表达猪融合IL4/6和抗菌肽重组酵母的构建及对仔猪免疫和生长的影响

为了研发安全有效和增强动物免疫力的新生物制剂,本实验以共表达猪IL-4/6与猪抗菌肽基因和猪IL-2与IL-4/6基因的两种重组毕赤酵母菌进行高密度发酵,并拌入饲料饲喂45日龄仔猪(分组为A1、A2和C组)。实验结果表明,在0~42d内,A1和A2实验组较对照组仔猪体重显著增加(P<0.05),CD^(8+)T细胞数量、特异性抗猪瘟和蓝耳病抗体显著增多(P<0.05),实验组的TLR-2、4、7、NF-k B(p50)、Bcl-2、CD45和CD^(62)L等免疫相关基因表达水平也明显升高(P<0.05)。此外,实验后期,A2组的前述免疫相关基因表达水平明显高于A1组和C组(P<0.05)。这些结果证明,A1和A2组免疫生物制剂能较好地促进仔猪的生长,提高其先天和获得性免疫机能,A2制剂的免疫调节生物效应较优,有望进一步研发为新型安全的免疫生物制剂,为动物的疾病防控提供新技术支持。

共表达猪IL-2与融合抗菌肽重组质粒的构建及其小鼠免疫效应研究

为研制新型高效安全的动物免疫调节剂,本实验采用In-fusion克隆技术、2Aself-cleavage技术构建pVAX1融合抗菌肽与白细胞介素2基因真核共表达载体:CAM PS-2A-IL2(VAP2)。构建的重组质粒用壳聚糖包裹并转染HEK293细胞,通过猪外周血淋巴细胞刺激实验检测表达上清活性。将包裹的重组质粒纳米颗粒腹腔注射接种4周龄的雌性昆明小鼠作体内生物学活性研究。并于28d后用大肠杆菌(Amp、Kana高耐受)和金黄色葡萄球菌(Amp、Kana高耐受)进行攻毒试验,观察每组小鼠的发病率和死亡率。实验结果表明VAP、VAP2两实验组CD^(4+)、CD^(8+)细胞,IgG,IgG1,IgG2a含量以及TLR s,IFN-r等免疫相关因子的表达水平均明显高于对照组pVAX1(P<0.05)。而且两实验组相比较,VAP2组明显高于VAP组(P<0.05)。以上实验结果表明,CS包裹的VAP,VAP2能有效防止病原微生物感染小鼠,增强机体的体液免疫和细胞免疫能力,并且VAP2的作用要明显优于单一抗菌肽融合基因,表明抗菌肽融合基因与白细胞介素2的共表达对动物有更好的保护效应,这为研究新型有效的免疫分子以增强机体对感染的抵抗力奠定了基础,具有重要的学术价值和应用。

猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母的构建及其对小鼠的免疫协同效应

以2A自剪接技术构建猪白细胞介素4／6与牛融合抗菌肽（FBC）共表达重组毕赤酵母，为研究重组酵母对小鼠体内外的免疫协同效应，首先采用猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验研究重组毕赤酵母的体外生物学活性；再以发酵的重组酵母菌液进行小鼠灌胃试验，在试验的28d用致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行腹腔攻毒，每周采血检测小鼠的生长和免疫功能变化。体外试验结果显示，试验组比对照组显著刺激猪淋巴细胞增殖；明显抑制大肠杆菌标准菌、大肠杆菌耐药菌、金黄色葡萄球菌标准菌和金黄色葡萄球菌耐药菌的生长（P〈0．05）。小鼠灌胃试验结果表明，试验组小鼠外周血的白细胞、Th和Tc细胞含量显著多于对照组；试验组tlrs（tlr-1，4，6，9），il-1，il2，il-4，il-6，il-7，il-15，il-23和cd62l基因的表达明显高于对照组；试验组血清中的IgG、IgGl和IgG2a的含量比对照组显著增加。此外，试验组小鼠的体质量比对照组明显增加。攻毒后试验组80％的小鼠存活，而对照组小鼠则有明显的炎症及临床症状，最后全部死于感染，这表明试验组的存活率显著高于对照组（P〈0．05）。白细胞介素4／6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母能够有效提高小鼠免疫功能，为探索研制增强动物免疫机能的安全高效的免疫调节剂提供新途径。