流动相的pH值和离子强度对牛血清蛋白高效液相色谱手性柱分离性能的影响

利用羰基咪唑-柱上衍生法制得牛血清蛋白(BSA)生物手性柱,并研究它在高效液相色谱中对3种对映异构体(色氨酸、匹多莫德及4-苯基-1,3-恶唑烷-2-硫酮(L-苯))的手性分离性能。实验结果表明:随着pH值从5.0上升到7.0,由于L-色氨酸与BSA有固定的作用位点,使得其保留值随着pH值的增加而大幅增大。而D-色氨酸与BSA无固定作用位点,其保留值随pH变化基本不变,分离度由1.15上升到8.91,增加了6.8倍;酸性样品匹多莫德与BSA主要是静电作用,与色氨酸相反,其对映体的保留值随着pH的增加逐渐减小,分离度逐渐下降,pH 7.0时为单峰,pH 5.0时Rs=1.27;中性样品L-苯的分离度随着pH值的增加有小幅增大。随着离子强度的减小,3对对映体的保留都增强,分离度增大,增加的幅度依次为色氨酸>匹多莫德>L-苯。