靶向APE/Ref-1基因沉默及过表达对MRC-5细胞氧化损伤的影响

目的研究人类脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子(APE/Ref)-1基因沉默及过表达对氧化损伤人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞的影响,验证APE/Ref-1对氧化损伤MRC-5细胞的保护作用。方法过氧化氢(H2O2)处理MRC-5细胞,建立细胞衰老模型,分别用黄芪多糖和棉酚使APE/Ref-1基因表达上调和下调,CCK-8检测细胞存活率,Western印迹检测APE/Ref-1蛋白表达,免疫荧光检测MRC-5细胞8-羟基-2′脱氧鸟苷(8-OHdG)含量,检测DNA氧化损伤情况。结果700μmol/LH2O2处理细胞可建立细胞损伤模型;200mg/L黄芪多糖和20μmol/L棉酚分别处理细胞可建立APE/Ref-1基因表达上调和下调模型;CCK-8检测细胞活力表明APE/Ref-1基因表达下调组最低,上调组最高;Western印迹检测表明棉酚处理组APE/Ref-1蛋白表达含量最少,黄芪多糖处理组最多;免疫荧光表明,与对照组相比,H2O2模型组8-OHdG的表达明显增高,黄芪多糖处理组表达相对增高,棉酚处理组表达最多。结论棉酚和黄芪多糖分别可使目的基因表达下调和上调,H2O2处理可使MRC-5细胞产生氧化损伤;随目的基因表达增多,8-OHdG的表达水平下降;提高氧化损伤的MRC-5细胞中该基因的表达可以减轻其氧化损伤程度并抑制其凋亡。