面处理。

关节内压力及其与颞颌关节疾病的关系

本文综述了关节内压力常用的测量装置及方法,关节内压力的影响因素及其改变与关节疾病的关系。对于关节内压力功能性变化及病理改变的认识,有助于深入理解颞颌关节的生理特点及疾病的发病机制。

基质金属蛋白酶抑制物与骨关节病治疗

基质金属蛋白酶在骨关节病及风湿性关节炎损害中发挥着重要的作用,随着基质金属蛋白酶及其抑制物分子机制研究的深入,通过抑制蛋白酶的生物合成及其活性,阻断关节软、硬组织的破坏,从而达到治疗骨关节损害的目的已成为目前研究的一个方向。本文综述了在金属蛋白酶抑制物的基础研究及其在骨关节病治疗方面的研究进展。

颞颌关节软骨及骨关节病的研究进展

骨关节病是一种严重危害人类健康的慢性、进行性骨关节损害。其病理及发病机制尚不完全清楚,临床上也缺乏有效的治疗方法。关节软骨的损害是骨关节病的首要表现。关节软骨的研究对揭示颞颌关节骨关节病的发病机制及临床上采取积极有效的治疗有着重要意义,本文综述了近年来关于软骨结构、生化及代谢方面的研究结果,并对影响软骨代谢、可能导致骨关节病发生的因素进行了讨论。

颞下间隙病变12例临床分析

颞下间隙病变１２例临床分析河北医学院附属二院口腔颌面外科焦岩涛，陈秉昭，扬威河北省中医院口腔科韩文利颞下间隙处于颌面深部诸间隙的中央，部位隐蔽；其内有翼静脉丛、颌内动脉及其分支和上、下颌神经的分支通过，具有复杂的解剖结构。这些均给该处病变的诊断和治疗...

颞下颌关节骨关节病髁状突软骨细胞体外培养及细胞生物学特性研究

目的 :从兔的颞下颌关节骨关节病模型动物获得髁状突软骨细胞并行体外培养。方法 :采用部分关节盘手术切除的方法制造颞下颌关节骨关节病模型 ,组织大体观察、超微结构观察和组化检测方法确定骨关节病的存在。在此基础上 ,通过机械分离、胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法从骨关节病髁状突软骨组织中获得软骨细胞 ,进行体外环境下的贴壁培养 ;通过软骨细胞特异性蛋白的免疫组化方法进行细胞鉴定。四甲基偶氮唑盐法比较病理模型细胞与正常细胞的增殖能力差异。结果 :上述颞下颌关节骨关节病模型全面地模拟了骨关节病变关节软骨组织的特征 ;利用机械分离、胰蛋白酶胶原酶联合消化的方法成功地从骨关节病髁状突软骨组织中分离出软骨细胞并在体外贴壁条件下培养成活 ;应用特异性的Ⅱ型胶原多克隆抗体和聚合性糖胺多糖单克隆抗体对培养细胞进行免疫组化检测鉴定 ,均显示阳性。骨关节病髁状突软骨细胞的增殖能力高于正常细胞。结论 :成功地建立了骨关节病髁状突软骨细胞的体外模型 ;骨关节病早期的髁状突软骨细胞表现出增殖活跃的特性。

颞下颌关节骨关节病动物模型的建立及组织病理学观察

目的 建立稳定的颞下颌关节骨关节病动物模型。方法 通过外科手术切除部分关节盘的方法 ,在成年兔上建立较为稳定的颞下颌关节骨关节病动物模型 ;分别于术后第 15天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月和 6个月将实验兔处死 ,取实验侧髁突组织进行组织病理学观察 ;1%甲苯胺蓝染色 ,观察病变髁突组织中蛋白多糖的分布范围与水平变化。结果 本研究中的颞下颌关节骨关节病模型从组织病理学上先后观察到了关节盘损伤后早期关节软骨的应激性修复增殖 ,中期软骨基质渐进性损耗 ,后期软骨基质损耗丧失、纤维组织修复覆盖及骨赘形成等软骨退行性变过程。甲苯胺蓝染色显示 ,病变早期肥大增厚的软骨组织中蛋白多糖含量降低 ,且分布不均匀 ;病变晚期的髁突较深层软骨组织中仍可见有蛋白多糖的合成与分布。结论 本研究所建立的颞下颌关节骨关节病动物模型能较好地模拟骨关节病的组织病理学变化过程 ,且具有结果稳定。

颞下颌关节骨关节病髁突组织细胞凋亡的研究

目的 研究颞下颌关节骨关节病髁突组织中软骨细胞凋亡发生的特点,探讨细胞凋亡在颞下颌关节骨关节病发病机制中的作用。方法 通过手术切除部分关节盘的方法建立颞下颌关节骨关节病动物模型,15 d-6个月内采用TUNEL法标记髁突各相应时段的凋亡细胞,结合相应组织学变化,观察、分析颞下颌关节骨关节病髁突组织中细胞凋亡发生的特点。结果 关节盘损伤后软骨产生明显应激性修复增殖反应时,凋亡细胞主要集中于关节表面的纤维层中;随着关节软骨和骨组织不断改建,软骨组织中逐渐出现大量的细胞凋亡现象,主要发生于表面纤维层与增殖层,尤其集中在软骨细胞簇中;在软骨组织消耗严重时,浅表区域内的细胞凋亡现象逐渐减少,肥大钙化层中出现了较多的凋亡细胞。结论 颞下颌关节骨关节病髁突软骨组织中存在过量凋亡的现象,软骨细胞异常增殖与过度凋亡导致软骨基质自身调节机制的破坏可能是骨关节病发生的重要原因之一。

颞下颌关节髁突软骨细胞体外培养中去分化现象研究

目的 研究去分化髁状突软骨细胞的细胞生物学特性。方法 连续在体外贴壁条件下培养传代正常乳兔髁突软骨细胞至第 2 0代 ,观察培养细胞的形态变化 ,免疫组化法和RT -PCR法对传代过程中的数代细胞对II型胶原与蛋白多糖聚糖体的表达情况进行连续检测 ,观察细胞软骨基质蛋白表达分泌的变化以及发生明显去分化软骨细胞的超微结构特点。结果 在贴壁培养条件下 ,髁状突软骨细胞去分化现象于细胞传代第 3代后逐渐显著 ,第 6代后培养的软骨细胞几乎完全去分化。去分化细胞胞体拉长 ,呈“成纤维细胞”样外观。去分化过程中 ,细胞对软骨基质蛋白的表达水平逐渐降低 ,细胞增殖速度增强。透射电镜观察显示 ,去分化软骨细胞细胞核明显呈分叶状 ,表现出异型核。结论 髁突软骨细胞在体外贴壁培养传代过程中会发生去分化现象 ,丧失软骨细胞特征性细胞表型。

生长因子对人髁突软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原基因表达的调控研究

目的 :研究低血清培养条件下转化生长因子 β(TGF β)、胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )、碱性成纤维生长因子(bFGF)对人髁突软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原基因表达的调控作用。方法 :采用体外细胞培养及mRNA狭缝杂交的方法。结果 :IGF Ⅰ对 3种前胶原的mRNA水平无显著影响。bFGF、TGF β均呈不同程度地抑制Ⅱ型胶原的基因表达 ,分别为对照组的 0 35 2及 0 6 5 8倍 ,同时TGF β显著增加了Ⅰ型胶原的基因表达。 结论 :IGF Ⅰ具有稳定软骨细胞表型的作用 ,bFGF、TGF β可抑制软骨细胞终末分化。

IL-1及地塞米松对人髁状突软骨细胞NO生成的影响

目的：观察ＩＬ－１和地塞米松对体外培养的人下颌髁状突软骨细胞一氧化氮（ＮＯ）生成的影响。方法：用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中ＮＯ终末代谢产物ＮＯ２－／ＮＯ３－浓度的变化。结果：单独使用ＩＬ－１，软骨细胞培养液中ＮＯ２－／ＮＯ３－水平显著升高。给予地塞米松能降低细胞培养液中ＮＯ２－／ＮＯ３－的升高幅度，但仍高于空白对照组。结论：ＩＬ－１能诱导体外培养的人下颌骨髁状突软骨细胞ＮＯ的生成，而地塞米松对这种效应有抑制作用。

兔髁状突软骨细胞藻酸盐凝胶三维培养体系的建立

目的 :建立兔髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系。方法 :利用机械与酶消化的方法获得均一性的兔髁状突软骨细胞 ,在二维贴壁培养条件下增殖至P2代 ;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质 ,进行三维培养 ;分别对培养细胞凝胶微球行石蜡包埋与树脂包埋切片 ,对三维培养条件下的软骨细胞行组织化学、免疫组织化学检测和超微结构观察。藻酸盐凝胶三维体系培养 6周后 ,以EDTA分解凝胶 ,收获培养的软骨细胞 ,免疫组化法检测三维体系中收获的软骨细胞的蛋白合成能力。结果 :藻酸盐凝胶三维培养体系中的髁状突软骨细胞生长状态良好 ;培养 6周后从凝胶体系中收获细胞的软骨特异性功能蛋白表达水平较转入三维体系前未见降低 ,培养细胞保持了良好的分化表型。结论 :成功地建立了髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系 ,在该体系中 ,软骨细胞生长状态与功能蛋白分泌能力良好。

颞颌关节内紊乱症治疗前后关节滑液中PGE2的水平变化

目的：通过检测关节内紊乱症（ＴＭＪＩＤ）患者关节滑液中ＰＧＥ２的水平变化，研究ＰＧＥ２与ＴＭＪＩＤ的关系并探讨皮质激素药物关节腔内注射治疗的作用机理和利弊。方法：对１６例疼痛性ＴＭＪＩＤ患者关节腔内醋酸强的松龙注射治疗，采用放免法检测治疗前后关节滑液中ＰＧＥ２的含量并作对比研究。结果：注药后３周和９周的滑液中ＰＧＥ２含量较注药前有显著下降，有高度统计学差异（Ｐ＜０．０１），同时关节疼痛症状明显改善。注药后９周与３周相比有部分患者的疼痛症状有复发趋势，同时伴有ＰＧＥ２含量的回升。结论：ＰＧＥ２水平变化与关节内紊乱症的疼痛症状密切相关，ＰＧＥ２可作为判定ＴＭＪＩＤ滑膜炎的一个重要指标。

bFGF、IGF-Ⅰ及TGF-β_1对人髁突软骨细胞增殖的影响

目的 研究胰岛素样生长因子 (insulin likegrowthfactorⅠ ,IGF Ⅰ )、碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF β1)单独及联合应用 ,对人髁突软骨细胞增殖的剂量 效应及时间 效应。方法 采用体外细胞培养技术及噻唑蓝比色法 ,对 3种生长因子对软骨细胞增殖的调节作用进行观察。结果 在培养基中含 0 4%血清条件下 ,TGF β1、IGF Ⅰ的作用不显著 ,bFGF有一定促增殖作用。在含 10 %血清条件下 ,3种生长因子均能显著促进细胞增殖 ,以bFGF最为突出 (增加 6 5 % ) ,生长因子在各自一定浓度范围内呈量效关系。联合应用作用效果累加。生长因子促增殖效应可持续 1周。结论 提示探索最佳生长因子组合可有效促进软骨细胞增殖及基质合成 ,可为关节软骨损伤性疾患的治疗提供一种有效的途径。

组织工程重建兔颞下颌关节盘软骨

目的 应用组织工程学方法重建颞下颌关节盘软骨。 方法 分离 6只日本大耳白兔髁状突软骨细胞 ,进行细胞的微载体大规模扩增 ,将扩增后的软骨细胞接种于组织引导再生胶原膜 ,体外适当培养后植入 4只同种成年兔皮下。植入后 12周 ,对所获组织进行组织形态学观察。 结果 髁状突软骨细胞在胶原膜内生长良好 ,植入动物体内 12周后可形成乳白色类软骨样组织 ,其表面光滑 ,有弹性。甲苯胺蓝染色 ,细胞周围基质呈异染性。 结论 应用胶原膜结合软骨细胞共同培养 ,可形成软骨样组织。