高毒力肺炎克雷伯菌分子特征、耐药性及院内感染情况分析

目的通过分析高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)耐药性及其分子特征,为该类型细菌防控提供依据。方法收集2020年1月至2021年12月肇庆市第二人民医院住院患者临床标本分离肺炎克雷伯菌(KP)368株,筛选感染hvKP患者的菌株及其临床资料。采用梅里埃VITEK2-Compact全自动微生物分析系统进行菌株鉴定和药敏试验分析其耐药性;采用PCR法扩增hvKP血清荚膜基因(K1、K2、K5、K20、K54和K57);采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析hvKP菌株分子流行特征。结果收集KP菌株368株,其中hvKP 36株占9.8%(36/368),标本来源主要是痰液、尿液、脓液、分泌物。368株KP包括332株经典肺炎克雷伯菌(cKP)和36株hvKP,其中118株cKP产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)占33.5%(118/332),高于hvKP产ESBLs11.1%(4/36);36株hvKP血清荚膜基因以K2、K57为主;36株hvKP的PFGE聚类分析显示相似度48.4%~100.0%,分为32个型别,呈多态性分布;S22与S23属于同一个克隆体(聚类A),S4与S9属于另一个克隆体(聚类B),菌株S5与S8(条带相似度为89.8%),S27与S29(条带相似度为88.4%)的条带分别只有两条差异,属于高度相关的菌株,存在亲缘关系。结论hvKP耐药性要低于cKP,血清荚膜基因以K2、K57为主,需加强耐药监测减少此类菌株的传播。

基于全基因组分析的肺炎克雷伯菌耐药性与流行病学特征分析

目的了解肇庆市第二人民医院肺炎患者肺炎克雷伯菌(KP)分离株和医院环境KP分离株的病原学和分子流行病学特征。方法对该医院2021年收集的49株肺炎患者KP分离株和2株医院环境KP分离株进行抗菌药物敏感性试验鉴定其耐药表型;全基因组测序确定其质粒、分子血清型、多位点序列分型(MLST)、毒力基因与耐药基因等分子特征;基于core-SNPs构建发育进化树,分析优势流行型菌株的进化特征。结果感染KP的肺炎病患者大部分有基础病(87.76%),年龄>50岁(89.80%)。51株KP耐药表型以耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)为主,存在优势耐药谱。携带的质粒主要为IncR、IncFⅡ(pHN7A8)和ColRNAⅠ,且IncFⅡ(pHN7A8)的pMLST为F33:A-:B-型。拥有优势分子血清型和MLST的菌株与优势耐药表型的菌株完全重合,为O_(2a)K_(64)-ST11 CRKP株。毒力基因和耐药基因显示,51株KP中2株菌株携带脲酶基因ureB。全部菌株携带耐药基因情况严重,且检测出10种不同亚型的β-内酰胺酶基因家族(bla_(CTX-M),bla_(ampC),bla_(OXA),bla_(LAP),bla_(KPC),bla_(LEN),bla_(SHV),bla_(SRT),bla_(TEM),bla_(OKP)),优势流行型菌株均携带bla KCP-2基因。系统发育树结果显示有26株优势流行菌株与我国泸州、衡阳的分离株属于一个克隆体,与北京、成都、巴黎的分离株属于一个克隆群。结论该医院感染KP的肺炎患者中存在一种优势流行的强耐药克隆体菌株(O_(2a)K_(64)-ST11 CRKP),且该型菌株已经出现在院内和社区的相互散播趋势。

不同耐药表型肺炎克雷伯菌生物膜形成能力与RyhB基因的关联性

目的探讨呼吸道感染分离的不同耐药表型肺炎克雷伯菌(KP)生物膜形成能力与RyhB基因的相关性及其临床意义。方法收集2018年10月2019年10月该院呼吸道感染分离的46株KP,检测菌株的耐药性,构建KP体外感染模型并通过结晶紫染色法定量检测KP生物膜形成能力;采用PCR法扩增RyhB基因。结果46株KP根据耐药谱分为4个耐药表型,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)6株(占13.0%),产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(ESBLsKP)18株(占39.1%),多重耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)13株(占28.3%),高毒力肺炎克雷伯菌(HvKP)9株(占19.6%)。科室来源排名前3为重症监护室11株(占23.9%),呼吸科8株(占17.4%),神经外科7株(占15.2%)。CRKP生物膜形成能力低于产ESBLsKP、MDRKP(P<0.05);HvKP生物膜形成能力低于产ESBLsKP、MDRKP(P<0.05);CRKP与HvKP生物膜形成能力比较差异无统计学意义(P=0.802);产ESBLsKP与MDRKP生物膜形成能力比较差异无统计学意义(P=0.466)。产ESBLsKP和MDRKP存在特异性条带,CRKP和HvKP不存在特异性条带。不同耐药表型与RyhB基因表达的交互作用与生物膜形成能力有关,且RyhB基因阴性表达时,会导致生物膜形成能力下降。结论该院的产ESBLsKP和MDRKP有较强的生物膜形成能力并容易携带RyhB基因,RyhB基因正调控KP生物膜的合成。

布鲁氏菌外膜蛋白Omp16的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

目的克隆、表达、纯化布鲁氏菌Omp16重组蛋白,并制备多克隆抗体,评估其作为布鲁氏菌蛋白质疫苗的可行性。方法 PCR法扩增全长及截短的布鲁氏菌Omp16基因,并将其克隆入p ET28a(+)载体中;经菌液PCR和测序鉴定后,再转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达及镍柱纯化后,获取高纯度的Omp16目的蛋白,然后将其免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体,Western blotting检测抗体的特异性免疫反应。结果成功构建了全长及截短表达的Omp16原核表达质粒,经IPTG诱导表达后,获得了全长及截短Omp16蛋白,免疫BALB/c小鼠后获得了高效价的抗Omp16多克隆抗体。Western blotting实验证实2种Omp16重组蛋白(Omp16-1、Omp16-2)均能与其相应抗体发生特异性免疫反应。结论该研究成功克隆、表达、纯化了全长及截短的Omp16重组蛋白,2种Omp16重组蛋白均具有很好的免疫原性,且能与高滴度的小鼠多克隆抗体发生特异性结合,为后续以Omp16蛋白为基础的疫苗研发奠定了实验基础。

肺炎克雷伯菌耐药表型及分子分型特征分析

目的探讨肺炎克雷伯菌耐药表型及通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析其分子分型,为完善肺炎克雷伯菌分子流行病学特征提供依据。方法收集2018年1-12月肇庆市第二人民医院非重复分离的51株肺炎克雷伯菌为研究对象,采用微量肉汤法进行药敏试验;采用改良产碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测CRKP表型;采用PFGE进行分子分型,建立PFGE DNA指纹图谱数据库,并运用Bionumeries6.6生物软件进行聚类分析。结果51株肺炎克雷伯菌根据耐药谱可以分为4个耐药表型,其中产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(产ESBLsKP)28株(54.9%)、耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌(CRKP)4株(7.8%)、多重耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)9株(17.7%)、高毒力肺炎克雷伯菌(HvKP)10株(19.6%)。PFGE聚类分析结果显示,51株菌株间相似度为47.8%~100.0%,可分为47个PFGE型别,PFGE型别相似度>85.0%共10株,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型具有100.0%相同PFGE图谱,可以视为4个具有分子流行病学意义的单一克隆群。结论肇庆市第二人民医院肺炎克雷伯菌耐药表型以产ESBLsKP为主,PFGE分型呈多样性,并存在院内散发感染风险,需要注意菌株型别变异趋势。

肺炎克雷伯菌临床分布及其碳青霉烯酶基因型检测分析

目的探讨肺炎克雷伯菌临床分布特征及检测其碳青霉烯酶基因型,为完善本院分子流行病学资料提供理论依据。方法对2015年1月~2017年12月本院患者送检的临床标本进行分离培养,采用BIOFOSUN微生物鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏分析,采用WHONET5.6进行临床分布及耐药性分析;对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行改良碳青霉烯类失活法试验(mCIM),PCR法检测碳青霉烯酶3种基因型(blaKPC、blaNDM、blaIMP),扩增产物使用BLAST软件分析;对mCIM试验结果与PCR结果进行一致性检验。结果共分离888株肺炎克雷伯菌,标本来源主要是痰液595株(67.0%)、尿液86株(9.7%)、分泌物80株(9.0%)、血液71株(8.0%);科室分布主要是新生儿科147株(16.6%)、呼吸科107株(12.0%)、普儿科103株(11.6%)、神经外科89株(10.0%)及ICU73株(8.2%)。肺炎克雷伯菌对大多数抗菌药物存在不同程度的耐药,耐药率低于15%的只有亚胺培南、美罗培南、阿米卡星及哌拉西林/他唑巴坦。对30株(3.4%)亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行mCIM试验,其中阳性29株(敏感性为96.7%);30株亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有7株扩增阳性,检出均为blaNDM基因型(敏感性为23.3%),mCIM试验结果与PCR结果一致性Kappa值为0.766;与此同时无检出blaKPC、blaIMP基因型。结论blaNDM基因型是本院肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶主要型别及对亚胺培南耐药的主要机制。

肇庆市某院血流感染病原菌临床分布及耐药性分析

目的:了解2016-2018年肇庆市某院血培养病原菌临床分布及耐药性,为该地区血流感染的诊断和治疗提供实验室依据。方法:选取2016年1月-2018年12月血培养分离的654株病原菌及检测资料,采用生物梅里埃BacT/Alert 3D全自动血培养仪进行血培养,采用BIOFOSUN细菌鉴定药敏系统对病原菌进行菌种鉴定与药敏试验;采用WHONET 5.6对结果进行分析。结果:共分离654株病原菌,革兰阳性菌中检出率排名前三依次是表皮葡萄球菌57株(32.8%)、金黄色葡萄球菌42株(24.1%)和腐生葡萄球菌、化脓性链球菌、溶血葡萄球菌均为10株(5.7%);革兰阴性菌中检出率排名前三依次是大肠埃希菌123株(25.6%)、肺炎克雷伯菌102株(21.3%)、弗氏柠檬酸杆菌72株(15.0%);革兰阳性菌阳性率前三位的科室是新生儿科67株(38.5%)、呼吸科15株(8.6%)、心内科12株(6.9%)和内分泌科12株(6.9%);革兰阴性菌阳性率前三位科室是呼吸科62株(12.9%)、泌尿外科45株(9.4%)、内分泌科45株(9.4%)和肿瘤一区45株(9.4%);耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为52.4%,未发现耐万古霉素株;产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌检出率分别是50.4%和33.3%。结论:该院引起血流感染病原菌中,革兰阳性菌以表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌为主,革兰阴性菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、弗氏柠檬酸杆菌较为多见,产ESBLs菌株较为普遍;定期对血培养病原菌进行临床分布及耐药性分析,对血流感染的治疗和诊断十分重要。

尿沉渣分析仪、尿干化学分析仪与光学显微镜对尿液红细胞的检测效果对照

目的对照尿沉渣分析仪、尿干化学分析仪与光学显微镜对尿液红细胞的检测效果。方法收集526例晨尿标本,对其尿液红细胞进行尿沉渣分析仪、尿干化学分析仪与光学显微镜检测,分析比较检测结果。结果本次研究将光学显微镜检法作为金标准,光学显微镜检法结果显示:280例阳性,占53.23%(280/526);246例阴性,占46.77%(246/526)。尿沉渣分析法:270例阳性,占51.33%(270/526);10例假阳性,占1.90%(10/526);260例真阳性,占49.43%(260/526);256例阴性,占48.67%(256/526);20例假阴性,占3.80%(20/526);236例真阴性,占44.87%(236/526)。尿干化学分析法:272例阳性,占51.71%(272/526)、5例假阳性,占0.95%(5/526)、267例真阳性,占50.76%(267/526);254例阴性,占48.29%(254/526)、13例假阴性,占2.47%(13/526)、241例真阴性,占45.82%(241/526)。将光学显微镜检法作为对照,尿沉渣分析法的敏感度为92.86%(260/280),特异性为95.93%(236/246),诊断符合率为94.30%,Kappa值为0.92;尿干化学分析法的敏感度为95.36%(267/280),特异性为97.97%(241/246),诊断符合率为96.58%,Kappa值为0.96。光学显微镜检法与尿沉渣分析法、尿干化学分析法在检测红细胞时具有较强的一致性。尿沉渣分析法与尿干化学分析法在检测红细胞时诊断符合率为97.72%(514/526),Kappa值为0.95,提示两组检查方法一致性较高。结论尿沉渣分析仪、尿干化学分析仪可用于尿液红细胞的筛查试验,需要采用光学显微镜进行复检,才能获得准确的、快速的检验依据。

细菌检验在复发性尿路感染患者中的应用效果及药物敏感性研究

目的:研究细菌检验应用于复发性尿路感染患者中的应用效果,分析其病原菌药物敏感性情况。方法:择取某院2018年3月~2019年3月期间收治的67例复发尿路感染患者作为研究对象,进行细菌检验和药敏性实验,根据药敏性结果针对性用药治疗。结果:49例患者为革兰阴性菌感染(73.13%)共计检出细菌176株,18例患者为革兰阳性菌感染(26.87%)共计检出细菌64株。在革兰阴性菌中,亚胺培南的药敏性最高,帕拉西林和左旋氧氟沙星次之;在革兰阳性菌中,亚胺培南药敏性最高,左旋氧氟沙星和环丙沙星次之。革兰阴性菌感染患者临床疗效与革兰阳性菌感染患者临床疗效差异不大,无统计学意义(P>0.05)。结论:应用细菌检验和药敏性实验,可促使复发性尿路感染患者抗生素药物合理化使用,值得推广。

成人细菌性肺炎诊断C反应蛋白与血常规联合检测的效果研究

目的:研究血常规与C反应蛋白检测联合检测在成人细菌性肺炎中的诊断价值。方法:择取某院2018年1月~2019年3月期间就诊的27例成人细菌性肺炎患者作为探究组,再择取同期收治的27例成人病毒性肺炎患者与体检的健康者27例分别作为参照1组和参照2组,所有研究对象均接受C反应蛋白与血常规联合检测。结果:探究组患者C反应蛋白水平与白细胞计数值显著高于参照1组与参照2组(t 1=9.6395,P<0.05;t 2=9.0749,P<0.05),参照1组C反应蛋白水平与白细胞计数值略高于参照2组(t=0.8952,P>0.05);探究组C反应蛋白阳性率和白细胞阳性率均高于参照1组和参照2组(χ_(1)^(2)=9.7835,P<0.05;χ_(2)^(2)=9.1937,P<0.05),参照1组C反应蛋白阳性率和白细胞阳性率略高于参照2组(χ^(2)=0.9368,P>0.05)。结论:C反应蛋白与血常规联合检测在诊断成人细菌性肺炎中应用价值较高。

无症状性传播疾病对女性免疫不孕的影响分析

目的 为进一步探讨无症状性传播疾病对女性免疫不孕的影响.方法 从2010年1月开始对766例不孕女性患者和332例已正常生育妇女生殖道分泌物样本常规进行淋球菌和支原体培养、衣原体、涂片找结核杆菌、假丝酵母菌、滴虫等病原体以及用金标法定性检测抗精子抗体、抗卵巢抗体、抗子宫内膜抗体、抗心磷脂抗体及抗绒毛膜促性腺激素抗体检查.结果 无症状性传播疾病病原体以解脲支原体、衣原体和淋球菌为主,阳性率分别为33.68％、18.80％、14.62％,高于对照组的15.66％、12.65％、9.64％,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）;无症状性性传播疾病病原体感染组的血液样本检测抗精子抗体、抗卵巢抗体、抗子宫内膜抗体、抗心磷脂抗体及抗绒毛膜促性腺激素抗体的阳性率为高于非感染组的,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）;继发不孕患者中检测出上述五种抗体阳性比率高于原发不孕患者.结论 性传播疾病主要病原体为以UU、CT、NG为主,病原体引起女性泌尿生殖道感染后容易诱发机体产生抗精子抗体、抗卵巢抗体、抗子宫内膜抗体、抗心磷脂抗体;分娩、妇科手术可增加性传播性疾病发生的危险性,也是诱发女性免疫性不孕症的重要因素.

三种ABO血型检测方法的临床应用

目的探讨微柱凝胶法(MGT)、凝聚胺法(MPT)及玻片法检测ABO血型的准确性及影响因素。方法分析我院在2017年12月～2018年6月收治的3000例患者的血型鉴定标本,使用微柱凝胶法(MGT)、凝聚胺法(MPT)及玻片法进行ABO血型正定型检测。比较三种血型检测方法血型检测结果的复查率;对血型结果可疑的标本,加做反定型进行复检,并分析影响ABO血型检测的因素。结果 3000例标本中,发现血型结果需复查者共57例。按复查率排列为:MGT(0.17%)<MPT(0.37%)<玻片法(1.37%)。MGT、MPT法的血型结果复查率比较,差异无统计学意义(χ~2=2.274,P=0.68551)。玻片法、MPT法的血型结果复查率比较,差异有统计学意义(χ~2=18.378,P=0.00104);MGT、玻片法的血型结果复查率比较,差异有统计学意义(χ~2=29.556,P=0.00001)。三种检测方法血型实验结果影响因素,标本因素:玻片法(70.7%)>MPT(27.3%)>MGT(20.0%);器材因素:MGT(80.0%)>MPT(9.1%)>玻片法(7.3%);操作因素:MPT(63.6%)>玻片法(22.0%)>MGT(0.0%)。结论三种ABO血型检测方法均存在某些不足,MGT的准确率高于MPT及玻片法,建议正反定型相结合以弥补正定型的不足,为临床输血治疗提供准确的ABO血型结果。

呼吸科住院患者痰液病原菌与耐药性变迁分析

目的探讨呼吸科住院患者痰液病原菌与耐药性变迁。方法选择2015年7月~2017年6月在我院呼吸科接受住院治疗患者痰液的阳性标本,利用上海复兴仪器进行培养结果鉴定;药敏结果测试利用MIC法和K-B法;药敏分析使用WHONET 5.4软件。结果在送检的痰液标本1300份中,检出病原菌160株,检出率为12.3%。其中革兰阳性菌株26株,占16.2%;革兰阴性菌株105株,占65.6%;真菌菌株29株,占18.2%;前3位分离最多菌株的病原菌分别为肺炎克雷伯菌37株(23.1%),真菌菌株29株(18.2%),铜绿假单胞菌25株(15.6%)。革兰阴性菌耐药率较低的抗菌药物包括头孢哌酮/舒巴坦及亚胺培南等,金黄色葡萄球菌耐药率较低的抗菌药物包括利奈唑胺、替考拉宁以及万古霉素等。相较于2015年7月~2016年6月,2016年7月~2017年6月的耐药性呈上升趋势。结论呼吸科患者痰液病原菌主要为革兰阴性菌,对常用抗生素显著耐药呈逐渐上升趋势发展。

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的:探讨患者产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性。方法:选取内科病房分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌共330株,针对以青霉素类和头孢菌素类为主的应用抗菌药的局限性,对ESBLs(+)耐药菌对临床常用抗菌药的敏感性进行测定并统计结果。结果:内科病房共收到痰好咽拭子标本共1800份,其中分离出致病菌614份,检出率为34.11%,其中有160株为肺炎克雷伯菌,大肠埃希菌为170株,两种菌的数量占致病菌总数的比例为52.88%。结论:为了预防ESBLs的产生和播散,在给患者使用抗菌药进行抗感染治疗的过程中必须同时进行ESBLs的常规检测,这对于抗菌药的有效控制和合理使用以及ESBLs(+)耐药菌的预防具有重要的意义。

2019年肇庆市不同来源金黄色葡萄球菌分离株分子流行与耐药特征研究

目的了解2019年肇庆市不同来源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,本文简称金葡菌)分子流行特征和耐药谱构成情况。方法对2019年分离自食品样、医院环境涂抹样和患者样中的117株金葡菌进行肠毒素基因聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测、抗生素敏感性试验及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST),并对优势序列型(sequence type,ST)菌株进行脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分析。结果117株金葡菌中sea、seb毒力基因在不同来源的菌株间的携带情况存在差异,pvl毒力基因在不同耐药表型的菌株间携带情况也存在差异;肇庆市金葡菌耐药表型分为耐甲氧西林金葡菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)株和甲氧西林敏感金葡菌(methicillin sensitive staphylococcus aureus,MSSA)株,MRSA株有4个优势耐药谱型,MSSA株则有3个优势耐药谱型。MSRA株耐药表型以多重耐药的MRSA株为主,且耐药情况严重;MLST分型、PFGE和ST型遗传进化分析显示,117株金葡菌可分为50个ST型,其中优势ST型有4个,分别为ST239、ST1891、ST3191和ST7,以患者分离株为主。4个优势ST型菌群间亲缘聚类距离较远,除ST7型菌群外,其他3个ST型菌株群中,不同来源的金葡菌间存在一定的亲缘关系。50个ST型可分为2个进化分支,其中有43个ST型在进化分支1上,7个ST型在进化分支2上,进化分支1与进化分支2间的菌株进化差异较大。结论肇庆市金葡菌毒力基因sea、seb在不同来源的菌株间携带情况存在差异,毒力基因pvl在不同耐药表型的菌株间携带情况也存在差异;耐药表型以多重耐药的MRSA株为主;肇庆市金葡菌流行4个优势ST型。不同来源间金葡菌存在相互散播的风险。肇庆市菌株主要位于进化分支1;防控部门应对不同来源和不同耐药表型的金葡菌制定相应的分级防控方案,并警惕不同来源的金葡菌相互散播的风险,防止高毒力强耐药的菌株引起本地区流行。同时注意ST1981型菌株,警惕该型菌株引起食源性疾病和院内感染的风险。