医药类高职院校“1+3+X”教师能力标准体系构建与评价

在职业教育数字化转型、新型“双师型”教师队伍建设与“健康中国”“新医科”建设背景下,医药类高职院校教师的能力标准体系构建与评价至关重要。构建包含一个明确导向、三大教师能力模块和医学特色创新能力发展模块的医药类高职院校“1+3+X”教师能力标准与评价体系,实证重庆三峡医药高等专科学校在创新创业成果、健康服务水平、师生技能大赛、教学团队建设、科普+文化、党建荣誉和教师荣誉等方面能力标准建设取得的成效与反思,以期为医药学科教师队伍建设提供参考。

青枯雷尔氏菌温度相关致病基因yqhE功能研究

不同温度下青枯雷尔氏菌表达谱PPI网络分析发现,yqhE可能是青枯雷尔氏菌新的温度相关致病基因。克隆青枯雷尔氏菌CBM613的yqh E基因,结果发现该基因长度为831 bp,共编码276个氨基酸。基因敲除结果显示,28℃培养的yqhE突变株较野生型菌株致病力降低,病程延长,但并未彻底丧失致病力。20℃和28℃培养的yqh E突变株维生素C的生物合成皆被抑制;与28℃相比,20℃培养下野生型菌株维生素C的合成能力降低。突变株在20℃和28℃培养下甲基乙二醛(MG)和丙二醛(MDA)明显积累,其中20℃积累更多;20℃培养的野生型菌株MG和MDA比28℃积累更多。维生素C的生物合成被抑制导致青枯雷尔氏菌自由基清除能力减弱与氧化应激反应增强,MG和MDA积累产生细胞毒性,上述结果可能与28℃培养的突变株致病力减弱,20℃培养的野生型菌株致病力丧失有关。综上结果表明yqhE是青枯雷尔氏菌温度相关致病基因。

柑橘溃疡病菌EMA-PCR快速活体检测技术的建立

传统PCR方法不能诊断柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri Gabriel)的死活状态,往往导致假阳性检测结果。本研究将特异性核酸染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)与PCR技术结合,旨在建立柑橘溃疡病活菌的快速检测技术。根据柑橘溃疡病菌独有的保守蛋白基因设计特异性引物扩增出278bp的靶带,PCR反应的检测下限为25个细胞/25μL或2.75pg/25μL。EMA-PCR结果表明:当卤钨灯曝光时间1min,EMA终浓度为1.0mg/L时,能有效抑制1.0×108 cfu/mL死菌的扩增;当EMA的浓度小于30mg/L时,EMA对上述相同浓度活菌靶基因的扩增没有明显的抑制。EMA-PCR对死活混合菌的扩增表明,活菌数在6.875×101～6.875×105 cfu/PCR范围时,荧光强度与混合体系中活菌的对数值有线性关系。基于以上建立的EMA-PCR活体检测技术,对疑似带病柑橘材料进行检测,结果发现能降低柑橘溃疡病菌检测过程中的假阳性,有望为柑橘溃疡病的检疫检验提供更科学的技术手段。

油菜MADS-box家族基因AGL11的克隆、表达及转化油菜的研究

【目的】本研究为油菜种子中油脂合成分子调控机理提供新的线索。【方法】通过定量PCR分析油菜AGL11基因的组织表达模式,同时构建AGL11的干扰载体。【结果】生物信息学分析发现油菜AGL11具有完整且典型的MADS-box保守结构域,蛋白整体形态呈现典型的DNA核酸结合结构,属于MADS-box家族转录调控因子,亲源关系与拟南芥AGL11蛋白最近。定量PCR研究发现,AGL11在油菜盛花期和果夹5DAP(盛花后5 d的种子)表达量最高,实验成功构建了RNA干扰载体。【结论】AGL11基因在油菜种子发育和油脂积累过程中强烈表达,该基因可能在种子发育及油脂的合成中发挥着重要作用。RNA干扰载体的构建成功将为后续获得转基因油菜,观察转基因油菜胚的发育和种子油脂的积累,从而确定AGL11在油菜胚的发育及油脂的合成中发挥着重要作用。

油菜素内酯的生物合成及信号转导研究进展

油菜素内酯作为一类甾醇类激素,在植物体内广泛分布。油菜素内酯在植物细胞生长、根茎伸长、种子发芽、生殖发育和向性建成等生长发育过程中发挥着重要作用。本文综述了BR生物合成和信号转导途径近年来的重要进展。

赤霉素的生物合成和信号转导研究进展

赤霉素(Gibberellins,简称GAs)作为一种调节激素,在植物生长发育过程中有重要的作用。它参与调控植物发育和各种生理过程,包括茎的伸长、根的生长、叶片伸展、种子萌发、花和果实的发育以及表皮毛发育等。本文综述了近年来赤霉素生物合成和信号转导途径的研究进展。

油菜MADS-box家族基因AGL13表达分析及RNA干扰载体的构建

为探索油菜种子中油脂合成的分子调控机理,提高油脂含量,改良油菜品质奠定基础。通过定量PCR分析油菜AGL13基因的组织表达模式,同时构建AGL13的干扰载体。生物信息学分析发现油菜AGL13具有完整且典型的MADS-box保守结构域,蛋白整体形态呈现典型的DNA核酸结合结构,属于MADS-box家族转录调控因子,亲源关系与拟南芥AGL13蛋白最近。定量PCR研究发现AGL13在油菜盛花期到种子45DAP(盛花后45 d的种子)表达水平都很高,其中在果夹15DAP表达水平最高,实验成功构建了RNA干扰载体。结果表明,AGL13基因在油菜种子发育和油脂积累过程中强烈表达,该基因可能与油菜种子发育及油脂的合成密切相关。RNA干扰载体的构建成功将为后续获得转基因油菜,观察转基因油菜胚的发育和种子油脂的积累,从而明确AGL13在油菜胚的发育及油脂的合成中发挥着重要作用。

医学院校生物化学实验教学改革探讨

生物化学是医学专业的一门重要的基础学科,本文总结了当前生物化学实验教学存在的问题,提出了生物化学实验教学改革的思路与方案,包括对实验课程的设置与改革;改革实验内容,优化实验项目;教材的选择和编写;优化教学方法,增强教学效果;完善实验考核评价体系。

与植物种子油脂合成相关的MADS-box转录因子研究进展

MADS-box转录因子由MADS-box基因编码,是一类关键的转录调控因子.MADS-box转录因子在植物激素信号传导、果实的形成、成熟和种子油脂的合成等方面扮演了重要的作用.本文综述了MADS-box转录因子的结构、植物种子油脂合成的途径以及与植物种子油脂合成相关的转录因子的研究进展.

地方高校生物技术本科工程类课程群建设初探

生物技术本科工程类课程群是专业课中核心的教学模块,是学生专业实践能力培养的重要环节,作为培养应用型人才为主的地方院校,其生物技术专业的工程类课程群应融入应用型人才培养理念,实施课程群模块化教学,加强工程化的意识培养,围绕社会实际所需的实践能力改革教学内容体系。

杨树基因工程研究进展

杨树是世界上栽培广泛的造林树种之一,还是造纸与包装材料的重要原料。随着生物技术与现代分子生物学的发展,杨树的遗传改良工作取得了重要的进展。本文从抗虫、抗病、木质素改良等方面,综述了通过基因工程方法进行的杨树遗传改良研究。

利用EMA-qPCR建立快速检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法

利用叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合(EMA-qPCR),建立了一种有效快速检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法。以猕猴桃溃疡病菌ITS序列为检测靶标,菌体经EMA渗透处理,再进行qPCR特异性扩增。结果显示,qPCR检测灵敏度为2cfu;当EMA的浓度为2.0μg/mL时,能有效抑制1.0×10~7 cfu/mL经高温灭活的死菌的扩增,对活菌的扩增没有影响。当活菌数在1.0×10~1~1.0×10~5 cfu范围内,每个qPCR反应体系中活菌数与Ct值呈线性相关(R^2=0.988)。不同温度处理活菌菌悬液后用EMA-qPCR检测猕猴桃溃疡病菌的存活情况并与平板计数法进行比较,结果表明待检样品可在4℃和20℃短期保存。对疑似带病猕猴桃材料进行EMA-qPCR检测,结果表明能减少猕猴桃溃疡病菌PCR的假阳性结果。本研究建立的EMAqPCR方法是一种有效检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法,能有效避免PCR检测实际样品可能造成的假阳性结果。

木香烃内酯对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、迁移和凋亡的影响及机制研究

目的:研究木香烃内酯对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、迁移和凋亡的影响及机制。方法:取对数生长期的SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度(10、20、30、40、50μmol/L)的木香烃内酯作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率。将细胞分为空白对照组和木香烃内酯10、20、30μmol/L浓度组,采用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态及凋亡情况,并计算细胞凋亡率;采用细胞划痕试验检测细胞的迁移能力,并计算迁移率;采用Western blotting法检测细胞中B淋巴细胞瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和分裂型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白的相对表达水平。结果:木香烃内酯对SK-BR-3细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),且呈现浓度和时间依赖趋势。空白对照组细胞轮廓清晰、形态规则、贴壁较好;与空白对照组比较,木香烃内酯10、20、30μmol/L浓度组细胞数量明显减少,细胞结构松散、体积缩小、间隙变大,且多数细胞轮廓消失、变圆,贴壁不良;细胞迁移率和Bcl-2蛋白的相对表达水平均显著降低,细胞凋亡率和Bax、Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白的相对表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:木香烃内酯能抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和迁移,诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3表达,下调Bcl-2表达有关。

去氢木香内酯抑制人肝癌细胞系HepG2增殖及促凋亡

目的研究去氢木香内酯(Dehy)对人肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并对分子机制进行一定的探索。方法将HepG2细胞分为对照组、Dehy 10、20、30、40及50μmol/L组。MTT法检测细胞增殖;Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡;Western blot检测p-IκBα、IκBα、nuclear-p65和total-p65蛋白表达。结果与对照组相比,Dehy明显呈剂量与时间依赖性抑制HepG2细胞的增殖,并显著诱导HepG2细胞凋亡(P<0.05或P<0.01);p-IκBα、nuclear-p65蛋白表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01),IκBα蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),而total-p65未见明显变化。结论Dehy抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡,其作用机制可能与下调NF-κB通路有关。

外源茉莉酸甲酯诱导竹根姜对青枯菌的抗性

以竹根姜幼苗为材料,采用室内水培试验和茎基部注射接种姜青枯菌方法,探讨外源茉莉酸甲酯(MeJA)诱导竹根姜产生姜瘟病抗病性的生理生化机制。结果显示:外源MeJA处理可以显著降低竹根姜的病情指数,提高对姜瘟病的抗性,而对青枯菌的致病力没有直接的抑制作用。MeJA处理可促进竹根姜内源H2O2在前期迅速积累,同时诱导增强姜块内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化氢酶(CAT)等防御酶以及病程相关蛋白几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性,促进姜块内木质素含量上升。研究表明,MeJA能通过调控竹根姜细胞内下游信号分子H2O2的水平来提高防御相关酶的活性和病程相关蛋白的表达,促进木质素的合成,提高了竹根姜的抗病性。

木香烃内酯对乳腺癌SK-BR-3细胞周期分布及凋亡的影响

目的:研究木香烃内酯(COS)对人乳腺癌SK-BR-3细胞周期分布及凋亡的影响,并探讨其机制。方法:将人乳腺癌SK-BR-3细胞分为空白对照组和COS10、20、30、40、50μmol/L组,用MTT法检测COS对细胞增殖的影响。另将细胞分为空白对照组和COS低、中、高浓度组(10、20、30μmol/L),培养24h后,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,采用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡情况,采用Westernblot法检测抑癌因子p53、胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白E(cyclinE)蛋白的表达情况。结果:与空白对照组比较,COS可显著抑制SK-BR-3细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),且呈浓度和时间依赖趋势。低、中、高浓度的COS均可诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于G1/S期(P<0.05或P<0.01);并可显著上调p53、caspase-3、Bax、p21蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),显著下调Bcl-2、CDK2、cyclinE蛋白的表达(P<0.01)。结论:COS能抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖,并诱导细胞凋亡和周期阻滞;其作用机制可能与调控p53/Bax/Bcl-2/caspase-3凋亡信号通路有关。

医学专科学校微生物实验教学思考

微生物实验教学是医学专科学校微生物学教学的有机组成部分。本文总结了我国医学专科学校微生物实验教学中存在的一些问题,提出了有益的思考。

利用MTT建立一种快速检测青枯菌活菌的方法

利用四氮唑蓝(MTT),优化了检测波长、菌浓度、MTT用量、MTT反应时间、三联液的用量和溶解时间等,建立一种有效快速检测青枯菌活菌的方法。结果发现,MTT反应的最佳检测波长为512 nm,青枯菌浓度A_(600)为0. 3,MTT用量为30μL,MTT还原反应控制在20 min以内,三联液溶解甲臜晶体的用量为3 m L,溶解8 h,甲臜溶液在10～120μL以内与A512的数值线性关系良好,平板计数印证了这一结果。实验结果表明,MTT法可以用于快速检测青枯菌等植物病原菌活菌,对农产品进出口检验检疫具有一定的应用价值。

EMA-qPCR方法快速检测番茄溃疡病菌活菌研究

将叠氮溴乙锭(EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合(EMA-q PCR),建立一种有效快速检测番茄溃疡病活菌的方法。以番茄溃疡病菌Pat-1基因为检测靶标,菌体经EMA渗透处理,再进行q PCR特异性扩增。结果显示,q PCR检测灵敏度为1.0×101CFU/m L;当EMA的浓度为2.0μg/m L时,能有效抑制1.0×107CFU/m L灭活死菌的扩增,对活菌的扩增没有影响。当活菌数在1.0×101~1.0×105CFU内,每个q PCR反应体系中活菌CFU数与Ct值呈线性相关(R2=0.987)。不同温度处理后EMA-q PCR检测番茄溃疡病菌的存活情况并与平板计数法进行比较,表明待检样品可在4和20℃短期保存。对疑似带病番茄种子样品进行EMA-q PCR检测,发现EMA-q PCR方法能减少番茄溃疡病菌PCR检测的假阳性结果。本研究建立的EMA-q PCR方法是一种能有效检测番茄溃疡病活菌的方法,并能有效避免PCR检测实际样品可能造成的假阳性结果。

家蚕微孢子虫类枯草杆菌蛋白酶Nbslp2的保守性及转录活性分析

为研究家蚕微孢子虫类枯草杆菌蛋白酶Nbslp2的保守性及转录活性,采用生物信息学相关软件对微孢子虫类枯草杆菌蛋白酶slp2基因共线性、多重序列及系统进化进行比对分析,并通过Western blot分析Nbslp2在家蚕微孢子虫、柞蚕微孢子虫及纳卡变形微孢子虫中的表达特征,以验证其保守性;进一步以感染家蚕微孢子虫不同天数的家蚕中肠组织为材料,利用RT-PCR检测Nbslp2的转录活性。共线性、多重序列比对及系统进化分析发现,Nbslp2在微孢子虫基因组中的位置较保守,Western blot结果显示Nbslp2抗体在柞蚕微孢子虫总蛋白中杂交出2条带,而在纳卡变形微孢子虫没有杂交条带,说明Nbslp2相对保守,并且可将Nbslp2作为区分柞蚕微孢子虫和纳卡变形微孢子虫的靶标;RT-PCR结果显示Nbslp2在感染家蚕微孢子虫后72 h检测到转录活性,进一步推测Nbslp2可能在家蚕微孢子虫感染家蚕早期发挥作用,为分子水平深入研究Nbslp2的功能奠定理论基础。