急性肠套叠患儿免疫指标变化及意义

目的探讨急性肠套叠患儿免疫指标变化及意义。方法回顾性选取2020年6月至2022年6月河北省儿童医院收治的116例急性肠套叠患儿为病例组,同时选取同期河北省儿童医院60例健康体检儿童为对照组。根据灌肠复位效果将急性肠套叠患儿分为有效组和无效组。检测各组儿童外周血T淋巴细胞亚群(CD_(3)^(+),CD_(4)^(+)和CD_(8)^(+))及自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)百分比、血清免疫球蛋白(immunoglobulin A,IgA),IgG和IgM水平差异,分析各免疫指标对急性肠套叠患儿灌肠复位效果的预测价值。结果病例组外周血CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、NK细胞百分比及血清IgA、IgG水平显著低于对照组,差异有显著性(P<0.05);无效组外周血CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、NK细胞百分比及血清IgA、IgG水平低于有效组,差异有显著性(P<0.05)。血CD_(3)^(+)对灌肠效果预测效能最佳,其预测的受试者工作特征曲线下面积为0.816,灵敏度为84.6%,特异度为70.0%。急性肠套叠患儿缓解期外周血CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、NK细胞百分比及血清IgA、IgG水平高于急性期(P<0.05)。结论急性肠套叠患儿外周血免疫指标水平显著降低,检测免疫指标水平有助于早期预测灌肠复位效果,从而指导临床医生选择恰当的治疗方式。

胆道闭锁患儿血清microRNA-21水平的表达及与肝纤维化的相关性分析

目的探讨胆道闭锁患儿血清microRNA-21(miR-21)水平的表达及与肝纤维化的相关性。方法选取2017年7月—2019年7月河北省儿童医院收治的先天性胆道闭锁患儿76例作为胆道闭锁组,同期在该院进行体检的健康婴幼儿50例作为正常对照组。采用qRT-PCR法检测研究对象血清miR-21 mRNA相对表达量,进一步根据胆道闭锁组的miR-21 mRNA相对表达量中位数将其分为高miR-21组和低miR-21组,每组38例。比较不同miR-21 mRNA相对表达量胆道闭锁患儿的血清总胆红素水平、肝组织纤维化评分及天冬氨酸转氨酶与血小板比值(APRI)、血清肝纤维化指标[层粘连蛋白(LN)、透明质酸酶(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-Col)]水平、肝脏组织上皮-间质细胞转化(EMT)相关分子[E-cadherin、ZEB1]水平的差异。分析胆道闭锁患儿血清miR-21与肝纤维化的相关性。结果高miR-21组、低miR-21组、正常对照组血清miR-21 mRNA相对表达量和总胆红素水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),高miR-21组血清miR-21 mRNA相对表达量和总胆红素水平高于低miR-21组;低miR-21组miR-21 mRNA相对表达量和总胆红素水平高于正常对照组。高miR-21组肝组织纤维化评分、APRI、LN、HIA、PCⅢ、Ⅳ-Col水平高于低miR-21组(P<0.05)。高miR-21组肝脏组织E-cadherin mRNA相对表达量低于低miR-21组(P<0.05);ZEB1 mRNA相对表达量高于低miR-21组(P<0.05)。Pearson相关分析发现,胆道闭锁患儿血清miR-21水平与血清总胆红素水平、肝组织纤维化评分、APRI呈正相关(r=0.546、0.669和0.578,均P<0.05);与肝纤维化指标LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-Col的水平呈正相关(r=0.781、0.663、0.503和0.628,均P<0.05);与E-cadherin mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.614,P<0.05),与ZEB1 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.607,P<0.05)。结论高表达的miR-21可能参与胆道闭锁患儿肝纤维化过程,可能与其促进EMT的作用相关。

胆道闭锁患儿血清MMP-7和uPAR水平与肝纤维化和预后的关系研究

目的探讨胆道闭锁(BA)患儿血清基质金属蛋白酶-7(MMP-7)和尿激酶纤溶酶原激活物受体(uPAR)水平与肝纤维化和预后的关系。方法选择2016月3月至2019年3月在该院接受肝门空肠吻合术(Kasai术)治疗的70例BA患儿作为BA组,同期在该院体检的50例健康儿童作为对照组。并根据肝纤维化程度将70例BA患儿分为轻度纤维化组(42例)和重度肝纤维化组(28例)。根据总肝红素(TB)水平将70例患儿分为非黄疸组(40例)和黄疸组(30例)。采用酶联免疫吸附试验检测MMP-7和uPAR水平,分析MMP-7和uPAR与肝纤维化和预后的关系。结果BA组患儿手术前及手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平均明显高于对照组(P<0.05),手术后2个月时血清MMP-7、uPAR水平均明显高于手术前(P<0.05);重度肝纤维化组患儿手术前及手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平均明显高于轻度肝纤维化组患儿(P<0.05),黄疸患儿手术前及手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平均明显高于非黄疸组患儿(P<0.05);轻度肝纤维化患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平与手术前比较,差异无统计学意义(P>0.05),非黄疸患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平与手术前比较,差异无统计学意义(P>0.05);重度肝纤维化患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平明显高于手术前(P<0.05),黄疸组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平明显高于手术前(P<0.05)。结论BA患儿血清MMP-7和uPAR水平的升高与肝纤维化的加重及术后黄疸的发生相关,可能有助于BA患儿病情及预后的评估。

肝纤四项对小儿先天性胆道闭锁的诊断价值

目的探讨肝纤四项[透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)以及层粘连蛋白(LN)]对小儿先天性胆道闭锁的诊断价值。方法回顾性研究2017年1月至2019年12月就诊于普外二科的非生理性黄疸患儿185例,经超声、磁共振、术中探查及术中胆道造影等方法确诊胆道闭锁患儿46例(BA组),非胆道闭锁患儿139例(NBA组),对2组患儿的血清肝纤四项指标进行分析。结果HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN对小儿先天性胆道闭锁的诊断敏感度分别为:76.82%、66.57%、70.28%和62.18%,其敏感度均较高。其诊断特异度分别为:70.22%、62.94%、66.34%和68.65%,仍呈现出较高的状态。BA组患儿肝纤四项HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN的水平均高于NBA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清肝纤四项检测对小儿先天性胆道闭锁有重要的诊断意义。

伴结肠痉挛便秘患者肠壁神经特异性烯醇化酶和S-100的表达

目的应用神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S-100观察有肠道痉挛表现的便秘患者肠道神经丛及其组成成分有无异常改变,研究便秘患者结肠痉挛与肠神经系统可能存在的联系。方法采集手术患者乙状结肠与横结肠肠壁组织,以有肠管痉挛表现者19例作为实验组,无肠管痉挛表现者20例作为对照组,应用NSE、S-100对肠壁组织进行免疫组织染色,计数肠神经丛和神经节细胞数,并观察其状态变化。结果 NSE、S-100染色均显示实验组痉挛段肠管黏膜下神经丛及肌间神经丛内的神经节细胞数量均有下降(P均<0.05),神经丛数目无显著变化(P>0.05),横结肠段神经丛及神经节细胞数目均无显著性差异(P>0.05)。光镜下可见痉挛段结肠神经纤维紊乱增生,神经节细胞形态发生变化。结论便秘患者结肠痉挛与肠神经系统中神经节细胞数量、成熟程度改变有关,肠壁中增生紊乱的神经纤维也起到一定的作用;患者痉挛段肠管病理表现与巨结肠类缘病类似,患者无结肠扩张,可能与患者病变程度轻,近端结肠处于代偿期有关。

PGP9.5及CAD在伴结肠痉挛STC患者肠壁中的表达

目的探讨便秘患者结肠痉挛与肠神经系统之间的联系,揭示慢传输型便秘(STC)患者伴发结肠痉挛症状的病理生理基础。方法选取外科手术治疗的STC患者。影像学检查和/或手术当中发现有肠管痉挛的STC患者为实验组,共19例;影像学检查及手术时均未发现肠道痉挛的患者为对照组,共20例。应用免疫组化方法对肠壁神经系统中的蛋白基因产物9.5(PGP9.5)及组织蛋白酶(CAD)进行检测,观察神经系统中神经元、神经丛的数量。结果 CAD及PGP9.5免疫组化染色定量分析结果相同。与对照组比较,实验组乙状结肠黏膜下层和乙状结肠肌层神经节细胞数均较少(P均<0.05)。实验组和对照组横结肠黏膜下层、肌层神经丛数、节细胞数以及乙状结肠黏膜下层、肌层神经丛数比较均无明显差异(P均>0.05)。结论 STC患者局部结肠痉挛与肠神经系统神经节细胞的数量进一步减少有关,与神经丛数量关系不明显。

LncRNA OIP5-AS1通过调节miR-186-5p/KIF14信号轴来促进神经母细胞瘤的增殖

目的:神经母细胞瘤(NB)是儿童最常见的实体瘤。本研究旨在确定长链非编码RNA(LncRNA)Opa相互作用蛋白5反义RNA 1(OIP5-AS1)在NB中的作用及其可能的分子机制。方法:体外培养神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和人神经母细胞BE2C。通过定量实时聚合酶链式反应测定OIP5-AS1、miR-186-5p和驱动蛋白分子14(KIF14)的表达。使用CCK-8测定法、平板克隆形成法和EdU掺入法评估细胞增殖。蛋白质印迹法检测KIF14蛋白水平。通过在线数据库Starbase3.0预测靶基因,并通过双荧光素酶报告基因测定进行验证。结果:OIP5-AS1在SK-N-SH细胞中的表达水平较BE2C细胞显著上调(1.88±0.14 vs 1.00±0.07),P<0.05。shOIP5-AS1组下调OIP5-AS1表达后,SK-N-SH细胞活力、克隆形成能力(111.33±15.57个vs 154.67±20.74个vs 149.33±17.01个,P<0.05)和DNA合成能(EdU阳性细胞比例:35.09±8.02%vs 67.87±7.21%vs 63.33±7.17%,P<0.05)弱于NC组和shCtrl组。经生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证,OIP5-AS1与miR-186-5p以及miR-186-5p与KIF143'-UTR具有靶向调控作用。与NC组和shCtrl组相比,shOIP5-AS1组KIF14 mRNA相对表达量(0.41±0.09,P<0.05)和KIF14蛋白表达(0.20±0.02,P<0.05)均下调。相反,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor组KIF14 mRNA相对表达量和KIF14蛋白表达量分别为0.83±0.12和0.62±0.04,较shOIP5-AS1+miR-NC组升高。RNA结合蛋白免疫共沉淀结果也显示,与对照(IgG)相比,Ago2抗体可以富集OIP5-AS1和miR-186-5p。与shOIP5-AS1+miR-NC组相比,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor组细胞活力和克隆形成能力(180.0±11.36 vs 136.0±14.53)显著增加(P<0.05)。在挽救性实验中,与shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor+siNC组相比,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor+siKIF14组细胞活力和克隆形成能力(139.33±8.96 vs 183.03±18.0,P<0.05)明显降低(P<0.05)。结论:SK-N-SH细胞中OIP5-AS1表达水平显著上调,并且作为ceRNA竞争性地抑制miR186-5p,上调KIF14表达,从而促进NB进展。

胆道闭锁患儿血清GPC3、TGF-β1和VEGF水平与肝硬度值和肝功能的关系研究

目的:研究胆道闭锁(BA)患儿血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、转化生子因子β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)水平与肝硬度值和肝功能的关系。方法:选择2016月3月-2019年3月期间在我院接受Kasai手术治疗的62例BA患儿作为研究对象(BA组),并根据总胆红素水平分为黄疸患儿(总胆红素≥34.2μmol/L)、无黄疸患儿(总胆红素<34.2μmol/L);另取同期在本院体检的50例健康儿童作为对照组。检测BA组患儿术后2个月、对照组儿童体检时的血清GPC3、TGF-β1、VEGF及肝功能指标白蛋白(ALB)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的水平及肝硬度值,采用Pearson相关分析血清GPC3、TGF-β1和VEGF水平与肝硬度值和肝功能的相关性。结果:BA组患儿的血清GPC3、TGF-β1、VEGF、ALT、AST、GGT水平及肝硬度值均明显高于对照组(P<0.05),血清ALB水平与对照组比较无统计学差异(P>0.05);BA组中黄疸患儿的血清GPC3、TGF-β1、VEGF、ALT、AST、GGT水平及肝硬度值均明显高于无黄疸患儿,血清ALB水平明显低于无黄疸患儿(P<0.05);BA组中血清GPC3、TGF-β1、VEGF水平与血清ALT、AST、GGT水平及肝硬度值呈正相关(P<0.05),与血清ALB水平呈负相关(P<0.05)。结论:BA患儿术后GPC3、TGF-β1和VEGF的升高与肝纤维化进程、肝功能破坏有关,未来可能成为研究BA术后肝纤维化发生机制的靶点。

lncRNAH19shRNA通过抑制Akt信号改善小鼠急性结肠炎

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19shRNA调控蛋白激酶B(proteinkinaseB,Akt)信号对小鼠急性结肠炎的影响.方法:C57BL/6小鼠分成Control、Model(急性结肠炎模型)、sh-NC(急性结肠炎模型,shRNA阴性对照慢病毒载体治疗)、sh-H19(急性结肠炎模型,H19shRNA慢病毒载体治疗)、sh-H19+SC79组(急性结肠炎模型,H19shRNA慢病毒载体、Akt激活剂SC79治疗),qRT-PCR方法检测H19表达,Westernblot方法检测p-Akt、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达,评价小鼠疾病活动指数,测量结肠长度,HE染色对结肠组织疾病病理学进行评分,ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,比色法检测髓过氧化物酶(MPO)含量,可见分光光度法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:与Control组比较,Model组小鼠结肠组织中H19表达量、p-Akt/Akt表达量升高,疾病活动指数、结肠组织疾病病理学评分均升高,结肠长度降低,IL-6、TNF-α、IL-1β、MPO、MDA含量均升高,SOD含量降低,细胞凋亡数目和Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量降低.与sh-NC组比较,sh-H19组小鼠结肠组织中H19表达量、p-Akt/Akt表达量降低,疾病活动指数、结肠组织疾病病理学评分均降低,结肠长度增加,IL-6、TNF-α、IL-1β、MPO、MDA含量降低,SOD含量升高,细胞凋亡数目和Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高.与sh-H19组比较,sh-H19+SC79组小鼠结肠组织中p-Akt/Akt表达量升高,疾病活动指数、结肠组织疾病病理学评分均升高,结肠长度降低,IL-6、TNF-α、IL-1β、MPO、MDA含量均升高,SOD含量降低,细胞凋亡数目和Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量降低.结论:lncRNAH19shRNA通过抑制Akt信号改善小鼠急性结肠炎.