高密度脂蛋白相关1磷酸鞘氨醇对心血管的保护作用及其信号机制

动脉粥样硬化是心血管疾病重要的病理生理学基础，大量的研究证明高密度脂蛋白（HDL）水平与动脉粥样硬化发生呈负相关，HDL—C已成为冠状动脉疾病的重要预测因素。

阿托伐他汀在1-磷酸鞘氨醇诱导心肌细胞肥大中的作用

目的研究阿托伐他汀对1-磷酸鞘氨醇(S1P)诱导乳鼠心肌细胞肥大反应中的作用。方法原代培养乳鼠心肌细胞,测定心肌细胞体积和[3H]-亮氨酸掺入量作为心肌细胞肥大的指标。乳鼠心肌细胞使用不同浓度的阿托伐他汀(atorvastatin),加入S1P,[3H]-亮氨酸掺入量作为心肌细胞蛋白摄取量;分别用qPCR和Western blot法检测心肌细胞的β-肌球蛋白(β-MHC)的mRNA和蛋白质表达水平;用qPCR检测心肌细胞的心房利钠肽(ANF)的mRNA表达水平。结果与S1P组比较,阿托伐他汀10μmol/L处理组[3H]-亮氨酸掺入率减少[(234.89%±31.23%)比(342.23%±31.60%),P=0.205],β-MHC的mRNA和蛋白表达水平下降[(0.59±0.14)比(0.84±0.20),P=0.318]和[(0.55±0.09)比(0.98±0.15),P=0.223],ANF的mRNA表达水平降低[(0.51±0.13)比(0.76±0.19),P=0.445];与S1P组比较,阿托伐他汀20μmol/L处理组[3H]-亮氨酸掺入率明显减少[(189.07%±17.69%)比(342.23%±31.60%),P<0.01],β-MHC的mRNA和蛋白表达水平显著下降[(0.50±0.12)比(0.84±0.20),P<0.01]和[(0.35±0.08)比(0.98±0.15),P<0.01],ANF的mRNA水平明显降低[(0.47±0.12)比(0.76±0.19),P<0.01]。结论阿托伐他汀可抑制S1P诱导的心肌细胞肥大,并可减少S1P诱导的β-MHC和ANF表达。

1-磷酸鞘氨醇受体途径诱导的心肌肥大及蛋白激酶C的调节作用

目的研究1-磷酸鞘氨醇受体途径在1-磷酸鞘氨醇(S1P)诱导乳鼠心肌细胞肥大反应中的作用。方法原代培养乳鼠心肌细胞,测定心肌细胞体积和[3H]-亮氨酸掺入量作为心肌细胞肥大的指标。实验分对照组(不加任何干预因素)、S1P组(S1P直接作用于心肌细胞)、VPC23019组(S1P1和S1P3受体抑制剂进行干预30 min后,加入S1P刺激心肌细胞)、JTE组(S1P2受体抑制剂进行干预30 min后,加入S1P刺激心肌细胞)及Staurospo-rine组(蛋白激酶C抑制剂进行干预30 min后,加入S1P刺激心肌细胞),[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率;用qPCR和Western blot法检测心肌细胞β-肌球蛋白重链的mRNA和蛋白表达水平。结果 10、100和1000 nmol/L的S1P均能增加乳鼠心肌细胞的细胞体积和[3H]-亮氨酸掺入量,尤以1000 nmol/L S1P最为明显,因而选择1000 nmol/L S1P作用心肌细胞48 h为成功的心肌细胞肥大模型。1000 nmol/L S1P处理心肌细胞48 h,可使[3H]-亮氨酸掺入量明显增加,该作用可被S1P2受体抑制剂或蛋白激酶C抑制剂明显抑制。与对照组相比,S1P组心肌细胞β-肌球蛋白重链的mRNA和蛋白表达水平显著增加。与1000 nmol/L S1P组相比,S1P2受体抑制剂组和特异性蛋白激酶C抑制剂组β-肌球蛋白重链的mRNA和蛋白表达水平显著下降。结论 S1P介导的心肌肥大主要依赖S1P2途径介导。S1P2介导心肌肥大反应的机制可能部分通过激活蛋白激酶C途径而实现。

内脂素对人脐静脉内皮细胞通透性的影响及机制

背景与目的内脂素是一种来源于内脏脂肪的新脂肪因子，具有复杂的生物学功能，除具有类似胰岛素的降血糖效应外，还可能作为炎症介质参与体内炎症反应。大量证据表明内脂素可能在心脑血管疾病、糖尿病、代谢综合征和肾脏疾病等动脉粥样硬化性疾病中发挥着重要作用，这与内脂素影响斑块稳定性、血管炎症及糖脂代谢等作用密切相关。近年来，研究认为它可能是一个潜在危险因素参与了内皮功能紊乱的发生。然而，内脂素对血管内皮功能的影响非常复杂，到目前为止，一直没有直接证据证实内脂素能导致动脉内皮损伤及其作用机制。本研究从内皮细胞间连接角度出发，拟观察内脂素对人脐静脉内皮细胞通透性及缝隙连接蛋白Connexin37（Cx37）、Connexin40（Cx40）和Connexin43（Cx43）表达的影响及初步探讨其可能机制。

HSP27对雌激素诱导的内皮保护作用的影响

目的观察雌二醇(E2)及雌激素受体拮抗剂他莫昔芬对HUVEC HSP27表达的影响,以及HSP27 siRNA对雌激素内皮保护作用的影响。方法分别用不同浓度(10-9、10-8和10-7mol/L)E2处理HUVEC 24 h;10-7mol/L雌二醇及10-6mol/L他莫昔芬处理HUVEC 24 h。以空白组为阴性对照,RT-PCR和Western blot检测HSP27的表达。分别转染HSP27 siRNA和mockRNA48 h后,再与10-7mol/L E2孵育24 h。空白组做为阴性对照,RT-PCR和Western blot检测HSP27的表达;分别用硝酸还原酶法和ELISA检测培养基中NO和内皮素1的含量;ELISA检测细胞表面细胞间黏附分子1(ICAM-1)的含量。结果 E2处理HUVEC可上调HSP27的mRNA和蛋白表达水平,并且具有剂量依赖性,表达的峰值在10-7mol/L。10-6mol/L他莫昔芬可阻断10-7mol/L E2的作用。RT-PCR、Western blot检测HSP27 siRNA序列能明显下调HSP27mRNA及蛋白的表达。HU-VEC转染HSP27 siRNA48 h后再与10-7mol/LE2孵育24 h,能显著减弱E2对内皮细胞分泌NO和ICAM-1的影响,而对内皮素1没有明显影响。结论雌二醇呈剂量依赖性诱导HUVEC产生HSP27增加,雌激素受体途径参与HSP27诱导的内皮细胞ICAM-1和NO的改变。

SR-B1依赖PI3K-Akt-eNOS信号途径的激活介导HDL诱导内皮细胞PGI2释放

目的观察SR-B1介导HDL诱导内皮细胞PGI2生成的信号激活途径。方法分别转染pcDNA3.1(-)-hSR-B1重组表达质粒或SR-B1 siRNA48 h后,30 mg/L HDL孵育24 h;30 mg/L apoA1与ECV304内皮细胞共孵育24 h;分别用25μmol/L PI3K特异性抑制剂LY294002或50μmol/L eNOS特异性抑制剂L-NAME预处理3 h后,30 mg/L HDL孵育24 h。空白组作为阴性对照,30 mg/L HDL处理组为阳性对照,RT-PCR和/(或)Western blot检测PGIS、COX-2、CREB及磷酸化CREB的表达;免疫细胞化学法检测内皮细胞中COX-2蛋白的表达;ELISA法检测培养液中6-keto-PGF1α的生成。结果不管是mRNA水平还是蛋白水平,在过表达SR-B1后,HDL均不能显著上调COX-2的表达,然而,有趣地是siRNA沉默SR-B1后,可见HDL诱导内皮细胞COX-2的表达明显减少,且免疫细胞化学检测能得到相似的结果。30 mg/L apoA1孵育内皮细胞24 h后,COX-2表达亦出现增加。但是,不管是HDL单独处理还是过表达或沉默SR-B1,PGIS的表达都没有明显变化。抑制剂单独处理细胞对PGI2的生成没影响,但抑制PI3K或eNOS活性后可明显减少HDL诱导的PGI2生成,其中以抑制PI3K活性后,PGI2生成减少更为显著;同样,LY294002或L-NAME对HDL诱导内皮细胞COX-2、磷酸化CREB表达的影响与影响PGI2的生成呈相同效果,特异性抑制PI3K和特异性抑制eNOS活性均能下调HDL诱导的COX-2表达及CREB磷酸化,且同样以抑制PI3K后下调幅度更为明显。结论 HDL诱导内皮细胞PGI2释放依赖SR-B1与其介导的胞内PI3K-Akt-eNOS信号途径的激活有关。

载脂蛋白AI介导内皮细胞鞘氨醇-1-磷酸释放及其信号机制

背景与目的鞘氨醇．1．磷酸（SIP）是由鞘氨醇激酶1／2（SphKl／2）磷酸化鞘氨醇而合成。血管内皮细胞、红细胞和血小板等是血液S1P的主要来源。S1P释放到细胞外通常受到细胞内或细胞外的刺激。载脂蛋白AI（ApoAI）与ATP结合盒转运体A1（ABCAl）的结合是HDL生成的起始过程，也是胆固醇逆向转运的限速步骤。ApoAI也能结合清道夫受体B类I型（SR-BI）进行胆固醇和磷脂的双向转运。ApoAI除转运胆固醇外，还可转运其他磷脂成分。作为HDL的主要裁脂蛋白，ApoAI是否能促进血管内皮细胞S1P释放，以及其受体信号机制如何是本实验的研究目的。

微小RNA与动脉粥样硬化

微小RNA（microRNAs，miRNAs）是一种内源性调节因子，最近几年发现其在调节动脉粥样硬化的发生过程中占有重要的地位。许多有关miRNAs的研究涉及血管内皮细胞的衰老和功能紊乱、血管平滑肌细胞的迁移和增殖、动脉脉粥样硬化相关炎症以及脂质代谢和胆固醇逆向转运等方面。

PKC在S1P激活大鼠心肌细胞核转录因子-κB中的作用

目的探讨蛋白激酶C在1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine 1-phosphate,S1P)激活大鼠心肌细胞核转录因子(Nuclear transcription factor,NF)-κB信号传导通路中的作用。方法心肌细胞NF-κB的核内浓度采用夹心ELISA的方法检测;免疫印记观察S1P作用前后核内NF-κB的改变;RT-PCR及免疫印记检测转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)变化。结果 S1P刺激可诱导心肌细胞下游NF-κB活化,两者之间存在浓度与时间的依赖关系;免疫印记显示S1P作用后,细胞核内NF-κB表达明显增加;而特异性PKC抑制剂(Staurospo-rine)和NF-κB阻断剂(PDTC)均能在不同程度上抑制S1P的这种作用。S1P作用心肌细胞使TGF-β1表达上调,S1P的这种作用可被Staurosporine和PDTC所抑制。结论 PKC作为NF-κB活化的上游信使,参与了S1P激活NF-κB的信号传导通路。通过以上途径使TGF-β1合成增加,从而诱导心肌细胞纤维化,导致心肌肥厚。

血清1-磷酸鞘氨醇与冠状动脉斑块负荷的相关性研究

目的:探讨血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)与冠状动脉斑块负荷的相关性。方法:入选行冠状动脉造影的15例急性冠脉综合征(急性冠脉综合征组)和15例稳定性心绞痛(稳定性心绞痛组)患者,用血管内超声虚拟组织成像技术(VH-IVUS)对斑块的组织成分进行定性及定量分析。高效液相色谱法测定血清S1P、高密度脂蛋白(HDL)-S1P和non-HDL-S1P水平,探讨冠状动脉斑块负荷与血清S1P、HDL-S1P和non-HDL-S1P水平的相关性。结果:急性冠脉综合征组斑块负荷[(85.25±6.8%)分对(54.19±11.35%)分,P<0.01]、血清S1P水平[(385.74±105.19) pmol/mL对(213.22±90.82) pmol/mL,P<0.01]、血清non-HDL-S1P水平[(40.38±15.52) pmol/mL对(15.45±5.33) pmol/mL,P<0.01]明显高于稳定性心绞痛组;血清HDL-S1P水平明显低于稳定性心绞痛组[(201.54±70.6) pmol/mL对(254.56±28.53) pmol/mL,P<0.01]。冠状动脉斑块负荷与S1P、non-HDL-S1P独立相关。结论:S1P、non-HDL-S1P水平升高与冠状动脉斑块负荷严重程度密切相关,与冠状动脉的严重程度一致。

血清高敏C反应蛋白和1-磷酸鞘氨醇水平与冠心病严重程度的相关性研究

目的探讨血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)和1-磷酸鞘氨醇(S1P)与冠心病的相关性。方法将122例行冠状动脉造影的患者分为对照组(59例)、冠心病组(63例),用Leaman积分系统对冠状动脉狭窄程度进行评分。采用多因素分析方法探讨冠心病及Leaman积分与血清hs-CRP、血浆中S1P、HDL相关S1P和non-HDL相关S1P含量因素的相关性。结果 (1)冠心病组hs-CRP水平明显高于对照组[(7.10±3.37)mg/L比(1.91±2.12)mg/L,P=0.014];冠心病组Leaman评分值明显高于对照组[(10.45±5.25)分比(3.25±2.35)分,P<0.01];(2)冠心病组血浆S1P水平高于对照组[(415.90±211.08)pmol/ml比(326.45±153.76)pmol/ml,P=0.046],冠心病组HDL-S1P水平与对照组比较,差异无统计学意义[(209.38±142.57)pmol/ml比(225.01±102.00)pmol/ml,P=0.072],冠心病组non-HDL-S1P水平明显高于对照组[(61.41±73.65)pmol/ml和(7.61±6.76)pmol/ml,P<0.01];(3)Logistic回归分析显示,吸烟、糖尿病、TG、LDL-C、non-HDL-S1P和hs-CRP与冠心病独立相关,而HDL-S1P与冠心病无相关性;(4)冠状动脉Leaman积分的多元逐步回归分析显示,non-HDL-S1P和hs-CRP与冠状动脉积分独立相关,其中以hs-CRP最为明显。结论 hs-CRP和nonHDL相关S1P为冠心病的独立危险因素,且与冠心病严重程度独立相关。

千县工程:在希望的田野上耕耘

近年来,“干县工程”有力促进了优质医疗资源扩容和区域均衡布局,持续提升县医院医疗服务能力,陆续涌现了一批符合县医院发展规律的改革经验。在近日召开的2023全国深化医改经验推广会暨中国卫生发展会议上,与会嘉宾在县域舞台上充分展示了各自“压箱底”的特色做法。