平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫大鼠神经元凋亡的影响

目的:探究平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫大鼠的相关凋亡基因表达及其微结构的影响。方法:颅内注射海人酸建立难治性癫痫大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、卡马西平组、平肝止痫复方组、平肝止痫复方联合卡马西平组,每组6只。各组大鼠给予相应药物28天后处死取脑组织,通过透射电子显微镜观察大鼠海马区神经元超微结构,并记录大鼠癫痫发作抽搐情况;按原代大鼠海马神经元将大鼠分为对照组、模型组、溶剂含药血清组、卡马西平含药血清组,平肝止痫复方联合卡马西平含药血清组,用TUNEL法观察并测算细胞凋亡指数,Western blot法检测BCL2-Associated X,Bax(Bax)、B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3)表达。结果:与假手术组大鼠比较,难治性癫痫大鼠神经元凋亡比例上升,凋亡速度增快。药物干预可降低凋亡细胞比例,并抑制其凋亡速度,平肝止痫复方联合卡马西平组效果优于卡马西平组;与对照组相比,模型组大鼠细胞凋亡指数、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2表达下降;与模型组比较,平肝止痫复方联合卡马西平含药血清组对神经元细胞凋亡指数、Bax、Caspase-3表达的抑制及Bcl-2表达的促进作用最明显。结论:平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫大鼠的神经元具有保护作用,可抑制其神经元的细胞凋亡。

平肝止痫复方联合卡马西平通过HMGB1/TLR4/NF-κB通路对难治性癫痫大鼠神经元损伤的影响

目的:探讨平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫大鼠神经元损伤的作用及机制。方法:将海人酸和苯妥英钠诱导制备的难治性癫痫大鼠分成模型组、卡马西平组、平肝止痫复方联合卡马西平组,另设假手术组。各组大鼠给予药物或生理盐水灌胃,每天1次,连续给药28 d后采用苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠海马病理变化;ELISA试剂盒检测大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β1的含量;TUNEL法观察海马组织的凋亡变化;qPCR及IHC法检测海马组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、核因子κB(NF-κB)和Toll样受体4(TLR4)的mRNA及蛋白表达变化。结果:与模型组相比,卡马西平组及联合用药组大鼠海马组织病理损伤减轻及细胞凋亡率下降,HMGB1、TLR4和NF-κB的表达量均显著下降(P<0.05),大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量均显著下降,TGF-β1的含量则显著增加(P<0.05);与卡马西平组比较,联合用药组大鼠海马组织病理损伤减轻,细胞凋亡率显著下降(P<0.05),HMGB1、TLR4和NF-κB的表达量也均下降,血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量均下降,TGF-β1含量则显著增加(P<0.05)。结论:平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫大鼠神经元有保护作用,其具体机制可能与调节HMGB1/TLR4/NF-κB通路抑制炎症反应有关。

平肝止痫复方联合卡马西平干预HMGB1/TLR4信号炎症通路的相关作用研究

目的研究平肝止痫复方联合卡马西平对难治性癫痫作用及机制。方法海人酸注射于Wistar大鼠海马CA3区的造模方法制作癫痫模型,予0.03 g/(kg·d)苯妥英钠连续灌胃14 d后结合Racine分级及脑电图筛选成功制作难治性癫痫模型78只。将制作完成的癫痫大鼠随机分为模型组、平肝止痫复方组、CBZ组、CBZ+平肝止痫复方低、中、高剂量组(L、M、H),每组13只,再加假手术组7只,共7组。分组后给予假手术组、模型组灌胃生理盐水,剩余大鼠分别以CBZ 0.03 g/(kg·d),平肝止痫复方1.32 g/(kg·d),CBZ+平肝止痫复方低剂量(CBZ+L)、CBZ+平肝止痫复方中剂(CBZ+M)、CBZ+平肝止痫复方高剂量(CBZ+H)组分别给予:0.03+0.66 g/(kg·d),0.03+1.32 g/(kg·d),0.03+2.64 g/(kg·d),灌胃给药8周;观察各组大鼠治疗前后体质量、各致痫组大鼠治疗后发作级别变化、各致痫组大鼠治疗后防卫反应分级变化、各致痫组发作平均持续时间变化,并对各组大鼠治疗后进行脑电图监测;8周药物灌胃结束后股动脉取血,ELISA分别检测各组难治性癫痫大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的表达;RT-PCR、Western Blot检测大鼠海马HMGB1、TLR4基因和蛋白表达。结果治疗后大鼠体质量变化:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组体质量明显增加,差异具有显著统计学意义(P<0.01);CBZ+L组体质量增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。各致痫组大鼠治疗后发作级别变化:CBZ+M、CBZ+H组与CBZ组比较,治疗后发作分级等级减少,差异有显著统计学意义(P<0.01)。各致痫组大鼠治疗后防卫反应分级:CBZ+M、CBZ+H组与CBZ组比较,药物灌胃后防卫反应等级减少,差异有显著统计学意义(P<0.01)。各致痫组大鼠治疗后癫痫发作平均持续时间:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组平均持续发作时间明显减少,差异有显著统计学意义(P<0.01);CBZ+L组平均发作持续时间减少,差异有统计学意义(P<0.05)。脑电图结果示CBZ+M、CBZ+H组均可显著抑制海人酸难治性癫痫大鼠的痫性放电;酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测TNF-α表达:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H大鼠血清TNF-α含量降低,差异有显著统计学意义(P<0.01),CBZ+L组大鼠血清TNF-α含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-1β表达:同卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组大鼠血清IL-1β含量显著降低,差异有显著统计学意义(P<0.01)。IL-6表达:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组大鼠血清IL-6含量降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)检测各组大鼠海马组织中HMGB1mRNA相对表达量:同卡马西平组比较,CBZ+L、CBZ+M、CBZ+H组大鼠海马HMGB1mRNA相对表达量均下降,差异有显著统计学意义(P<0.01)。各组大鼠海马组织中TLR4mRNA相对表达量:同卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组大鼠海马TLR4mRNA相对表达量均下降,差异具有显著统计学意义(P<0.01),CBZ+L组TLR4mRNA相对表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05);蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)检测各组大鼠海马组织中HMGB1蛋白表达:同卡马西平组相比,CBZ+L、CBZ+M、CBZ+H组大鼠海马HMGB1的蛋白表达量均显著下降,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。各组大鼠海马组织中TLR4蛋白表达:与卡马西平组比较,CBZ+M、CBZ+H组大鼠海马TLR4的蛋白表达量下降,差异具有显著统计学意义(P<0.01),CBZ+L组大鼠海马TLR4的蛋白表达量下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论平肝止痫复方联合卡马西平能降低海人酸难治性癫痫大鼠海马组织HMGB1、TLR4mRNA的相对表达量,显著下调海马组织异常升高的HMGB1、TLR4蛋白表达量;平肝止痫复方联合卡马西平能降低难治性癫痫大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平。提示平肝止痫复方联合卡马西平用药后可通过减少炎症因子释放,抑制胶质细胞活化,减少HMGB1释放,抑制HMGB1/TLR4炎症信号通路的传递,从而减少炎症因子释放,抑制神经元异常兴奋,达到保护神经元,发挥抗癫痫作用。

海马区胶质瘤1例报告

1.病例资料:患者女性,39岁,因反复头晕2+年,加重3天入院。2+年前患者无明显诱因出现头晕,呈阵发性发作,持续时间5~6秒,伴一过性视物模糊和视力下降,行走不稳,向后倾倒,休息或坐立位后缓解。无恶寒发热,无恶心呕吐、耳鸣、听力下降,无胸闷心慌,无意识障碍、二便失禁等症,患者未予重视,未系统诊治。1+周后患者无明显诱因头晕发作,遂就诊于贵阳市骨科医院.

平肝止痫复方联合卡马西平对大鼠体外癫痫模型的保护作用

目的探讨平肝止痫复方联合卡马西平(CBZ)对大鼠癫痫(EP)细胞模型氧化应激反应及核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响。方法原代分离及培养大鼠海马神经元,将海马神经元分为5组,分别为对照组(control)、癫痫模型组(epilepsy)、大鼠空白血清组(BS)、CBZ含药血清组(CBZ)、平肝止痫复方联合CBZ含药血清组(PGZX+CBZ)。用无Mg^(2+)细胞外液诱导建立癫痫细胞模型后,通过不同浓度的血清继续处理24 h,利用CCK8试剂盒筛选后续实验最适血清浓度;利用商品化的试剂盒检测大鼠海马神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术(FCM)的方法检测大鼠海马神经元中活性氧(ROS)含量;Western Blot检测大鼠海马神经元中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、醌氧化还原酶1(NQO1)、Nrf2蛋白含量。结果和epilepsy组相比,CBZ组及PGZX+CBZ组大鼠海马神经元中MDA、ROS、Bax和Caspase-3的含量均下降(P<0.05),SOD活性增加,GSH、Bcl-2、NQO1和Nrf2的含量则明显增加(P<0.05);和CBZ组相比,PGZX+CBZ组大鼠海马神经元中中MDA、ROS、Bax和Caspase-3的含量下降(P<0.05),SOD活性增加,GSH、Bcl-2、NQO1和Nrf2的含量则明显增加(P<0.05)。结论平肝止痫复方联合CBZ可能通过调节Nrf2/ARE信号通路增加机体抗氧化对大鼠癫痫细胞模型起保护作用。