从中医痰湿相关理论探讨调控自噬干预肥胖的理论依据

通过阅读文献,以细胞自噬与肥胖炎症状态、痰湿困脾与肥胖病机、自噬异常与痰湿困脾,以及化痰祛湿健脾法与代谢炎症性相关疾病等为关键词探讨肥胖的形成与干预机制,认为肥胖的形成与细胞自噬异常所致的慢性炎症状态密切相关,提出肥胖的病机关键为痰湿困脾,并深入阐析了细胞自噬异常与痰湿困脾的内在关联,明确了从化痰祛湿健脾入手可能是调控细胞自噬改善肥胖等相关代谢性疾病的有效手段。这为从细胞自噬的角度阐明肥胖痰湿病机及干预治疗提供了理论依据。

失眠从中医药论治研究进展

通过查阅古今文献,从病因病机、辨证分型、临床治疗3个角度对失眠的辨治进行梳理,认为该病与情志异常密切相关,其主要病机是心神被扰、心神失养,早期辨证多为肝郁化火、心脾两虚、心虚胆怯等,随病程发展演变为阴虚火旺、痰热内扰等,治疗上多以中药复方为主,还可充分运用针灸、推拿、穴位敷贴、中西医结合等治疗手段,临床上可获良好且持久的治疗效果,不仅可降低患者对药物的依赖,还能提高患者的生存质量,有效缓解患者的负面情绪和不适症状等。

温胆汤通过调控PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬对肥胖痰湿证炎症状态的影响

目的:观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠脂肪细胞炎症因子、自噬活性标志物及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路关键分子蛋白表达的影响,探讨肥胖痰湿证炎症状态形成的物质基础及温胆汤的干预机制。方法:将126只SD大鼠随机分成2组,即空白组16只和造模组110只,空白组喂养基础饲料,造模组喂养高脂饲料建立肥胖痰湿证动物模型,共8周。造模成功后,视体质量情况,按顺序淘汰体质量过轻者,遴选出48只肥胖大鼠,随机分为模型组、奥利司他组(32.40 mg·kg^(-1))、雷帕霉素组(2 mg·kg^(-1))、温胆汤低、中、高剂量组(4.45、8.90、17.80 g·kg^(-1)),每组8只;另在空白组大鼠中随机选取8只设为正常组,各用药组按剂量(以生药量计算)给予灌胃,模型和正常组给予等体积蒸馏水灌胃,每天1次,共6周。检测或计算大鼠体质量、Lee’s指数、脂体比和肥胖率,采用免疫组化二步法检测脂肪细胞自噬活性标志物动物自噬启动蛋白1(ULK1)、自噬效应蛋白1(Beclin1)、人自噬相关蛋白5(Atg5)、p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ表达水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测脂肪细胞炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、IL-4、IL-10、IL-13和转化生长因子(TGF)-β的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脂肪细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子classⅠ-PI3K、磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)、Akt、mTORC1、ULK1、结节性硬化症(TSC)1、TSC2的表达。结果:与空白组比较,造模组体质量和Lee’s指数显著升高(P<0.01),肥胖率>20%,有形体肥胖、活动度下降,食欲下降,皮毛无光泽、蓬松,便溏,对外界反应能力下降,饮水量减少等痰湿证表现,与正常组比较,模型组体质量、Lee’s指数、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、促炎和抗炎细胞因子水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),脂肪细胞classⅠ-PI3K、PIP3、Akt、mTORC1、TSC1、TSC2蛋白表达显著下降(P<0.01),但ULK1表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各用药组体质量、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1、IL-4、IL-13水平明显降低(P<0.05,P<0.01),且雷帕霉素组、温胆汤中、高剂量组IL-10、TGF-β水平显著降低(P<0.01),奥利司他组TGF-β的表达显著降低(P<0.01),信号通路关键分子蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),但ULK1显著降低(P<0.01)。与雷帕霉素组比较,温胆汤各剂量组脂肪细胞所有自噬活性标志物蛋白表达显著升高(P<0.01),温胆汤低剂量组炎性因子(除TNF-α外)含量明显升高(P<0.05,P<0.01),信号通路关键分子蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),温胆汤中剂量组炎性因子(除IL-16、MCP-1、IL-10外)含量明显升高(P<0.05,P<0.01),温胆汤中、高剂量组信号通路各关键分子蛋白除PI3K外表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与奥利司他组比较,温胆汤低、中剂量组脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达显著升高(P<0.01),温胆汤低剂量组IL-6、IL-4、TGF-β含量显著升高(P<0.01),所有信号通路关键分子蛋白表达显著降低(P<0.01),温胆汤中剂量组IL-4含量显著升高(P<0.01),信号通路关键分子蛋白除PI3K外表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),温胆汤高剂量组体质量、自噬活性标志物ULK1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),信号通路关键分子PIP3、mTORC1、TSC1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),而自噬活性标志物Beclin1、Atg5蛋白、炎性因子TNF-α、IL-13含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:肥胖痰湿证炎症状态的形成与PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬密切关联,且温胆汤可有效干预肥胖痰湿证大鼠的慢性炎症状态,其作用机制可能与调控该信号通路进而改善脂肪细胞自噬有关。

温胆汤对肥胖痰湿证大鼠糖脂代谢及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠糖脂代谢、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路关键分子蛋白表达的影响,探讨温胆汤干预肥胖痰湿证改善糖脂代谢的内在机制。方法:将126只大鼠随机分成2组:空白组16只,造模组110只,空白组采用基础饲料喂养,造模组采用高脂饲料喂养,共8周,制作肥胖痰湿证动物模型。造模成功后,视体质量情况,按序淘汰体质量过轻者,遴选出40只肥胖大鼠,随机分为模型对照(MC)组、奥利司他(ORLI)组、温胆汤低(WDD-L)、中(WDD-M)、高剂量(WDD-H)组,每组8只;另在空白组大鼠中随机选取8只设为正常对照(NC)组。ORLI组(32.40 mg/kg)、WDD-L组、WDD-M组和WDD-H组[按4.45、8.90、17.80 g/kg剂量(以生药量计算)]给予灌胃,MC和NC组则均给予等量蒸馏水灌胃,每天1次,共6周。治疗结束后,检测并计算大鼠体质量、Lee’s指数、脂体比和肥胖率,采用全自动生化分析仪检测大鼠血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及空腹血糖(FBG)水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹胰岛素(FINS),并计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用Western Blot检测腹周脂肪细胞PI3K/Akt信号通路关键分子PI3K、PIP3、p-Akt、Akt蛋白表达。结果:与空白组比较,造模组体质量和Lee’s指数显著升高(P<0.01),肥胖率>20%,有形体肥胖,活动度降低,食欲降低,皮毛无光泽、蓬松,便溏,对外界反应能力降低,饮水量减少等痰湿证型症状,说明高脂饲料喂养可成功复制肥胖痰湿证大鼠模型。与NC组比较,MC组大鼠体质量、Lee’s指数、脂体比显著升高(P<0.05,P<0.01),血脂、FBG、FINS及HOMA-IR水平均显著改变(P<0.01),腹周脂肪细胞PI3K、PIP3、p-Akt、Akt蛋白表达显著降低(P<0.01)。与MC组比较,各用药组大鼠肥胖痰湿证型症状显著改善,大鼠体质量、脂体比显著降低(P<0.05,P<0.01),血脂、FBG、FINS及HOMA-IR水平显著改善(P<0.05,P<0.01),腹周脂肪细胞PI3K、PIP3、p-Akt、Akt蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。与ORLI组比较,WDD-L、WDD-M组HDL-C水平显著降低(P<0.01)。结论:温胆汤能减轻肥胖大鼠体重,改善其痰湿证型症状,调节糖脂代谢,降低胰岛素水平,有效干预胰岛素抵抗,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的。