XIP木聚糖酶抑制蛋白对不同家族木聚糖酶的抑制作用

研究利用毕赤酵母GS115表达的小麦木聚糖酶抑制蛋白,探索了该XIP抑制蛋白对GH10和GH11家族木聚糖酶的抑制作用。结果显示,该抑制蛋白分子量约为37 k Da,高于氨基酸序列计算所得分子量30.2 k Da,可能是由于该蛋白发生了糖基化作用。该蛋白分别作用于黑曲霉GH10木聚糖酶和哈茨木霉GH11木聚糖酶,得到最适抑制比例分别为1.2??1和8??1,最适抑制时间分别是50 min和30 min,最适抑制p H值均为6.0,最适作用温度均是40℃。

重组人白血病抑制因子的表达、包涵体复性、纯化及其活性

白血病抑制因子（LIF）是一种在生物体内具有独特活性和重要调节作用因而广泛应用的多功能细胞因子.利用基因工程技术表达重组人白血病抑制因子（Recombinant human leukemia inhibitory factor,rhLIF）并进行包涵体的复性及纯化,将rhLIF基因克隆到原核表达载体pET32a中,成功构建重组hLIF基因工程菌,并研究该菌株发酵条件和纯化工艺.先将种子液进行发酵培养,诱导表达,收集诱导后的细胞;对细胞破碎,收集包涵体沉淀,洗涤包涵体;用6 mol/L盐酸胍变性重溶包涵体,镍离子亲和层析柱上直接复性及纯化,并用阴离子交换进一步纯化,复性率为75%,纯度达97%.结果显示基因序列与理论序列一致,SDS-PAGE分析结果表明其表达的外源蛋白质分子量与预期的目的蛋白质相对分子量大小相一致,均为35×10~3;Western blotting、MTT活性检测结果表明,此重组hLIF融合蛋白具有良好的抗原性和免疫原性.本研究成功建立了rhLIF原核表达、复性和纯化体系,可为进一步研究LIF生物学活性及产品开发提供试验基础.

人白血病抑制因子在原核细胞中的表达与纯化

研究证明人白血病抑制因子(hLIF)是一种对多种不同类型的细胞和组织具有重要功能的细胞因子,其独特的生物学特性使其被广泛应用。介绍了自制的具有生物活性的hLIF,将hLIF基因克隆到pET32a中,并利用硫氧还蛋白(Trx)作为融合配体,在大肠杆菌中成功表达可溶性融合蛋白Trx-hLIF。亲和层析纯化后利用SDS-PAGE和Western blot对纯化结果进行检验。利用肠激酶(EK酶)切割融合蛋白,释放hLIF,随后通过简单的阳离子交换得到纯度高达98.1%的hLIF4.75mg。小鼠M1髓系白血病细胞增殖分析测定纯化的rhLIF的功能与hLIF具有相似的生物活性,EC50为5ng/ml,对应的比活性为0.5×107 IU/mg。