中国人HCV标本库的建立

目的建立中国人HCV感染患者系列标本库。方法系列收集门诊及住院的HCV感染患者血液标本。所有血清标本进行基本的生化和病毒学检测。记录每一位患者的流行病学资料和临床与诊断检测结果。定期随访,不断扩充标本库。同时,对大部分HCVRNA阳性血清标本进行HCV基因型和亚型的确定。结果建立了中国人HCV标本库,收集605例HCV慢性感染患者的934份血清标本。完整记录了流行病学、临床及实验室资料,可提供研究所需的血清标本。对其中206份HCVRNA阳性感染者血清标本进行了基因型别的检测。序列与系谱分析结果显示1b87例(42.2%),2a26例(12.6%),3a32例(15.5%),3b30例(14.6%),6a31例(15.1%),未见1a和2b型。结论建立了中国人HCV标本库。为HCV的基础与临床研究奠定了良好的基础,也为其他疾病相关标本库的构建提供了参考。

丙型肝炎病毒基因组结构及功能

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是单股正链的RNA病毒,全长为9.6kb,包括1个大的开放阅读框(ORF)和两侧的5′,3′非编码区(UTRs).核糖体通过进入HCV5′UTR端的内部核糖体进入位点(IRES),将HCV基因组翻译成1个聚蛋白前体.前体聚蛋白被宿主和病毒的蛋白酶共同切割成为若干个具有独立功能的HCV蛋白,根据功能的不同分别命名为C、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B,它们不但在HCV的生活史中发挥着重要的作用,也影响着宿主细胞的信号传导、凋亡及物质代谢等一系列生化过程.近年来,随着HCV体外细胞摸型的不断发展,其病毒分子生物学方面的研究取得了很大的进展.本文从基因组结构及其编码的蛋白功能等方面阐述了HCV病毒的研究进展,为致病机理的研究及抗HCV药物的开发和疫苗研制等提供理论基础.

重庆地区HCV基因亚型的分布状态

目的:探讨重庆地区丙型肝炎病毒(HCV)流行的基因亚型分布状态.方法:在77份抗HCV抗体和HCVRNA均阳性的血清标本中,分别提取HCVRNA,通过逆转录巢式PCR(RTnestedPCR)扩增C基因的羧基端至E1基因的氨基端长度为474bp的片段,测定其核苷酸序列,与GenBank中已知的HCV序列进行系谱分析,确定HCV基因亚型.结果:77份HCV感染者血清标本通过RTnestedPCR检测均获得阳性条带,该方法特异性和敏感性均较好.序列与系谱分析显示1b29例(38%),2a10例(13%),3a12例(16%),3b11例(14%),6a15例(19%),未见1a和2b型.结论:重庆地区HCV流行的基因亚型有1b,2a,3a,3b,6a共5种,1b为流行的主要基因亚型.2a,3a,3b和6a型均占相当比例,初步说明重庆地区HCV流行的基因亚型呈现多样性.

阿德福韦联合恩替卡韦治疗多药物作用后慢性乙型肝炎的早期疗效评估及其影响因素分析

目的观察阿德福韦(adefovir,ADV)联合恩替卡韦(entecavir,ETV)治疗多种核苷(酸)类似物(nucleoside/nucleotide analogues,NAs)序贯治疗失败的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)的早期疗效,分析影响早期疗效的风险因素。方法收集51例经过多NAs治疗失败,最后接受ADV+ETV联合治疗的CHB患者,分析临床一般特征,对其肝脏生化学指标、免疫学指标及病毒学指标进行检测;对潜在影响联合治疗早期疗效的11个变量进行单因素分析,继之进行非条件Logistic回归分析。结果 51例患者半年内HBV DNA下降≥1×103拷贝/ml或达到不可测水平的有39例,早期应答率达76.5%;非条件Logistic回归分析显示影响联合治疗的因素有:基线丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平(P=0.028,OR=1.021,95%CI:1.002～1.039)和联合治疗前接受NAs治疗的时间(P=0.029,OR=0.945,95%CI:0.898～0.994)。结论 ADV+ETV是多种NAs序贯治疗失败CHB患者的有效补救治疗措施;基线ALT水平水平越高、联合治疗前NAs治疗时间越短的CHB患者联合治疗应答率越高。

高迁移率族蛋白B1在大鼠肝脏热缺血／再灌注损伤中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在大鼠肝脏热缺血／再灌注（I／R）损伤中的作用。方法90只Wistar大鼠被随机分为正常对照组、林格液组、丙酮酸乙酯（EP）治疗组。采用夹闭左、右肝蒂使95％肝脏缺血90min再恢复血流并切除未缺血的尾叶肝脏制模。林格液组和EP治疗组制模前分别经阴茎背静脉注射林格液4ml或EP3．26g／L（溶于林格液4ml中），于术后2、8、24、48h取下腔静脉血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平，处死动物后检测肝组织HMGB1、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-10（IL-10）含量。结果林格液组和EP治疗组血清ALT、AST水平均显著高于正常对照组，EP治疗组各时间点ALT及术后2h、8hAST水平均显著低于林格液组（P〈0．05或P〈0．01）。林格液组8、24、48h肝组织HMGB1水平显著高于正常对照组，EP治疗组仅48h显著升高；EP治疗组在8h、24h时HMGB1水平显著低于林格液组；林格液组和EP治疗组在8h时TNF—α水平均高于正常对照组，而EP治疗组显著低于林格液组（P〈0．05或P〈0．01）。各组IL-10水平无明显差异。结论HMGB1参与了肝I／R损伤的病理过程。

血清淀粉酶和脂肪酶联合检测在小儿胰腺炎诊断中的应用

目的探讨血清淀粉酶（AMY）和脂肪酶（LPS）联合测定在小儿急性胰腺炎（CAP）诊断中的价值。方法同时测定36例CAP患儿患病不同时间（2～4h、4～8h、16～24h、2～4d、6～8d）的血清、尿AMY和LPS，并以50例其他疾病的患儿作为对照。结果AMY及LPS的阳性率随着发病时间的延长有逐步升高的趋势。在2—4h时AMY、LPS联合检测，阳性率可增至27．8％（10／36）。4～8h时LPS阳性率明显高于AMY；2—4d后，AMY阳性率明显低落，而LPS的阳性率尚保持较高水平。LPS对CAP的诊断特异性明显高于AMY。结论血清AMY和LPS联合测定可为小儿胰腺炎提供重要的诊断依据。

胱抑素C在重度烧伤患者早期肾损伤中的临床意义

目的分析重度烧伤患者早期肾功能损害中胱抑素C(Cys-C)浓度的变化,探讨其临床意义。方法选取既往无肾病史烧伤患者87例,根据烧伤面积(BSA)分轻中度烧伤组、重度烧伤及时复苏组(4h内复苏)、重度烧伤延迟复苏组(>4h复苏)及40例体检健康人群作为对照组。分析入选对象血清中胱抑素C(Cys-C)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及尿微量白蛋白(MAL)的浓度,行统计学处理。结果轻中度烧伤组患者Cys-C、BUN、CR、MAL与对照组无统计学意义;重度烧伤及时复苏组血清Cys-C、MAL浓度高于对照组;重度烧伤延迟复苏组血清Cys-C的浓度较对照组与重度烧伤及时复苏组均有显著性增高;重度烧伤延迟复苏组血清Cys-C的浓度随着延迟复苏时间的延长而增高。结论重度烧伤患者血清Cys-C浓度与烧伤程度、复苏时间以及对肾脏的损伤程度呈正相关。

严重烧伤患者早期血清脂联素水平分析

目的探讨严重烧伤早期应激性高血糖患者血清脂联素的表达水平及临床意义。方法选取2007--2009年烧伤患者64例其中严重烧伤患者36例，伤后5～12h出现高血糖者25例（A组），血糖正常者11例（B组），28例中度烧伤血糖正常患者作为对照组（C组）。分别动态检测烧伤后3、5、12、24、120h患者血糖、血清脂联素（APN）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量的变化。结果严重烧伤患者应激性高血糖（A组）一般出现在伤后3～24h；A组的血清脂联素水平低于B组和C组。结论严重烧伤患者血清脂联素水平与烧伤的严重程度有关，与应激性高血糖的关系需进一步探讨。

丙型肝炎病毒1b型5′端5223bp半基因组扩增

目的:扩增丙型肝炎病毒(HCV)1b型5′端5223bp半基因组.方法:取5份HCV1b血清标本,采用3种RNA提取方法,比较几种逆转录酶及逆转录条件,选取不同Taq酶进行长链RTNestedPCR反应体系及循环条件的筛选和优化,利用最佳的模板提取方法及优化的RTPCR反应条件扩增出5′端长度为5223bp(5223bp)半基因组.结果:Trizol法可以获得完整的RNA模板,适合长链的扩增;应用ReverTraAceaTM酶和SuperScriptTMⅡ,反应条件为42℃10min后,42℃2min,48℃2min,30个循环,然后75℃,10min;可获得完整的cDNA模板;TaKaLaLATaqTM和PlatinumTaqDNApolymeraseHighFidelity采用两种扩增条件:①94℃变性2min,94℃30s,62℃30s,72℃4.5min,扩增30个循环;②94℃变性2min,94℃15s,68℃5min,扩增5个循环,然后94℃15s,68℃5min(每个循环延长10s),扩增20个循环,最后72℃延伸10min,均可获得HCV1b型5′端5223bp半基因组的阳性结果,TaKaLaLATaqTM扩增效果最好;PCR产物经核苷酸序列测定证实为HCV1b型.结论:通过各种条件的优化,成功地实现了5′端半基因组的扩增,为下一步全长质粒及复制子的构建打下了基础.

血浆同型半胱氨酸超敏C反应蛋白与老年脑梗死患者的相关性

目的探讨血浆同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)与老年脑梗死的相关性。方法选取82例老年脑梗死患者和80例健康志愿者,采用循环酶法及免疫透射比浊法测定血浆Hcy及hs-CRP水平。结果老年脑梗死组Hcy及hs-CRP检测结果均高于健康志愿者,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。神经功能中度损伤组Hcy及hs-CRP检测结果高于轻度损伤组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05);重度损伤组Hcy及hs-CRP检测结果高于中度损伤组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分表明Hcy及hs-CRP检测结果与脑梗死不同神经功能缺损程度组间呈正相关性(r=0.89、0.78,P<0.05)。结论血浆Hcy及hs-CRP水平与脑梗死患者神经功能的损伤程度呈正相关。

丙酮酸乙酯对肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察丙酮酸乙酯（EP）对肝脏热缺血再灌注损伤是否具有保护作用。方法20只Wistar大鼠随机均分为正常对照组（A组）和假手术组（B组）。肝I／R损伤模型采用钳夹除肝脏尾叶血管外的肝蒂90min，然后切除未缺血的尾叶方法制备，此模型可使95％肝脏缺血。另120只随机均分为肝缺血再灌注损伤（HIRI组，C组，接受HIRI），Ringer氏液组（D组，HIRI前尾静脉注射Ringer氏液），EP治疗组（E组，HIRI前尾静脉注射浓度为3．262mg／ml的EP 4ml）。A组取静脉血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平，随即处死取肝脏标本测丙二醛（MDA）含量；B组假手术后2h取标本；C、D、E组于术后2、8、24、48h取血，每组每个时间点处死10只取肝组织检测。结果与A组比较，B组血清ALT、AST水平和肝组织MDA含量仅轻度变化。与C组比较，D和E组在灌注8h、24h时血清ALT、AST水平均显著降低（均P〈0．01），尤其是E组。同时，EP治疗组在2h时肝组织MDA含量显著低于D和C组（均P〈0．01）。结论肝脏热缺血再灌注损伤早期EP可显著降低脂质过氧化损伤，从而发挥其对肝脏的保护作用。

西南地区HBV基因分型及其对阿德福韦酯治疗病毒学应答的影响

目的调查西南地区HBV基因型的分布情况,观察该地区HBV基因型对阿德福韦酯(ADV)治疗CHB24w病毒学应答的影响。方法采用聚合酶链反应-限制性片段多态性分析(PCR-RFLP)方法进行基因型检测,对其中58例ADV抗病毒治疗者进行回顾性分析。结果545例HBV感染者,B型占58.9%(321例)、C型占40.9%(223例),B+E型0.2%(1例)。ADV治疗12w时,B型组和C型组病毒学应答率分别为68.6%和73.9%;两组HBV DNA中位数较基线分别下降2.4log10拷贝/ml和3.1 log10拷贝/ml,两组差异均无统计学意义。治疗24w时,两组病毒学应答率分别为85.7%和91.3%;HBV DNA中位数较基线分别下降2.7 log10拷贝/ml和4.4log10拷贝/ml,两组差异均无统计学意义。结论西南地区HBV基因型以B型、C型为主。基因型对ADV治疗的CHB病毒学应答无显著影响。

浅议中美研究生教育之现状

本文就中美两国的研究生教育作一简单的对比分析,旨在为我国的研究生教育改革提供一些借鉴。

9例外科感染诺卡菌患者的临床特点及耐药性分析

目的探讨外科感染诺卡菌患者的临床特点及耐药性,提高对诺卡菌感染的认识以制定抗菌方案。方法采用VITEK-MS(基质辅助离子解析时间飞行质谱仪)对2011年9月至2021年11月分离自解放军总医院第四医学中心,9例诺卡菌感染患者不同种类标本的细菌培养结果进行鉴定,采用E-test方法测量不同种诺卡菌对8种抗生素的MIC值(最小抑菌浓度),根据CLSI(美国临床和实验室标准化协会)M24-2A药敏折点判断敏感性。结果9株诺卡菌非重复菌种分别来自于骨科5株、普外科1株、整形外科2株、急救部1株。菌种分布为:皮疽诺卡菌4株、盖尔森基兴诺卡菌2株、巴西诺卡菌1株、豚鼠耳炎诺卡菌1株、脓肿诺卡菌1株。9株诺卡菌药物敏感性最高的是复方新诺明、阿米卡星和利奈唑胺,敏感率均为100%。结论诺卡菌感染较为罕见,我院诺卡菌分布以骨科及整形外科感染为主,不同诺卡菌耐药性差异较大,复方新诺明、阿米卡星及利奈唑胺较敏感,临床治疗多采用甲氧苄啶-磺胺甲悪唑联合其他敏感药物同时进行局部手术清创为主。

干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎长期随访中的复发及其影响因素

目的观察和分析慢性丙型肝炎患者经干扰素联合利巴韦林治疗获得应答后的复发情况及其影响因素。方法收集长期随访资料完整的慢性丙型肝炎患者资料纳入回顾性统计分析。治疗方案为聚乙二醇干扰素或普通干扰素联合利巴韦林治疗，疗程依基因型分别为24周（非1b型）或48周（1b型）。主要观察指标为血清HCVRNA载量，影响因素纳入了年龄、性别、HCV基因型、基线HCVRNA载量及干扰素类型。计量资料用t检验，计数资料用χ2检验，影响因素的分析用二分类logistic回归分析。结果146例慢陛丙型肝炎患者抗病毒治疗结束后平均随访（33．5土16．4）个月，最短12个月，最长85个月，累计复发率为14．8%。随访第1～6个月内复发概率最大，为8．W／O，第7～12个月为1．4%、第13～18个月为1．40／0、第19～24个月为1．6%、第25～30个月为1．1％，30个月后未见复发。65．0％（13／20）的复发病例发生于治疗结束后6个月内，但之后2年内仍有35．0%（7／20）病例复发。HCV基因lb型和非1b型患者复发率分别为20．40／0和12．2%，两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。复发和未复发患者平均基线HCVRNA载量分别为（6．86±1．01）log。拷贝／ml和（6．60±1．21）logl0拷贝／ml，两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）l聚乙二醇干扰素-2b，聚乙二醇干扰素α-2a及普通干扰素a治疗后复发率分别为12．1％、14．O％及15．O‰组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）l复发患者的平均年龄为（46．15±11．89）岁，高于未复发患者的（37．41±10．65）岁，两组比较，差异有统计学意义（t=3．352，P=0．001）。结论接受病毒基因型指导的标准抗病毒方案的患者，只有年龄与复发显著相关，高龄患者容易复发。基因型指导的抗病毒方案基本上消除了病毒因素对治疗应答的影响。