磷酸奥司他韦预防儿童流行性感冒时引起精神行为异常1例

本案例旨在提醒临床应用磷酸奥司他韦预防流感要严格遵循药品说明书。儿童对药物的耐受性较差,需加强药学监护,若发现神经精神不良反应立即停药,及时给予处理,避免严重不良反应/事件发生。

上焦宣痹汤联合穴位贴敷治疗儿童上气道咳嗽综合征湿热证的临床观察

目的观察上焦宣痹汤联合穴位贴敷治疗儿童上气道咳嗽综合征湿热证的临床疗效。方法选择2021年1月至2023年7月江西中医药大学第二附属医院收治的上气道咳嗽综合征湿热证患儿80例为观察对象,随机分为对照组和观察组各40例。对照组患儿采用抗感染、抗过敏等常规对症治疗,观察组患儿在对照组基础上给予上焦宣痹汤联合穴位贴敷治疗。经上述治疗3个疗程后,采用视觉模拟量表(VAS)评分、主要临床症状分级评分进行评价,比较两组的临床疗效、不良反应和复发例数。结果观察组临床总有效率为95.0%(38/40),明显高于对照组80.0%(32/40),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组临床症状积分显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后VAS评分均低于治疗前,且观察组下降较对照组更显著,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。随访3个月观察组复发率为7.89%(3/38),明显低于对照组28.13%(9/32),差异有统计学意义(P<0.05)。结论上焦宣痹汤联合穴位贴敷治疗儿童上气道咳嗽综合征湿热证有效且安全,可以降低复发率,值得临床医师推广并应用。

甘露消毒丹联合穴位贴敷治疗湿热型儿童支气管哮喘急性期的临床研究

目的观察甘露消毒丹联合穴位贴敷治疗湿热型儿童支气管哮喘急性期的疗效。方法在2020年1月-2021年9月江西中医药大学第二附属医院收治的湿热证哮喘患儿中筛选60例作为观察对象,按照治疗方式的不同随机分入观察组、对照组,2组病例数均等分。对照组患儿采用雾化吸入治疗,而观察组患儿在其基础上给予口服甘露消毒丹汤剂与穴位贴敷治疗。经上述治疗7 d后,将患儿观察指标得到的分值进行统计。结果治疗后2组比较,观察组总有效率93.33%高于对照组80.00%(P<0.05);患儿的咳嗽、气喘、喉间痰鸣、哮鸣音及肺功能(FEV1)指标均得到明显改善,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论甘露消毒丹联合穴位贴敷是临床上辅助治疗儿童支气管哮喘湿热证有效手段,该方法值得临床推广并应用。

杏苏散加减治疗儿童反复呼吸道感染急性期咳嗽的临床疗效观察

目的观察杏苏散加减治疗儿童反复呼吸道感染急性期咳嗽风寒外束、痰饮内蕴证的临床疗效。方法选取2019年11月至2022年11月江西中医药大学第二附属医院儿科门诊诊断反复呼吸道感染急性期咳嗽风寒外束、痰饮内蕴证患儿108例,随机分成对照组和观察组各54例。对照组使用氨溴特罗口服溶液、吸入用布地奈德溶液等常规对症治疗,观察组在常规对症治疗基础上给予杏苏散加减治疗。经上述治疗6 d后,比较两组的临床疗效、临床症状积分、不良反应及继发慢性咳嗽情况。结果治疗后观察组临床总有效率为96.30%(52/54),高于对照组83.33%(45/54),临床症状积分较对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);治疗期间,两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05);跟踪随访4周,观察组慢性咳嗽继发率为11.11%(6/54),低于对照组25.93%(14/54),差异有统计学意义(P<0.05)。结论杏苏散加减治疗儿童反复呼吸道感染急性期咳嗽可提高临床疗效,改善症状,降低患儿慢性咳嗽继发率,值得临床推广。

端粒酶调控研究进展

端粒酶主要包括催化组分端粒酶逆转录酶(Telomerase reverse transcriptase,TERT)和端粒酶RNA组分(Telomerase RNA component,TERC),二者与其他端粒酶复合体亚基共同组装成具有延伸端粒末端功能的全酶,在细胞衰老和肿瘤发生过程中发挥关键的作用。端粒酶调控的分子机制复杂,调控过程包括组装前各组分的转录调节、转录后调控、翻译后修饰以及亚细胞定位的调控,还包括组装过程中各组分的运输和装配的调控,以及组装后募集到端粒末端的调控。本文从以上几个方面对端粒酶的调控机制进行了综述,旨在为端粒酶相关领域的研究以及开发以端粒酶为靶点的药物奠定理论基础。

敲低Runt相关转录因子2(Runx2)表达抑制结肠癌细胞生长和迁移

目的构建稳定低表达Runt相关转录因子2(Runx2)的HCT-8结肠癌细胞,检测对结肠癌细胞生长和迁移等生物学行为的影响。方法首先采用Western blot法检测Runx2在不同结肠癌细胞系中表达,确定HCT-8结肠癌细胞高表达Runx2;将含有Runx2的慢病毒短发卡RNA(shRNA)的干扰载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚肾HEK293FT细胞后,收集病毒上清,感染HCT-8结肠癌细胞。经嘌呤霉素筛选后,获得慢病毒介导的Runx2 shRNA的稳定表达细胞,利用实时定量PCR和Western blot法检测Runx2的shRNA的干涉效果;用CCK-8法检测细胞增殖活性、平板克隆形成实验检测癌细胞生长、Transwell^(TM)侵袭实验和划痕愈合实验检测Runx2 shRNA转染对癌细胞侵袭和迁移的影响。结果建立了稳定敲低Runx2水平的HCT-8结肠癌细胞;敲低HCT-8细胞Runx2表达水平后,癌细胞的生长、侵袭和迁移受到明显抑制。结论敲低Runx2抑制结肠癌细胞的生长、侵袭和迁移。

核输入蛋白α/β真核表达载体的构建及细胞内定位

目的:构建带有myc标签的核输入蛋白(importin)α/β的真核表达载体,转染人胚肾293T细胞并分析其表达。方法:以乳腺癌文库为模板PCR扩增核输入蛋白α/β基因,扩增产物插入真核表达载体p XJ-40-myc,经双酶切和测序鉴定;将空载体与重组质粒分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹和免疫荧光技术检测核输入蛋白α/β的表达。结果:酶切鉴定与测序结果表明构建的myc-Importinα/β真核表达载体正确;Western印迹检测到重组质粒在293T细胞中的表达;免疫荧光检测到核输入蛋白α定位于细胞质和细胞核,而核输入蛋白β定位于细胞核。结论:构建了核输入蛋白α/β的真核表达载体,并确定了其在细胞中的表达定位。

PI3K/AKT/NF-κB轴调控胃癌细胞HGC-27增殖

目的:构建磷酸化AKT1(Ser473)位点突变真核表达载体,并检测PI3K/AKT/NF-κB信号通路轴对胃癌细胞增殖的影响。方法:以带有pcDNA3.0-Flag标签的AKT1质粒为模板,扩增出AKT1(Ser473A)(丝氨酸突变成丙氨酸)位点突变编码序列,将其插入pcDNA3.0-Flag载体中,双酶切和测序验证后瞬时转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测其表达情况;将突变质粒与空载体分别转染胃癌细胞HGC-27,通过Western印迹检测其下游基因核转录因子κB(NF-κB)在蛋白水平的变化;通过CCK-8法检测对细胞生长曲线的影响。结果:双酶切和测序结果表明,pcDNA3.0-Flag-AKT1(Ser473A)真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后获得表达;转染胃癌细胞HGC-27后,Western印迹验证去磷酸化AKT1(Ser473A)可下调NF-κB的蛋白水平(P<0.01);细胞生长曲线结果显示,转染pcDNA3.0-Flag-AKT1(Ser473A)较空载体细胞生长慢(P<0.01)。结论:PI3K/AKT/NF-κB信号通路轴在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。

磷酸化Akt1(Thr308)位点突变真核表达载体的构建及其生物学功能研究

目的:构建磷酸化Akt1(Thr308)位点突变真核表达载体,并瞬时转染胃癌耐药细胞,对其生物学功能进行初步检测。方法:以带有pc DNA3.0-Flag标签的Akt1质粒为模板,采用重组PCR技术扩增得到Akt1(T308A)(苏氨酸突变成丙氨酸)、Akt1(T308E)(苏氨酸突变成谷氨酸)位点突变编码区序列,将其插入pc DNA3.0-Flag载体,双酶切和测序验证后瞬时转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测其表达情况;将突变质粒与空载体分别转染人胃癌耐药细胞BGC-823/c DDP,通过Western印迹和实时定量PCR检测Notch1蛋白和m RNA水平的变化,通过CCK-8法检测对耐药细胞生长曲线的影响。结果:双酶切和测序结果表明Akt1(T308A)、Akt1(T308E)的真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后获得表达;转染人胃癌耐药细胞BGC-823/c DDP后,利用实时定量PCR和Western印迹证明去磷酸化Akt1(T308A)可抑制Notch1的转录和蛋白水平,模拟持续磷酸化Akt1(T308E)升高Notch1的转录和蛋白表达;细胞生长曲线结果显示,转染Akt1(T308A)较空载体耐药细胞生长慢,而Akt1(T308E)促进耐药细胞生长。结论:PI3K/Akt与Notch1信号通路的激活在胃癌耐药的发生、发展过程中发挥重要作用。

银翘马勃散合升降散配合穴位贴敷治疗儿童上气道咳嗽综合征50例

目的:观察银翘马勃散合升降散配合穴位贴敷治疗儿童上气道咳嗽综合征的临床疗效。方法:将100例上气道咳嗽综合征患儿随机分成对照组和观察组,各50例。对照组使用氯雷他定糖浆、0.5%呋麻滴鼻液等治疗,观察组在对照组治疗基础上给予银翘马勃散合升降散配合穴位贴敷,两组疗程均为14 d。比较两组治疗后的临床疗效、不良反应及复发情况。结果:治疗后两组比较,观察组较对照组临床症状积分下降幅度更大,临床总有效率更高,组间差异均有统计学意义(P<0.05);治疗期间,两组患儿均未发生不良反应;随访3个月,观察组复发率明显低于对照组(P<0.05)。结论:银翘马勃散合升降散配合穴位贴敷治疗儿童上气道咳嗽综合征可提高临床疗效,降低复发率,且安全性较好,值得临床推广。

microRNA在中医药防治支气管哮喘中的应用

支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病,其发病机制复杂。microRNA是一类在转录后水平调节基因的非编码小RNA,在支气管哮喘的发生、发展过程中起调控作用,与中医药防治支气管哮喘方面有密切关系。现从microRNA与支气管哮喘的中医病因病机、中药单体及活性成分、中药复方和中医外治法等方面阐述microRNA在中医药防治支气管哮喘研究领域中的应用。

自拟方配合穴位贴敷治疗儿童迁延性细菌性支气管炎研究

目的:观察自拟方配合穴位贴敷治疗儿童迁延性细菌性支气管炎的疗效。方法:将2017年1月~2020年7月收治的61例迁延性细菌性支气管炎患儿随机分成对照组31例和观察组30例。对照组采用哌拉西林钠舒巴坦钠、氨溴索静脉滴注等西药治疗,观察组予西药治疗辅助自拟方口服配合穴位贴敷,疗程均为14 d。对比两组临床疗效、症状体征消失时间、不良反应发生情况及复发情况。结果:与对照组相比,观察组喉间痰鸣音、咳嗽、喘息、肺部哮鸣音或痰鸣音消失时间更短,临床总有效率更高,不良反应发生率更低(P<0.05);随访3个月,观察组复发率明显低于对照组(P<0.05)。结论:采用自拟方口服配合穴位贴敷治疗儿童迁延性细菌性支气管炎可提高临床疗效,降低复发率,且安全性较好。

吸入用复方异丙托溴铵溶液致婴幼儿四肢震颤1例

吸入用复方异丙托溴铵溶液广泛应用于儿童哮喘及急性呼吸道疾病的治疗。吸入用复方异丙托溴铵溶液说明书提示尚无<12岁患儿使用的研究,因此<12岁患儿应用该药的安全性和有效性尚不明确。本研究回顾性分析1例支气管肺炎婴幼儿应用吸入用复方异丙托溴铵溶液后的不良反应发生情况,为临床安全用药提供参考。

热敏灸辅助治疗儿童急性肠系膜淋巴结炎腹部中寒证40例临床观察

目的 观察热敏灸辅助治疗儿童急性肠系膜淋巴结炎腹部中寒证的临床疗效。方法 选取2019年10月至2021年10月江西中医药大学第二附属医院儿科门诊就诊的急性肠系膜淋巴结炎腹部中寒证患儿80例,采用随机数字表法分为对照组和治疗组,各40例。对照组给予地衣芽孢杆菌活菌胶囊和抗感染等常规对症治疗,治疗组在对照组治疗方法的基础上给予热敏灸治疗。2组均治疗14 d后统计临床疗效,肠系膜淋巴结横径、纵径,腹痛消失时间及复发情况。结果 治疗组总有效率为97.50%(39/40),显著高于对照组的85.00%(34/40),2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前2组肠系膜淋巴结横径、纵径比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性;治疗后2组横径、纵径均显著缩小,与同组治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05),且治疗组缩小更显著(P<0.05)。治疗组腹痛消失时间为(3.10±1.27) d,显著短于对照组的(3.80±1.61) d, 2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组复发率为12.82%(5/39),显著低于对照组的29.41%(10/34),2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 热敏灸辅助治疗儿童急性肠系膜淋巴结炎腹部中寒证疗效满意,不仅可以显著减小肠系膜淋巴结横径、纵径,缩短腹痛时间,而且复发率较低,值得临床推广应用。

慢病毒介导的敲低E6AP表达抑制胃癌细胞增殖和迁移

目的构建稳定敲低E6AP表达的胃癌细胞BGC-823,并检测对胃癌细胞增殖和迁移等恶性生物学行为的影响。方法采用Western印迹方法检测E6AP在不同胃癌细胞系及胃正常黏膜上皮细胞系中的表达情况;将含有E6AP的慢病毒短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的干扰载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚肾293T细胞后,收集病毒上清感染胃癌细胞BGC-823,经嘌罗霉素(puromycin)筛选后,获得慢病毒介导的E6AP shRNA的稳定表达细胞,用实时(real-time)PCR和Western印迹方法检测E6AP干扰效果;并利用细胞生长曲线实验、划痕愈合(wound healing)和Transwell实验检测E6AP shRNA对胃癌细胞增殖和迁移的影响。结果 E6AP在不同胃癌细胞系及胃正常黏膜上皮细胞系中均有表达;建立了稳定敲低E6AP的胃癌细胞BGC-823;E6AP shRNA可有效抑制胃癌细胞增殖和迁移。结论 E6AP的生物学功能在胃癌恶性转化过程中发挥重要作用。

人TR基因真核表达载体的构建

目的构建人端粒酶RNA组分(h TR)的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法以人胚肾293T细胞RNA逆转录得到的c DNA为模板,采用PCR技术扩增出h TR编码序列,将其插入到p CDNA 3.0载体中;将重组质粒与空载体分别转染293T细胞,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测其表达情况,在Hep G2细胞中构建此基因的稳定细胞系并用qRT-PCR检测其效果,通过RNA结合免疫共沉淀(RIP)实验验证其和人端粒酶逆转录酶(h TERT)及角化不良蛋白(dyskerin)的相互作用,通过端粒酶重复序列扩增技术(telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测过表达h TR后Hep G2细胞的端粒酶活性。结果双酶切和测序结果表明,p CDNA3.0-h TR的真核表达载体构建成功;转染293T细胞用qRT-PCR证明成功表达;qRT-PCR证实Hep G2 p CDNA3.0-h TR稳定细胞系筛选成功;RIP实验证实了h TR与h TERT和角化不良蛋白之间存在相互作用;TRAP实验发现过表达h TR并不影响Hep G2细胞的端粒酶活性。结论成功构建了p CDNA 3.0-h TR真核表达载体,为进一步研究以针对h TR为靶标的癌症治疗奠定了基础。

E6AP蛋白结构域突变真核表达载体的构建及其生物学功能检测

目的构建E6AP蛋白结构域突变真核表达载体,并瞬时转染肿瘤细胞,对其生物学功能进行初步检测。方法以本实验室保存带有myc标签的E6AP质粒为模板,采用PCR技术扩增出E6AP（1～494）结构域和E6AP（495～852）结构域（即E6AP的HECT结构域）编码区（CDS）序列,将其插入到p XJ-40-myc载体中,双酶切和测序验证后瞬时转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹鉴定其表达及功能;转染人乳腺癌细胞ZR75-1和人胃癌细胞BGC-823,通过CCK-8法测定细胞生长曲线。结果从E6AP蛋白全长CDS中扩增得到约1479、1071 bp的DNA结构域片段,并成功克隆至p XJ-40-myc载体上,且测序与目的序列完全一致;转染人胚肾293T细胞后,目的蛋白在细胞内成功表达,并且E6AP（495～852）结构域可明显抑制P53蛋白水平,而E6AP（1～494）结构域无抑制作用;细胞生长曲线结果显示,转染E6AP（495～852）结构域突变质粒的乳腺癌、胃癌细胞较空载体细胞生长差异具有统计学意义,而E6AP（1～494）对细胞生长无明显变化。结论成功构建了myc-E6AP（1～494）、（495～852）结构域突变真核表达载体,为进一步研究E6AP蛋白在相关肿瘤发生、发展中的作用奠定一定的基础。