自噬在镉致小鼠睾丸血-睾屏障损伤中的作用

目的:探究自噬在氯化镉致小鼠睾丸血-睾屏障(BTB)损伤中的作用。方法:将20只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组[0 mg/(kg·d)]、低剂量组[0.5 mg/(kg·d)]、中剂量组[1.0 mg/(kg·d)]和高剂量组[2.0 mg/(kg·d)],腹腔注射氯化镉,连续28 d。采用HE染色法分析睾丸组织形态学变化,生物示踪法观察BTB的完整性,Western印迹检测BTB组分ZO-1和N-Cadherin蛋白的表达。采用0、2.5、5和10μmol/L CdCl_(2)处理睾丸支持细胞株(TM4细胞)24 h,Western印迹检测ZO-1和N-Cadherin蛋白,以及自噬相关蛋白LC3II和p62的变化情况。在含CdCl_(2)(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂氯喹(CQ)(5μmol/L)或自噬激动剂雷帕霉素(Rap)(50 nmol/L)处理细胞24 h,Western印迹检测LC3II、p62、ZO-1和N-Cadherin蛋白表达。结果:与对照组小鼠相比,镉染毒组小鼠的生精小管间隙增大、生精细胞内空洞形成,层次减少、排列紊乱,BTB完整性受到破坏;中、高剂量CdCl_(2)组小鼠的睾丸组织中ZO-1和N-Cadherin蛋白表达含量显著下调(P<0.05)。与对照组细胞相比,CdCl_(2)染毒组细胞中ZO-1和N-Cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01),而LC3II和p62蛋白表达则显著上调(P<0.05)。与CdCl_(2)组细胞相比,自噬抑制剂CQ和CdCl_(2)共处理组细胞中ZO-1、N-Cadherin、LC3II和p62蛋白表达均显著上调(P<0.01);自噬激动剂Rap和CdCl_(2)共处理组细胞中ZO-1、N-Cadherin和p62蛋白表达显著下调(P<0.05),而LC3II蛋白表达上调(P<0.05)。结论:氯化镉可破坏小鼠BTB的完整性,其机制可能与镉能够增强睾丸支持细胞中自噬水平,调控BTB蛋白表达含量相关。

eSIR模型评估精神障碍人群COVID-19感染风险的可行性

目的评价eSIR模型用于评估精神障碍人群COVID-19感染风险的可行性。方法在PubMed数据库,以“COVID-19”、“Mental disorders”、“Epidemiology”为搜索词进行检索,寻找公开发表的在精神障碍人群内的COVID-19爆发案例,根据纳入标准,选择韩国庆尚北道清道大南医院精神病封闭病房和荷兰奈梅亨Canisius-Wilhelmina医院(CWZ)的精神病科2个单位。采用e SIR模型对精神障碍人群的COVID-19感染风险进行评估,采用R软件(4.0.5版本)进行分析,预测COVID-19爆发期间的每日累计感染人数。结果eSIR模型预测结果显示:韩国清道大南医院精神病封闭病房于2020年2月15日出现第一例COVID-19感染者,然后不断增加,于2月25日附近达到峰值,累计感染个体约为108人,后逐渐下降;荷兰奈梅亨CWZ精神病科于2020年3月13日出现第一例COVID-19感染者,然后不断增加,于3月28日附近达到峰值,累计感染个体约为11人,后逐渐下降。结论用eSIR模型对精神障碍人群的COVID-19感染风险进行评估,预测效果与实际感染情况相符,可推广用于精神障碍群体COVID-19感染风险的评估。

铁死亡参与磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯所致的雄性青春期小鼠睾丸损伤

目的探究铁死亡在磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯[Tri(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate,TDCIPP]致雄性小鼠睾丸损伤中的作用。方法于2021年12月,选取30只健康3周龄雄性C57BL/6小鼠,体重(13±2)g,适应性饲养1周后,根据随机数字表分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、铁死亡抑制剂组,每组6只;低、中、高剂量组小鼠分别采用5、25、125 mg/(kg·d)TDCIPP连续灌胃染毒28 d,对照组采用等量玉米油灌胃处理28 d;铁死亡抑制剂组采用125 mg/(kg·d)TDCIPP连续灌胃28 d,且每周用30 mg/kg甲磺酸去铁胺(DFO)生理盐水溶液进行腹腔注射3次。处理结束后,处死小鼠,分离小鼠附睾,进行精子计数;采用HE染色观察小鼠睾丸组织形态学变化,检测睾丸组织中铁离子含量,活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量,检测小鼠睾丸细胞线粒体膜电位水平;Western blot检测睾丸组织谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、内环氧化酶2(COX2)蛋白表达量。结果与对照组比较,中、高剂量组小鼠睾丸组织中生精细胞排列紊乱,呈现空泡状结构,附睾中精子数量明显降低(P=0.009、0.004),精子畸形率明显上升(P=0.010、0.000);小鼠睾丸组织中ROS水平、铁离子含量以及MDA含量明显升高(P<0.05),小鼠睾丸细胞线粒体膜电位明显下降(P=0.049、0.002),铁死亡相关蛋白GPX4含量明显降低、COX2含量明显上升(P<0.05);与高剂量组比较,铁死亡抑制剂组小鼠生精细胞排列较为紧密正常,睾丸组织内ROS和铁离子含量明显降低(P<0.01);GPX4蛋白表达水平明显升高,COX2蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论铁死亡可能参与青春期TDCIPP暴露引起的雄性小鼠睾丸组织损伤。

Ferroptosis is involved in testicular injury induced by TDCIPP in adolescent male mice

Objective To investigate the role of ferroptosis in testicular injury in adolescent male mice induced by TDCIPP.Methods In December 2021,30 healthy 3-week-old male C57BL/6 mice,with a body weight of(13±2)g,were selected and fed adaptively for one week.

氧化镉对青春前期雄性大鼠睾丸自噬水平和血睾屏障完整性的影响

目的以氯化镉(CdCl2)染毒青春前期雄性SD大鼠和睾丸支持细胞(TM4细胞),研究镉暴露对睾丸自噬水平和血睾屏障完整性的影响。方法于2021年7月,将9只4周龄雄性SD大鼠随机分为3组:对照组(生理盐水)、低剂量组(1 mg/kg体重CdCl2溶液)、高剂量组(2 mg/kg体重CdCl2溶液),采用腹腔注射的方式进行染毒。24 h后采用HE染色法观察大鼠睾丸组织形态学变化,生物示踪法观察血睾屏障的完整性,并检测睾丸组织中微管相关蛋白轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ的表达水平。0、2.5、5.0和10.0 μmol/L CdCl2溶液处理TM4细胞24 h检测镉的毒作用,将细胞分为空白组(未染毒)、染毒组(10 μmol/L CdCl2)、实验组[10 μmol/L CdCl2+60 μmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)]和抑制剂组(60 μmol/L 3-MA),处理24 h后,Western blot分析LC3-Ⅱ、泛素结合蛋白p62、紧密连接蛋白ZO-1和黏附连接蛋白N-cadherin的表达情况。结果高剂量组大鼠睾丸组织形态结构发生明显变化,曲细精管分布不均匀,形态不规则,生精上皮变薄,结构疏松,细胞排列紊乱,细胞核异常深染,支持细胞出现空泡;生物示踪法结果显示低剂量组和高剂量组大鼠血睾屏障完整性受到破坏;Western blot结果发现与对照组比较,低、高剂量组大鼠睾丸组织中LC3-Ⅱ表达水平升高,差异有统计意义(P<0.05)。与0 μmol/L比较,5.0、10.0 μmol/L CdCl2染毒后,TM4细胞中ZO-1和N-cadherin表达水平明显下降,p62表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与染毒组比较,实验组TM4细胞p62表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显下降,ZO-1和N-cadherin相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论镉对雄性SD大鼠生殖系统的毒性作用机制可能与影响睾丸组织细胞自噬水平和破坏血睾屏障完整性有关。

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的探究活性氧(reactive oxygen species,ROS)在氯化镉(cadmium chloride,CdCl_(2))诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法以不同浓度CdCl_(2)(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl_(2)对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl_(2)染毒TM3细胞24 h,Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果CdCl_(2)染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl_(2)染毒组细胞Caspase-9蛋白表达水平为0.86±0.10,较对照组(0.56±0.07)升高(P<0.05);5和10μmol/L CdCl_(2)染毒组细胞cleaved Caspase-3蛋白表达水平分别为0.65±0.03和1.05±0.13,较对照组(0.37±0.11)升高(P<0.05);5和10μmol/L CdCl_(2)染毒组细胞内ROS含量分别为60.47±1.39和80.63±1.34,亦较对照组(46.80±1.24)增加(P<0.05)。与镉染毒组相比,NAC抑制了Caspase-9(CdCl_(2)组:0.89±0.07;CdCl_(2)+NAC组:0.28±0.02)和cleaved Caspase-3(CdCl_(2)组:1.53±0.21;CdCl_(2)+NAC组:0.66±0.07)蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05);同时CdCl_(2)+NAC组ROS水平(62.64±0.93)也较CdCl_(2)染毒组(80.13±0.94)降低(P<0.05)。5和10μmol/L CdCl_(2)染毒组细胞Caspase-9 mRNA水平与对照组(0.97±0.10)相比分别升高为1.40±0.14和1.90±0.12(P<0.05),cleaved Caspase-3 mRNA水平与对照组(0.88±0.08)相比分别升高为1.42±0.11和1.59±0.12(P<0.05),但Bcl-2 mRNA水平与对照组(0.94±0.02)相比分别降低为0.60±0.02和0.50±0.09(P<0.05)。与镉染毒组相比(0.57±0.06),CdCl_(2)+NAC组镉诱导的Bcl-2 mRNA表达水平显著改善(0.92±0.03),Caspase-9(CdCl_(2)组:1.96±0.07;CdCl_(2)+NAC组:1.04±0.02)和Caspase-3(CdCl_(2)组:1.65±0.02;CdCl_(2)+NAC组:0.66±0.04)的表达水平降低(P<0.05)。结论小鼠睾丸间质细胞TM3中的Caspase级联反应可被CdCl_(2)诱导的过量ROS激活,抑制ROS可显著降低CdCl_(2)诱导的TM3细胞凋亡。

黄芩苷调控炎症因子缓解脑缺血再灌注大鼠皮层神经细胞损伤的研究

目的研究黄芩苷对脑缺血再灌注大鼠皮层神经细胞损伤的影响。方法根据随机数字表将28只SD大鼠分为四组:假手术组、模型组、黄芩苷低浓度(100mg/kg)组、黄芩苷高浓度(200mg/kg)组,每组7只。采用大脑中动脉栓塞法构建脑缺血2h再灌注24h。随后采用Longa′s 5分法进行神经功能评分;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价脑梗死体积;HE染色观察皮层神经细胞损伤;免疫荧光染色法检测炎症相关因子GPR30、TLR4和NALP3的表达。结果四组大鼠的神经功能评分分别为0、3.2±0.3、2.6±0.2、2.2±0.18,脑梗死体积百分率分别为0、(33.84±2.12)%,(26.53±1.89)%,(20.45±1.32)%。HE染色结果显示,模型组皮层区神经细胞相比假手术组发生明显坏死,黄芩苷处理使皮层神经细胞坏死情况被显著改善。免疫荧光结果显示,与假手术组相比,模型组TLR4和NALP3蛋白荧光强度增强,GPR30的荧光强度降低,给予黄芩苷处理后TLR4和NALP3蛋白荧光强度减小,GPR30的荧光强度增强。结论脑缺血再灌注损伤导致了大鼠皮层损伤并介导了神经细胞炎症反应,黄芩苷可以通过降低炎症反应缓解脑缺血再灌注造成的神经损伤。

蔬菜水果摄入与前列腺癌风险的Meta分析

目的系统评价蔬菜水果摄入与前列腺癌(prostate cancer,PCa)风险之间的关系,为前列腺癌的预防策略提供相关依据。方法计算机检索Pubmed、Embase、Web of science数据库,查找评价蔬菜和/或水果摄入与前列腺癌风险之间关系的队列研究以及相关文献,对纳入的文献进行质量评级,采用R软件(4.0.3版本)进行Meta分析。结果共纳入20篇队列研究,4项研究仅报道了水果摄入与前列腺癌风险的关联,4项研究仅报道了蔬菜摄入与前列腺癌的风险的关系,12项研究同时报道了水果与蔬菜摄入与前列腺癌风险。Meta分析结果提示,高摄入组经膳食摄入蔬菜虽然存在降低前列腺癌发生风险的现象,然而其差异并不存在统计显著性(RR=0.97;95%CI:0.94~1.01,P=0.11;I^(2)=21.3%,P=0.21)。水果摄入与前列腺癌的风险不存在显著相关性(RR=1.00;95%CI:0.96~1.04,P=0.99)。结论蔬菜和/或水果的摄入与前列腺癌风险不存在显著相关性。