目的探讨谷氨酰胺对小鼠NCM460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法 对数生长期NCM460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5 μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5 μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO 2培养箱培养2...目的探讨谷氨酰胺对小鼠NCM460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法 对数生长期NCM460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5 μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5 μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO 2培养箱培养24 h后,收集各组细胞,采用Western blotting检测各组细胞Bcl2、Bax及Cyt-c蛋白的表达量,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果 Western blotting检测脂多糖组细胞中Bax、Cyt-c蛋白的表达均明显升高( P 均<0.05),Bcl-2蛋白的表达较正常组低,Bcl-2/Bax值较正常组下降;而谷氨酰胺组肠组织中Bax、Cyt-c蛋白的表达均弱于脂多糖组( P 均<0.05),Bcl-2蛋白的表达较脂多糖组高( P <0.05),Bcl-2/Bax值较脂多糖组升高。流式细胞仪检测三组细胞的凋亡率,显示脂多糖组细胞出现大量凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率均明显高于正常组,差异有统计学意义( P <0.05);谷氨酰胺组细胞的凋亡较脂多糖组减轻,其早期凋亡率及晚期凋亡率均低于脂多糖组,差异有统计学意义( P <0.05)。结论谷氨酰胺能体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞凋亡,可能是通过抑制NCM460细胞线粒体凋亡途径来实现其保护作用。展开更多
文摘目的探讨谷氨酰胺对小鼠NCM460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法 对数生长期NCM460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5 μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5 μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO 2培养箱培养24 h后,收集各组细胞,采用Western blotting检测各组细胞Bcl2、Bax及Cyt-c蛋白的表达量,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果 Western blotting检测脂多糖组细胞中Bax、Cyt-c蛋白的表达均明显升高( P 均<0.05),Bcl-2蛋白的表达较正常组低,Bcl-2/Bax值较正常组下降;而谷氨酰胺组肠组织中Bax、Cyt-c蛋白的表达均弱于脂多糖组( P 均<0.05),Bcl-2蛋白的表达较脂多糖组高( P <0.05),Bcl-2/Bax值较脂多糖组升高。流式细胞仪检测三组细胞的凋亡率,显示脂多糖组细胞出现大量凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率均明显高于正常组,差异有统计学意义( P <0.05);谷氨酰胺组细胞的凋亡较脂多糖组减轻,其早期凋亡率及晚期凋亡率均低于脂多糖组,差异有统计学意义( P <0.05)。结论谷氨酰胺能体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞凋亡,可能是通过抑制NCM460细胞线粒体凋亡途径来实现其保护作用。
文摘目的探讨急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)小鼠血清与组织中正五聚蛋白3(pentraxin 3,PTX3)、肝素结合蛋白(heparin-binding protein,HBP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的变化及诊断价值。方法将32只雄性小鼠随机分为正常组和模型组,每组16只。用D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭模型。12h后处死小鼠,检测两组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,取肝组织进行HE染色观察肝脏病理形态学改变。采用ELISA法检测小鼠血清及肝脏、脾脏、小肠组织中的PTX3、HBP、PCT及IL-6、IL-1β、TNF-α的水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的诊断价值。结果ALF模型组小鼠较正常组小鼠肝组织结构破坏程度明显增加,炎性细胞浸润明显增多;血清AST、ALT、TBIL水平显著升高。模型组小鼠血清及肝脏、小肠组织中PTX3与正常小鼠比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),但脾脏组织中PTX3水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组小鼠比较,模型组小鼠血清及肝脏、脾脏、小肠组织中HBP、PCT及IL-6、IL-1β、TNF-α均有升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析PCT的诊断效能最高,其曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.941,cut-off值为35.2pg/ml,敏感度为93.8%,特异性为87.5%;PTX3其次,AUC为0.859,cut-off值为475.4pg/ml,敏感度为81.3%,特异性为87.5%;TNF-α的诊断效能最低,其AUC为0.695,cut-off值为54.5pg/ml,敏感度为68.8%,特异性为62.5%。结论PTX3、HBP、PCT可用于早期急性肝衰竭的辅助诊断,且较IL-6、IL-1β、TNF-α诊断效能高。
