大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的：探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80μmol/L大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113，作用24、48和72 h后，并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组，通过MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用；以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周期的影响；结合Western blotting方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21表达水平的变化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示，随作用时间从24、48到72 h，大黄素对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系；由细胞周期检测结果显示，大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞；蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21表达水平明显降低，与空白对照组相比较，具有显著的统计学差异（P〈0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期，这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。

甘肃东乡及裕固族牙周炎口腔微生物群落结构研究

目的:研究甘肃东乡族和裕固族成年人牙周炎唾液微生物群落结构。方法:构建16SrRNA克隆文库对测序结果进行分析,DP(东乡族样本),YP(裕固族样本)。结果:发现链球菌属存在于所有样本中;伴放线放线杆菌属(DP:0.00%,YP:3.30%)、奈瑟菌属(DP:10.40%,YP:3.60%)及韦永球菌属(DP:0.40%,YP:3.85%)在两组样本中的分布具有明显的差异(P<0.05)。结论:甘肃东乡及裕固族牙周炎口腔微生物群落结构存在一定差异,其中,链球菌属、普氏菌属、梭杆菌属及嗜血杆菌属在牙周炎患者口腔中的作用值得进一步研究。

常用分子检测技术在儿童龋病微生物多样性研究中的应用

龋病是口内常见的慢性、感染性疾病,在儿童中的发病率呈上升趋势。微生物是引起龋病的主要因素之一,对于致龋微生物的种类、致龋机制及其多样性是目前口腔微生物学的研究热点。随着现代分子生物学技术的不断发展,分子检测技术被广泛用于微生物的研究中,早期检测及预防对降低儿童龋病发病率有重要作用。本综述着重论述常用分子检测技术在儿童龋病微生物多样性研究方面的应用,并对未来儿童口腔微生物多样性方面的研究进行展望。

微生态制剂及抗菌肽在龋病防治中的研究进展

龋病是以细菌因素为主的多种因素引起的口腔微生态失衡为特征的口腔慢性感染性疾病,是人类最常见的细菌性疾病[1,2]。目前龋病预防的关注点集中于对牙菌斑的去除,而牙菌斑实则为大量共生微生物集中组成,因此"移除或杀灭所有"菌斑微生物的理念对于致病微生物创造了一个开放的非竞争性的环境。传统的方法预防或治疗龋病,无法从根本上解决牙体组织损伤及细菌耐药性等问题。微生态制剂及抗菌肽应运而生,通过抑制口腔病原菌毒性作用以达到调节口腔微生态平衡的目的,是预防及治疗龋病的新方法。

甘肃保安族口腔健康儿童唾液微生物群落结构分析

目的:研究甘肃保安族口腔健康儿童唾液微生物群落结构,探寻优势微生物种群。方法:通过构建16S rRNA克隆文库法对测序结果进行分析,利用BLAST、Mothur、Clustalx 2.0等软件进行细菌群落结构多样性分析,构建系统发育树。结果:共检测到84个操作分类单位(OTU),归属于5个门,12个纲,15个目,18个科,19个属。其中以厚壁菌门(Firmicutes,88.60%)比例最多;6个优势菌属(检出率>1%),分别为链球菌属(Streptococcus,70.28%)、颗粒链菌属(Granu Iicatella,6.20%)、孪生菌属(Gemella,3.10%)、韦永氏球菌属(Veillonella,1.81%)、奈瑟菌属(Neisseria,1.03%)和嗜血杆菌属(Haemophilus,1.03%),其中链球菌属在8个样本中均出现。结论:保安族口腔健康儿童唾液微生物群落结构较为丰富;链球菌属为主要优势菌。

一种直接对牙龈炎龈沟液进行PCR扩增的方法

目的利用加入突变TaqDNA聚合酶等的优化方法实现人类牙齿龈沟液中的细菌及人类基因组片段的直接扩增。方法随机选取10例牙龈炎患者。用无菌注射器分别吸取10μL的龈沟液。然后各吸取2μL,标记为第一组,分别加入突变TaqDNA聚合酶及DMSO,通过改变PCR反应体系,直接实现龈沟液中细菌的16sRNA及MAOA-VNTR基因的扩增;再分别吸取2μL,标记为第二组,此组先采用微量DNA提取试剂盒来实现DNA的提取,然后扩增龈沟液中细菌的16sRNA及MAOA-VNTR基因。结果直接扩增法所获得的扩增产物比传统提取DNA法多2个,两种方法的转化子阳性率无差别;MAOA-VNTR可扩增出单倍体,串联体等。结论直接PCR法可以用于龈沟液中细菌的初步检测以及人类基因组小片段的扩增,也可应用于牙龈炎或牙周炎患者的口腔龈沟液研究及临床诊断。

16S rRNA基因克隆文库分析比较牙周炎患者和健康人口腔唾液微生物多样性

【目的】通过对同一地区、同一民族牙周炎患者和健康人的唾液微生物群落结构的分析,探寻牙周炎患者口腔微生物的多样性。【方法】采集甘肃东乡族自治县的东乡族牙周炎患者和健康人唾液各5例,分别记作DP(东乡牙周)和DH(东乡健康),提取细菌总DNA,构建16S r RNA基因克隆文库,测序后利用MOTHUR、MEGA 4.0、Clustal X 3.0等软件对测序结果进行分析。【结果】所有样本共检测出115个OTUs(DP 60,DH 75),归属于6个门,27个属。TM7是DP组特有的优势菌门。仅在DP组中检测到的优势菌属是梭菌属(Fusobacterium)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)和TM7_genera。【结论】发现牙周炎患者与健康人口腔唾液微生物存在一定差异。其中,TM7、梭菌属和消化链球菌属在牙周病中的作用值得进一步研究。

牙周炎牙根根面微生物群落结构比较

目的利用高通量测序,研究牙周炎患牙根面微生物的群落结构,为牙周炎的进展研究提供实验依据。方法选取同一牙周炎患者的6颗Ⅲ度松动患牙,分别刮取根颈(RN组)、根中(RM组)、根尖(RT组)菌斑及组织,利用Illumina Miseq测序平台,对16SrRNA V3V4区进行双端测序;通过Mothur、Qiime和SPSS等软件分析根面不同部位微生物的群落结构及差异。结果主坐标分析(PCoA)显示,RM与RT组微生物群落结构较接近,但二者与RN组有明显区别;3组共检出13个菌门,优势菌门(丰度>1%)共7个;184种菌属中检出优势菌属(丰度>1%)29个,其中拟杆菌门_[G-6]及消化链球菌科_[XI][G-4]丰度会随着采样部位的深入而增加(P<0.05),而普雷沃菌属、月形单胞菌属、棒状杆菌属及欧森氏菌属的丰度随着采样部位的深入而减少(P<0.05)。结论牙周炎患牙根面微生物群落结构具有一定的部位特异性。