基于芽孢杆菌来源的苯丙氨酸羟化酶的大肠杆菌重组菌株生产5-羟基色氨酸

目的建立5-羟基色氨酸(5-HTP)的生物制备方法。方法合成芽孢杆菌(Bacillussp.)的苯丙氨酸羟化酶(pah)基因并克隆于载体pTIG-Trx中,将构建完的重组质粒pTIG-Trx-Ba-PAH转入大肠杆菌BL21(DE3)中,获得PAH生产的重组菌株;该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达和超声波破碎后,通过体外催化反应,将色氨酸催化成5-HTP;最后,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)验证PAH蛋白;采用高效液相色谱检测5-HTP含量。结果经表达的PAH蛋白分子量约为64.37 ku,经Western blot验证,可与PAH抗体特异性结合;通过体外催化反应,5-HTP生成产量为67.4 mg/L。结论成功构建了用于生产PAH的大肠杆菌重组菌株pTIG-Trx-Ba-PAH/BL21,并完成了5-HTP的生物制备。

ClO_(2)消毒工艺对污水处理厂出水超级耐药基因的影响

为了研究二氧化氯(chlorine dioxide,ClO_(2))消毒工艺对污水处理厂出水中超级耐药基因(super antibiotic resistance genes,SARGs)的去除效果,对污水处理厂出水消毒前后的水样进行了全年采集,并采用微孔滤膜正压过滤法及核酸吸附柱-洗脱法分别富集水中细菌和胞外核酸后,利用荧光定量PCR技术对其中的9种SARGs进行定量检测.结果表明,无论是胞内还是胞外核酸,均有NDM-1、MCR-1和MEC-A被检测出;同时,ClO_(2)消毒后上述3种SARGs的胞内相对总浓度明显上升(P<0.05),且ClO_(2)消毒对胞内SARGs相对浓度的影响与季节有关,其中春季、夏季和秋季均发生上升,且春季升高最为明显,达2倍,而冬季出水在消毒前后均未测出胞内SARGs;胞外SARGs则在ClO_(2)消毒前后没有明显浓度变化.因此,ClO_(2)消毒不能有效去除污水处理厂出水中胞内和胞外SARGs污染.