亚砷酸钠对神经干细胞活力及YAP蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对神经干细胞活力及转录共激活因子Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)表达的影响。方法以不同浓度(0、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2μmol/L)亚砷酸钠干预NE-4C细胞48 h,倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,Western Blot检测亚砷酸钠对细胞YAP、P-YAP蛋白的影响,qRT-PCR检测亚砷酸钠对YAP下游靶基因Gli2、Tead1、Tead2 mRNA表达的影响。结果亚砷酸钠引起细胞缩小,胞体萎缩,上清液中漂浮细胞及细胞碎片增加,贴壁能力显著下降,出现大面积死亡,各干预组细胞活力随亚砷酸钠浓度的增加而降低;亚砷酸钠干预后YAP蛋白表达升高,P-YAP蛋白表达降低,P-YAP/YAP相对表达水平呈下降趋势,提示亚砷酸钠可激活YAP,使其入核水平增加;YAP下游靶基因Gli2、Tead1、Tead2 mRNA的表达水平随亚砷酸钠浓度的增加而升高。结论亚砷酸钠可抑制NE-4C细胞活力、诱导细胞损伤,其可能机制与YAP蛋白的应激性清除受损细胞有关。

亚砷酸钠对NE-4C细胞Nrf2及Hippo信号通路的影响

目的探讨亚砷酸钠对NE-4C细胞的核因子-类胡萝卜素2相关因子(nf-e2-related factor 2,Nrf2)通路及河马(Hippo)信号通路的影响。方法以不同浓度亚砷酸钠干预细胞48h,采用CCK-8法检测细胞活力;分别采用Western blot法检测亚砷酸钠对NE-4C细胞Nrf2通路相关蛋白的影响,qRT-PCR检测亚砷酸钠对NE-4C细胞Hippo信号通路相关分子mRNA表达的影响。结果亚砷酸钠干预NE-4C细胞48h后,除0.2、0.4μmol/L组外,各干预组细胞活力随亚砷酸钠浓度的增加而降低;亚砷酸钠干预后抗氧化蛋白指标Nrf2、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达升高,Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch like ECH associated protein 1,Keap1)蛋白表达降低,呈剂量依赖性,提示亚砷酸钠可诱导NE-4C细胞产生氧化应激进而激活抗氧化系统;Hippo信号通路核心分子哺乳动物STE20激酶(mammalian STE20-like protein kinase 1,MST1)、Salvador同系物1(salvador homolog 1,SAV1)、Mps结合激酶激活物1(Mps once binder kinase activator like 1,MOB1)、大肿瘤抑制基因1(large tumor suppressor homolog 1,LATS1)、Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)mRNA的表达水平随亚砷酸钠浓度的增加而升高。结论亚砷酸钠可抑制NE-4C细胞增殖,诱导细胞产生氧化应激并激活Hippo信号通路。

亚砷酸钠对NE-4C细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的探究亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠神经干细胞(NE-4C细胞)增殖、迁移、凋亡及其机制的影响。方法以0(对照)、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2μmol/L NaAsO_(2)干预NE-4C细胞24h,分别采用CCK-8法、Transwell实验、Hoechst 33342荧光染色法、DCFH-DA荧光探针法检测NaAsO_(2)对NE-4C细胞增殖、迁移、凋亡及活性氧的影响,Western blot法检测细胞内质网应激相关蛋白的表达。结果NE-4C细胞增殖和迁移能力随NaAsO_(2)浓度的升高呈现降低趋势,凋亡细胞和细胞内活性氧水平则呈现逐步升高趋势,提示氧化应激在NE-4C细胞凋亡中发挥作用;GRP78、caspase-12、CHOP等内质网应激相关蛋白的表达水平随NaAsO_(2)浓度的增加而增加。结论NaAsO_(2)可抑制NE-4C细胞增殖及迁移,可能通过提高细胞内活性氧水平,引起细胞内质网应激,从而诱导细胞凋亡。