二穗短柄草BdDREB1H基因的克隆和表达分析

植物DREB转录因子在应答干旱、低温和高盐等非生物胁迫过程中发挥着重要作用,为了探讨二穗短柄草BdDREB1H转录因子在应答逆境胁迫的作用,对其序列进行了克隆、生物信息学和转录激活分析。然后利用qRT-PCR法对其在根、茎、叶3种组织和冷、干旱、盐和过氧化氢4种非生物胁迫条件下的表达模式进行了研究。结果显示,BdDREB1H转录因子基因全长编码框为735 bp,编码244个氨基酸,相对分子量26.34 ku,理论等电点5.63,不稳定指数(Ⅱ)64.17,为不稳定蛋白质;总亲水平均值-0.261,为亲水蛋白。多序列比对与结构域分析结果表明,BdDREB1H转录因子含有一个典型的AP2结构域,属于AP2/EREBP(APETALA2/ethylene-responsive element binding protein)超家族的DREB亚家族成员。进化分析显示,它与普通小麦的CBF蛋白亲缘关系较近,序列相似性64.44%。酵母单杂分析显示,BdDREB1H转录因子具有转录活性。组织表达分析显示,BdDREB1H基因在根、茎、叶中均有表达,其中在茎中表达量最高。胁迫处理表达分析结果表明,冷处理条件下,BdDREB1H的表达先升高后下降;干旱和氧化胁迫处理条件下,BdDREB1H在2 h后表达水平均显著高于对照;而盐胁迫条件下,BdDREB1H在2 h后表达水平均显著低于对照。这些结果表明,BdDREB1H转录因子可能参与了植物逆境胁迫反应,为进一步探索其在二穗短柄草中的抗逆分子机制奠定了基础。

巴山榧树内生真菌产生的二萜类物质的鉴别及对Hela细胞的抑制作用

目的:研究巴山榧树组织分离产生二萜类物质紫杉醇的植物内生菌及其产生的紫杉醇类似物对肿瘤细胞的抑制作用。方法:分离纯化出植物内生菌,研究其对革兰阳性(G+)和革兰阴性(G-)细菌的抗性,并对菌株BP6T3进行了分类鉴定,用高效液相色谱(HPLC)分析其代谢产物的保留时间、百分含量,液质联用仪(HPLC-MS)分析该物质形成离子片段的特征。初步探讨紫杉醇物质对Hela细胞的抑制作用,并采用添加前体物质等,以提高代谢产物产量。结果:分离得到的菌株BP6T3产生的次生代谢产物具有抗G+和G-细菌的双抗活性,该菌株经初步分类鉴定为青霉sp(Penicilliumsp)。其发酵液提取物保留时间为12.8 min,与紫杉醇对照品的保留时间基本一致。百分含量为15.8%,发酵液中紫杉醇类似物的含量达到16.59mg·L-1。HPLC-MS测定其代谢抽提物中该物质形成离子片段的特征,表明其离子片段信息与紫杉醇对照品完全一致,可初步判定青霉BP6T3可产生紫杉醇类化合物。该菌株产生的紫杉醇物质对Hela细胞有明显的抑制作用,并随着浓度的增加而增加。不同前体物质对该菌株产生紫杉醇代谢物有明显的影响,以L-苯丙氨酸为前体,产量增加最多,增长率为425.17%。结论:菌株BP6T3可被用于大规模生产抗癌药物紫杉醇。