应用T细胞依赖性抗体反应模型评价参麦注射液对大鼠免疫功能的影响

目的建立T细胞依赖性抗体反应(TDAR)大鼠模型,研究参麦注射液(SMIJ)对大鼠免疫功能的影响。方法 SD大鼠按分组分别ig给予环孢素A(CSA)0.02 g·kg-1,iv给予SMIJ溶剂或SMIJ 0.6,1.2和2.4 g·kg-1,每天1次,连续28 d。于给药第15天和第22天经左后足趾sc给予钥孔其虫戚血蓝蛋白(KLH)2.4 mg·kg-1进行免疫刺激。实验期间观察大鼠的一般状态,每周测体质量和摄食量。在第20天和第29天用ELISA法分别测定大鼠血清KLH-Ig M和KLH-Ig G抗体浓度,第29天活杀大鼠,应用全自动血液分析仪测定血液红细胞和白细胞数及白细胞分类,用天平称取肺、肝、脾和胸腺质量并计算脏器系数,采用HE染色法观察肺、肝、脾、胸腺和淋巴结组织病理变化。结果实验期间未见大鼠死亡,各给药组体质量增长和摄食量无异常。与正常对照组相比,模型组大鼠血清KLH-Ig M和KLH-Ig G抗体浓度均明显增高(P<0.01),提示KLH引起机体免疫应答;与模型组相比,血清KLH-Ig M和KLH-Ig G抗体浓度在CSA组均明显降低(P<0.01),而在SMIJ溶剂组和给药组则无明显变化。给药后第29天,与正常对照组相比,模型组大鼠各项血液学指标和脏器系数无差异,各组织脏器亦无明显病变;与模型组相比,CSA组白细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数、脾和胸腺脏器系数均明显降低(P<0.05,P<0.01),脾出现白髓范围和脾小体淋巴细胞数目减少及淋巴小结界限不清等免疫抑制现象,而SMIJ溶剂和给药组各项血液学和脏器系数均无明显改变,各组织脏器亦无明显病变。结论建立了SD大鼠TDAR研究模型,连续尾静脉给予SMIJ 28 d对SD大鼠TDAR无明显影响。

肿瘤干细胞的来源、标志物以及在毒理学研究中的应用

肿瘤干细胞(CSCs)是一类具有自我更新能力并且可以产生异质性肿瘤的细胞,是目前肿瘤研究的热点,在肿瘤的发生、发展和转移的机制探讨,肿瘤的评估、早期诊断和预后以及抗肿瘤药物的筛选方面展现了良好的应用前景。本文综述了CSCs来源的几种形式,归纳了常见恶性肿瘤中的标志物,概括了CSCs在毒理学研究中的应用,最后展望了CSCs研究的发展方向。

活性氧与线粒体损伤研究概述

线粒体在细胞生长、增殖分化和死亡等生命活动中扮演着十分重要的调控者的角色,也是许多药物毒性作用的靶标。活性氧(ROS)是细胞代谢不可避免的产物,其能作用于线粒体,是引起线粒体损伤主要的途径之一。本文介绍了线粒体的结构与功能,重点从线粒体氧化磷酸化功能的破坏、线粒体膜通透性的改变和线粒体DNA的突变等方面阐述了ROS引起线粒体损伤的机制。

参麦注射液致RBL-2H3细胞脱颗粒的研究

目的探讨参麦注射液(SMI)对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响及其原因。方法以C48/80为工具药建立RBL-2H3细胞脱颗粒模型,检测不同浓度C48/80与RBL-2H3细胞作用不同时间后细胞β-己糖苷酶、类胰蛋白酶和组胺的释放率以及细胞活力,在细胞活力大于80%情况下,选择释放程度较高的指标和条件为优选考察指标和条件。将SMI和其溶剂(Tween-80)原液等比稀释成不同浓度后与RBL-2H3细胞共同培养,通过中性红染色法观察细胞脱颗粒的形态学变化,分别用显色法和间接荧光法检测细胞上清的β-己糖苷酶和组胺释放率,采用细胞计数法(CCK-8)检测细胞的活力。结果 RBL-2H3细胞脱颗粒模型的最佳作用时间为30 min,最佳指标为β-己糖苷酶和组胺释放率。与空白组相比,SMI质量浓度低于13.3 g生药/L(3倍临床浓度)时,细胞中性红染色未见脱颗粒现象,组胺和β-己糖苷酶释放率亦无差异;而在Tween-80质量浓度为1.00 g/L时,SMI 40 g生药/L(9倍临床浓度)组和溶剂1.00 g/L组细胞中性红染色均可见脱颗粒现象,细胞上清组胺和β-己糖苷酶释放率亦明显增加。此外,CCK-8结果显示,与空白组相比,各浓度的SMI对细胞活力均无影响。结论 SMI低于3倍临床浓度无明显RBL-2H3细胞脱颗粒作用;而在9倍临床浓度能刺激细胞脱颗粒,这种脱颗粒作用可能与所含溶剂(Tween-80)有关,与其对RBL-2H3的细胞毒性作用无关。提示SMI在低于3倍临床浓度相对安全,在9倍临床浓度时有致类过敏反应的风险。

柴胡疏肝散对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢及肝功能的影响

目的:探讨柴胡疏肝散对非酒精性脂肪肝大鼠降脂保肝的作用。方法:取SD大鼠随机分成正常组、模型组、东宝肝泰组(0.09g蛋氨酸/kg)、柴胡疏肝散高、中、低剂量(12.6、6.3、3.15g生药/kg)。除正常组外,其余各组ig高脂高糖乳剂复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,造模同时给予各给药组ig相应药物,正常组、模型组ig生理盐水,连续8周后,测定各组大鼠血清血脂、游离脂肪酸(FFA)、肝功能,以及肝脏总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总谷胱甘肽(T-GSH),计算肝指数,光镜下观察肝脏病理学变化。结果:柴胡疏肝散可显著降低非酒精性脂肪肝大鼠血脂、肝脂、肝功能、肝MDA水平(P<0.05、0.01),对肝指数的降低、肝SOD活性和T-GSH含量的升高呈一定的剂量变化趋势但无显著差异。肝脏病理切片显示柴胡疏肝散可明显减轻肝细胞脂肪变性、水样变性及炎症细胞浸润等病理症状。结论:柴胡疏肝散对大鼠非酒精性脂肪肝具有调节脂质代谢和降酶保肝的作用,其机制可能与其减少脂质在肝脏的蓄积、降低肝细胞脂肪变、抑制炎症和脂质过氧化有关。

转录组学技术在中药肝毒性研究中的应用

转录组学是功能基因组学研究中最活跃的领域之一,是一门在整体水平研究细胞中所有基因转录及转录调控规律的科学,在基础医学、生物学、微生物学和药学等领域已有广泛的应用。在中药研究领域中,该技术能从基因水平通过比较药物作用前后基因表达谱的变化对中药药理和毒理等方面进行评价。对该技术在中药研究领域的进展进行综述,主要介绍了转录组学技术在中药肝损伤筛选生物标志物和中药所致肝损伤机制研究中的应用,为该技术在中药领域的研究和发展提供有价值的参考。

白藜芦醇对曲格列酮诱发HepaRG细胞氧化损伤的影响

目的探讨白藜芦醇对曲格列酮诱发HepaRG细胞氧化损伤的影响及可能作用机制。方法实验分组包括:正常对照组(含有0.1%DMSO的RPMI 1640培养基)、50μmol/L曲格列酮组、白藜芦醇3种浓度(3.75,7.5,15μmol/L)与50μmol/L曲格列酮的共处理组。MTT法检测曲格列酮、白藜芦醇以及白藜芦醇与50μmol/L曲格列酮共同作用对HepaRG细胞的增殖抑制作用。以上各组作用48 h后检测各组细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,脂质过氧化(lipid peroxidation)和细胞凋亡程度,细胞的总抗氧化能力,以及细胞内过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。结果曲格列酮能明显导致HepaRG细胞产生氧化应激现象。与正常对照组相比,曲格列酮处理组ROS和脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平以及细胞凋亡和坏死率均显著升高(P<0.05),总抗氧化能力大幅降低(P<0.05),CAT、GSH-px、SOD的活性均降低(P<0.05)。加入不同浓度白藜芦醇共同作用后,ROS和MDA生成量有所下降(P<0.05),细胞凋亡和坏死率也相应下降(P<0.05),细胞总抗氧化能力以及以上3种抗氧化物酶的活性均有所提高(P<0.05),且有一定的剂量依赖关系。结论曲格列酮能引起HepaRG细胞产生明显的氧化应激作用,白藜芦醇能够显著改善由曲格列酮对HepaRG细胞所造成的氧化损伤。

Provantis系统Dispense模块在药物非临床安全性评价供试品管理的应用前景

随着我国GLP行业的发展及其与国际接轨的需要,实验室管理及实验数据采集的信息化、网络化的要求日益迫切,供试品管理是GLP评价的源头和关键环节。Dispense模块是Provantis系统用于供试品管理的模块,该模块包含供试品管理的接收、记账、留样、配制和归档等多个流程,能极大地提高供试品管理的科学性、准确性和有效性。本文就Dispense模块的特点、主要流程中的优势以及不足之处进行综述,并展望了Dispense模块在药物非临床评价供试品管理的应用前景。

基于脾虚大鼠模型评价复方黄芪健脾口服液健脾消食作用

目的 建立大鼠脾虚模型,评价复方黄芪健脾口服液(FFHQ)的健脾消食作用。方法 60只雄性大鼠随机分为6组:对照组、模型组、启脾口服液(阳性药,10 mL·kg^(-1))组和FFHQ低、中、高剂量(生药3.25、6.50、13.00 g·kg^(-1))组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠ig给予250 mg·mL-1大黄水溶液15 mL·kg^(-1),上下午各1次,每天2次,连续7 d,制备脾虚模型。造模成功后,各组ig给药,对照组和模型组给予去离子水,给药体积均为10 mL·kg^(-1),每天2次,连续7 d。每天观察记录动物外观体征、行为活动,每周检测体质量和摄食量;给药结束检测胃排空功能、食物利用率;试剂盒法检测血清胃泌素(GAS)、胃动素(MOT)和血管活性肠肽(VIP)浓度;全自动血液分析仪测定大鼠红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞容积(HCT)、白细胞计数(WBC)、红细胞分布宽度(RDW)、网织红细胞绝对值(RET#)以及网织红细胞(RET)、淋巴细胞(LYMPH)、单核细胞(MONO)、中性粒细胞(NEUT)、嗜碱性粒细胞(BASO)、嗜酸性粒细胞(EO)的比率;取脾脏、胸腺称质量,计算脾脏、胸腺脏器系数;采集胃、十二指肠、结肠、直肠、脾脏、胸腺,HE染色后观察组织病理学变化。结果 造模期间,对照组未见异常;与对照组比较,其他各组皆出现消瘦、稀便、活动减少等脾虚症状;造模结束时,与对照组比较,其他各组动物体质量及体质量增长显著降低(P<0.001)。给药期间,与对照组比较,FFHQ各剂量组动物脾虚症状基本恢复正常,而模型组动物仍有脾虚的症状。给药结束后,与模型组比较,FFHQ各剂量组动物体质量、给药期间体质量增长显著升高(P<0.05);FFHQ 3.25 g·kg^(-1)组大鼠每天摄食量显著增高(P<0.01);FFHQ各剂量组大鼠胃排空率显著增加(P<0.05);FFHQ 6.50、13.00 g·kg^(-1)组MOT浓度显著升高(P<0.05),FFHQ 13.00 g·kg^(-1)组VIP浓度显著降低(P<0.05、0.01);各给药组LYMPH比率均显著升高(P<0.05、0.01),FFHQ高剂量组MONO比率显著降低(P<0.05、0.01),FFHQ高剂量组RBC显著降低(P<0.01),各给药组RET#、RDW均显著降低(P<0.01),FFHQ低剂量组HCT显著降低(P<0.01),FFHQ中剂量组HGB显著降低(P<0.01),FFHQ高剂量组WBC呈升高趋势;FFHQ低、高剂量组脾脏质量均显著增加(P<0.05、0.01);FFHQ中、高剂量组胸腺质量呈升高趋势;各组组织病理学检查均未见未见明显器质性病变。结论FFHQ对脾虚大鼠发挥健脾消食作用,调节胃肠激素分泌和提高机体免疫力可能是作用机制之一。