红花酒精外敷治疗静脉穿刺致皮下淤血疗效观察

目的探讨红花酒精外敷治疗静脉穿刺致皮下淤血的疗效。方法对笔者所在医院38例老年住院静脉穿刺致皮下淤血患者,用红花酒精外敷和传统50%硫酸镁湿敷疗效进行对比。结果随机将38例患者分为红花酒精外敷治疗组(观察组)和传统50%硫酸镁湿敷组(对照组),治疗效果显示:观察组痊愈率与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);显效、好转、无效率无差异(P>0.05)。结论红花酒精外敷治疗静脉穿刺致皮下淤血的疗效优于传统50%硫酸镁湿敷。

改进腕部识别带在提高老年患者安全度上的应用

目的：强化老年患者身份识别，提高患者的院内外安全度。方法：在目前腕部识别带标注内容基础上，增加患者子女等亲属或看护人姓名、电话，以及住院科室或主治大夫的电话。结果：改进后的腕部识别带应用于老年患者，可以保证患者短期离院期间发生各种意外或紧急情况下能及时联系到家属或医院科室人员，避免造成某些严重后果或引起纠纷。结论：改进后的腕部识别带提高了老年患者的安全度，可操作性强，值得临床推广应用。

Profilin在弓形虫侵入宿主细胞及诱导免疫应答中作用的研究进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布的专性细胞内寄生原虫,可寄生在除红细胞外的所有有核细胞中,引起人兽共患病。弓形虫主要通过粪口途径传播,以受损皮肤、黏膜及垂直传播为次要途径。感染后,弓形虫需侵入宿主细胞并形成纳虫空泡才能完成繁殖周期,研究表明弓形虫的肌动蛋白结合蛋白profilin(TgPRF)在调节虫体肌动蛋白聚合及侵入宿主细胞中发挥重要作用。同时,TgPRF也可通过Toll样受体(TLR)作为诱导宿主免疫应答尤其是固有免疫的优势抗原。本文就TgPRF的结构特点及其在虫体侵袭性、诱导宿主免疫应答方面的研究进行综述,为深入了解弓形虫的致病机制和免疫预防提供参考。

前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响

目的制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(TgPRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响。方法提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增TgPRF基因,并构建pET-30a(+)-TgPRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖昔(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白表达情况。目的蛋白经AKTA系统进行亲和层析纯化和超滤浓缩后进行蛋白质印迹分析(Western blotting).将2mg纯化的重组蛋白TgPRF与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,背部皮下多点注射免疫新西兰兔2只,首次免疫后每隔2周,用1mg纯化的重组蛋白空PRF与等体积弗氏不完全佐剂加强免疫3次,末次免疫后10d心脏采血。免疫后血清进行Western blotting鉴定及ELISA抗体效价检测。将胚胎成纤维细胞接种于96孔板中(4×10^3,个细胞/孔),并加入10^4个刚地弓形虫速殖子(RH-GFP)。设空白对照组(A组),抗体干预组(Bl、B2和B3组),阴性血清组(C组)。B1、B2和B3组分别加入1:20、1:80、1:200稀释的抗TgPRF兔血清100μl;C组加入1:20稀释的免疫前兔血清100μl,每组均设3个复孔。培养72h后荧光显微镜观察,通过Imagepro6.0软件分析虫体增殖情况。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果PCR扩增TgPRF基因片段为510bp,pET-30a(+)-TgPRF经测序与目的序列完全一致。经IPTG诱导表达,TgPRF蛋白相对分子质量(M1)约为25000,且高表达条带主要存在于上清中。TgPRF蛋白经纯化浓缩后浓度为4mg/ml,Western blotting分析显示,在M1 25000处出现特异性条带。经细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测,抗TgPRF血清对胚胎成纤维细胞未见毒性损伤。ELISA检测抗ZgPRF血清抗体效价>1:10^5;各实验组细胞于感染24h时,A组(0.62±0.23)及C组(0.74±0.25)相对虫体数量高于B1组(0.35±0.16)(P<0.05),但与B2和B3组间差异无统计学意义(P>0.05),B1-B3组虫体增殖抑制率分别为43.5%、11.4%、3.6%。感染48h时,A组(3.61±0.66)与C组(3.38±0.78)相对虫体数量明显高于B1-B3组(P<0.01),而B1组(1.09±0.58)与B2组(1.92±0.73)低于B3组(2.47±0.84)(P<0.05),B1-B3组虫体增殖抑制率分别增高至69.9%、46.9%、31.7%;感染72h时,A组(19.90±3.92)与C组(20.61±4.07)相对虫体数量高于B1组(5.58±2.43)与B2组(8.06±2.66)(P<0.01),B3组(16.02±6.46)明显升高。B1-B3组抑制率分别为72.0%、59.5%、19.5%。结论弓形虫TgPRF蛋白能有效刺激新西兰兔产生抗体,且TgPRF兔血清抗体在体外能有效抑制弓形虫速殖子在小鼠胚胎成纤维细胞中的增殖并呈现明显的量效关系,但并不能完全消除虫体。

弓形虫profilin抗体体外抗速殖子增殖及保护作用动态观察

目的探讨弓形虫profilin(TgPRF)抗体对弓形虫体外增殖的影响以及细胞生长和凋亡的动态变化。方法1)将rTgPRF蛋白背部皮下多点注射免疫新西兰兔4次,末次免疫后10 d心脏采血,ELISA检测抗体效价。2)检测抗体对速殖子的直接杀伤作用,用10^8个速殖子(RH-GFP)感染小鼠胚胎成纤维细胞20 h后,加入1∶40抗血清以及YOYO-1死亡探针孵育观察5 h。3)评估TgPRF抗体对速殖子增殖的影响:将3×10^3细胞/孔接种96孔板并加入6×10^3个速殖子(RH-GFP),同时分别加入1∶40、1∶80、1∶160稀释的抗血清作为干预组,设空白组(仅培养基)和阴性血清组(1∶40稀释免疫前兔血清),培养72 h并间隔12 h拍照,通过Image pro 6.0软件分析虫体增殖情况。4)采用IncuCyte ZOOMTM系统对TgPRF抗体干预后的细胞生长和凋亡进行动态监测:设未感染孔为正常对照组和抗血清对照组(加入1∶40抗TgPRF血清)。感染孔加入6×10^3个速殖子(RH),分别在感染时或感染12 h后加入1∶40、1∶80、1∶160抗TgPRF血清作同步干预或延迟干预,空白组及阴性血清组设置如前。各孔均加入caspase3/7凋亡探针继续观察72 h,记录细胞凋亡情况。结果rTgPRF诱导特异性抗体产生,ELISA检测抗体效价>1∶10^5。镜下未见TgPRF抗体对速殖子的直接杀伤作用。体外干预试验中,空白组和阴性血清组的相对虫体量在实验结束时分别为24.27±7.78和25.72±4.04,差异无统计学意义(P>0.05),并伴有大量细胞缺失;TgPRF抗体抑制虫体增殖,实验结束时1∶40组、1∶80组和1:160组相对虫体量分别为6.32±1.10、9.35±1.32和17.88±1.47,抑制率分别为73.5%、61.5%和26.3%,呈剂量-效应关系。同步干预时各干预组均显示通过抑制虫体增殖不同程度地保护细胞,其中1∶40组细胞生长恢复正常,细胞融合度显著高于空白组和阴性血清组(P<0.01);弓形虫诱导细胞凋亡增加,但各感染组间差异无统计学意义(P>0.05)。TgPRF抗体延迟干预的保护效果有所降低,但诱导细胞凋亡增强,其中1∶40组细胞凋亡率显著高于空白组和阴性血清组(P<0.05)。镜下观察TgPRF抗体干预使凋亡多集中在细胞缺失区域或速殖子增殖区域,而空白组和阴性血清组的凋亡则散布视野。结论弓形虫TgPRF抗体镜下未见直接杀伤弓形虫,但在体外能抑制弓形虫速殖子增殖并促进感染细胞凋亡。