牙根发育不良病因及分子机制的研究进展

牙根发育不良(HTR)是指发生于牙齿根部的先天性发育障碍的一种疾病,国外学者称其为短根异常疾病(SRA),乳、恒牙列均可发生,其发生通常无任何临床症状,且牙冠色泽正常,但偶有牙齿异常的松动,影像学可见诸如短锥状牙根等。该病诊断具有一定的挑战性。本文就牙根发育不良的发病因素、分子机制作一简要综述。

组织工程牙髓的研究进展

牙髓组织由于特殊的解剖结构,感染后难以自行愈合。目前,虽然根管治疗是一种治疗牙髓病变的有效手段,但仍存在诸多并发症。随着组织工程学的发展和牙源性干细胞的发现,已有学者试图进行牙髓组织再生的实验,并取得一定成果。本文就近年来组织工程牙髓的研究进展进行综述。

年轻恒牙牙髓血管再生治疗的疗效观察与分析

目的观察年轻恒牙牙髓血管再生治疗的临床疗效,以评价氢氧化钙糊剂介导牙髓感染的年轻恒牙血管再生治疗的可行性。方法 201 1年1月～2012年12月于广州市妇女儿童医疗中心口腔科就诊的34例均为外伤、龋病或非龋病等因素导致的牙髓感染、坏死、根尖周炎或根尖脓肿的年轻恒牙,分为试验组和对照组,各17例。试验组局麻下将患牙进行常规开髓引流,冲洗消毒,并内封氢氧化钙糊剂以行血管再生治疗,对照组行传统的根尖诱导成形术。术后随访并观察两组疗效。结果试验组4例分别于术后6～18个月复诊发现,根尖周病变愈合,根管腔变小,牙根形成,根尖孔闭合,10例术后12～18个月,根尖周病变愈合,牙根有延长,根管壁有增厚,根尖孔缩小,1例术后2个月出现疼痛和肿胀,2例分别于术后7个月和8个月出现疼痛,有牙龈瘘管形成,牙根发育停止。对照组1例根尖诱导12个月后根尖区病变消失,根端闭合,11例术后6～18个月后根尖孔有硬组织形成,根尖区病变区域缩小,但均未见牙根长度有明显改变;5例在诱导12～18个月后仍无明显的根尖屏障形成。两组治疗有效率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过内封氢氧化钙糊剂的血管再生治疗能够有效促进患有牙髓炎或根尖周炎的年轻恒牙的继续发育,具有广阔的临床应用前景。

TNF-α对人根尖乳头干细胞增殖及分化能力的影响

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人根尖乳头干细胞增殖及分化能力的影响。方法:采用组织块法获得人根尖乳头干细胞,免疫荧光法鉴定干细胞表面标志物;经TNF-α刺激后检测对干细胞增殖、克隆形成率及分化能力的影响。结果:免疫荧光显示人波形丝蛋白、STRO-1阳性,角蛋白阴性;10μg/L TNF-α在4天时促进根尖乳头干细胞的增殖,提高克隆形成率;抑制碱性磷酸酶活性及矿化结节形成。结论:炎性因子TNF-α对人根尖乳头干细胞的生物学特性具有一定的影响。

牙根持续发育期根尖乳头干细胞的研究进展

近年来,一些病例报告显示,患有根尖周炎或根尖脓肿的年轻恒牙,在经过保守的根管治疗后牙根尖持续发育成形。最近发现的存在于年轻恒牙根尖乳头中的新间质干细胞群,也许能部分解释这个问题,这些细胞被称为根尖乳头干细胞（stem cells from apical papilla,SCAP）。

人根尖乳头干细胞生成牙髓牙本质复合体的实验研究

目的应用组织工程方法，探讨人根尖乳头干细胞（SCAP）进行牙髓牙本质复合体再生的可能性。方法从牙根未发育完全的健康阻生智齿中分离牙乳头，用组织贴块法培养SCAP。细胞分别在成骨诱导液中培养3周及普通培养基中培养60d后，用茜素红检测钙结节形成情况，免疫荧光法和RT-PC检测成骨细胞标志物碱性磷酸酶（ALP）、骨涎蛋白（BSP）、骨钙素（0c）和牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。选取5～6周雌性裸鼠6只，将SCAP与羟磷灰石膦酸三钙（H～TcP）复合培养作为实验组，仅有HA／TCP作为对照组，分别植入同一只裸鼠背部皮下，左右侧各1个。8N后移植物行HE染色和免疫组化染色观察新生组织情况。结果SCAP在体外经成骨诱导3周及普通培养基培养60d后，茜素红染色阳性，且表达成骨细胞标志物ALP、BSP、OC和DSP。实验组移植物8N后可见牙髓牙本质样结构形成，且紧靠牙本质样结构内侧的细胞DSP阳性表达，而对照组未见任何硬组织形成。结论SCAP可应用于组织工程，进行牙髓牙本质复合体再生。

自噬在脂多糖诱导成牙本质细胞凋亡中的作用

目的探讨自噬在脂多糖(LPS)诱导成牙本质细胞(mDPC-23)凋亡中的作用。方法将5μg/mL脂多糖作用于成牙本质细胞0、6、12、24 h后,CCK8检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡。5μg/mL脂多糖作用细胞24 h后,用Western blot检测自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5以及自噬相关通路AKT、p-AKT、mTOR和p-mTOR的表达水平。以脂多糖(5μg/mL)和脂多糖(5μg/mL)+3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol/L)为实验组,不加脂多糖或3-MA为空白对照组,作用细胞24 h后,Western blot检测凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平。结果脂多糖作用mDPC-23细胞6、12 h,细胞增殖能力和凋亡无明显变化;作用24 h后,其增殖能力较对照组显著降低(P<0.05),凋亡水平较作用0 h明显增加(P<0.05)。且脂多糖作用mDPC-23细胞24 h后,自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5表达较对照组均明显增加(P<0.05),通路相关蛋白p-AKT和p-mTOR较对照组表达下降(P<0.05)。脂多糖组凋亡蛋白Caspase 3和Bax显著高于对照组(P<0.05);脂多糖+3-MA组中凋亡蛋白明显低于脂多糖组(P<0.05)。结论脂多糖可通过诱导mDPC-23自噬发生以促进细胞凋亡;而抑制自噬,可减弱脂多糖的促凋亡作用,提示在炎性牙髓组织损伤中,自噬发挥重要作用。

光动力疗法应用于根管消毒的研究进展

现阶段常规根管消毒未能达到最理想的效果,近年来很多学者致力于研究光动力疗法对根管消毒的疗效。有一些临床医生在根管消毒中尝试使用光动力疗法,期望得到比传统根管消毒更佳的效果。本文就光动力疗法运用于根管消毒的作用机制、作用效果及其影响因素、局限性等方面展开综述。目前的研究表明,细菌种类和状态、光敏剂、光源、操作环境和方法的不同均会影响光动力疗法的根管消毒效果;大部分研究认为光动力疗法用于根管消毒是有效的,具有基本无毒性、无刺激性、有利于牙髓再生术和舒适化口腔治疗等优点,但存在杀菌效果不如次氯酸钠的局限性,目前不能代替传统的化学冲洗,但是一种很有前途的辅助性补充方法;光敏剂的配方设计、光源的能量剂量和照射的最佳时间等还需要进一步的研究,在根管治疗中的应用也仍需更多的临床验证。

抑制自噬对根尖乳头干细胞成骨分化水平的影响

目的探讨抑制自噬对根尖乳头干细胞成骨分化水平的影响。方法 5、10 ng/mL肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分别处理根尖乳头干细胞(SCAPs),对照组不做处理,检测自噬相关蛋白LC3-II表达水平,GFP-LC3质粒转染并检测细胞内GFP-LC3数目,吖啶橙染色检测酸性囊泡情况。TNF-α,TNF-α+3-MA分别处理SCAPs,检测LC3-II的表达水平,GFP-LC3质粒转染并检测GFP-LC3数目,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡。TNF-α、TNF-α+3-MA分别处理SCAPs,对照组不做处理,诱导成骨向分化,qRT-PCR检测分化第3、7、14天时成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)的表达。结果 TNF-α可诱导SCAPs自噬活化:TNF-α组LC3-II/β-actin水平较对照组升高且具有浓度依赖性(P<0.05),TNF-α组GFP-LC3数目较对照组升高且具有浓度依赖性(P<0.05),TNF-α组酸性囊泡较对照组增多。3-MA可抑制TNF-α诱导的SCAPs自噬活化:TNF-α+3-MA组LC3-II/β-actin水平及细胞内GFP-LC3数目较TNF-α组显著降低(P<0.05),并下调细胞活力(P<0.05),上调细胞凋亡水平(P<0.05)。抑制自噬导致SCAPs成骨分化的抑制:TNF-α+3-MA组ALP、BSP表达量在分化第3、7、14天均较TNF-α组降低(P<0.05),OCN的表达量在第3、7天较TNF-α组降低(P<0.05)。结论 TNF-α可诱导SCAPs自噬水平的活化;自噬可能对TNF-α作用下的SCAPs起细胞保护作用,对抗细胞凋亡;自噬的抑制将下调TNF-α作用下SCAPs的成骨向分化水平,提示自噬在TNF-α作用下SCAPs的成骨分化过程中具有重要作用。

瘦素对人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质相关基因表达的影响

目的探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础。方法采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免疫荧光染色法、Western blot和qRT-PCR分别检测hSCAPs中leptin及其受体OBRb蛋白及基因的表达。实验组用质量分数为0.1μg/mL的leptin(0.1μg/mL组)和1.5μg/mL的leptin(1.5μg/mL组)分别刺激hSCAPs,对照组仅加入α-MEM培养基,CCK-8、流式细胞仪法、qRT-PCR分别检测各组hSCAPs增殖情况及成骨/成牙本质相关基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达。结果 hSCAPs表达leptin及其受体OBRb的蛋白及基因。与对照组相比,实验组细胞增殖能力及S期细胞比例均高于对照组(P <0.05),且其中1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组(P <0.05)。3 d和7 d时,0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量高于对照组,且1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P <0.05),14 d时0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量明显低于对照组(P <0.05);0.1μg/mL组、1.5μg/mL组OCN mRNA的表达量于7 d、14 d时高于对照组,且1.5μg/mL组均高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P <0.05),于14 d达到峰值。结论 Leptin可促进hSCAPs增殖,并上调hSCAPs成骨/成牙本质相关基因的表达。

功能性构音障碍患儿自愈情况分析

目的：分析未做治疗、初诊为功能性构音障碍的各个年龄阶段患儿的语音自愈情况。方法按年龄将247例功能性构音障碍患儿分成5组，1年后复诊时对患儿语音情况再次评估，统计分析患儿语音发育和年龄之间的关系。结果247例功能性构音障碍患儿中有83例（33．6％）自愈，其各年龄组比例如下：3～4岁（含3岁）组62．5％，4～5岁（含4岁）组28．7％，5～6岁（含5岁）组30．4％，6～7岁（含6岁）组40％，7岁以上（含7岁）组22．2％。各组之间差异总体比较具有统计学意义（χ2＝12．5， P＝0．014），其中3～4岁组自愈率与4～5岁组（χ2＝9．3，P＝0．002）、5～6岁组（χ2＝7．7，P＝0．005）及7岁以上组（χ2＝8．5，P＝0．004）的差异均具有统计学意义，而其余组间差异两两比较均无统计学意义（P＞0．05）。结论功能性构音障碍患儿不同年龄组自愈情况存在差异，其中3～4岁组构音障碍患儿自愈能力最强，建议可延长观察时间；7岁以上组自愈能力最弱。