一种快速鉴定柑橘黄龙病耐性种质材料的方法

【目的】研发一种快速鉴定柑橘黄龙病耐性种质材料的方法,为加快柑橘黄龙病耐性育种进程和提高育种效率打下基础。【方法】以收集的36份疑似对柑橘黄龙病具有耐性的柑橘种质为材料,采用直接高接于感染黄龙病菌柑橘树上的方法(高接染毒鉴定法),通过田间症状观察结合定量PCR检测对试验材料的耐病性进行鉴定评价。【结果】春季高接供试材料1个月后接芽萌发,3个月后(2018年6月5日)首次在KH-14上出现典型的叶片斑驳型黄化症状,4个月后(2018年7月5日)观察有23份种质材料的叶片出现斑驳型黄化症状,另外11份种质材料未表现症状;6个月后(2018年9月4日)观察发现KH-18、KH-12、KHY-4、KHY-5和KHY-6等5份种质材料的生长虽然较正常,但叶片已出现黄化症状,只有KH-21的枝梢生长良好,无黄梢和斑驳型黄化叶,初步判定为对黄龙病具有耐性的种质材料。对6份种质材料的定性PCR检测结果表明,KH-21为阴性,其他5份材料为阳性;实时荧光定量PCR检测结果,KH-21的平均黄龙病菌含量为1870.0个细胞/μg DNA,对照材料平均黄龙病菌含量为372285.5个细胞/μg DNA,表明KH-21对柑橘黄龙病具有耐性。【结论】高接染毒鉴定法鉴定周期在6个月左右,具有通量大、时间短、效率高、成本低及结果准确等优点,能达到快速鉴定柑橘品种对柑橘黄龙病耐性的目的,可在柑橘黄龙病耐性鉴定中推广使用。

田间耐柑橘黄龙病橘类品种材料的评价研究

研究对广西田间疑似耐柑橘黄龙病橘类品种材料进行了收集,共收集了82份橘类品种材料,其中沙糖橘28份、椪柑46份、桂橘1号5份、南丰蜜橘1份及蜜广橘2份,对收集的疑似耐病材料进行嫁接和保存,并建立国内首个耐柑橘黄龙病橘类品种材料保存圃。通过高接染毒法对疑似耐黄龙病橘类柑橘品种材料进行鉴定,结合田间症状观察诊断和定性/定量PCR检测结果,初步筛选出13份对黄龙病有一定耐性的橘类品种材料,为柑橘的抗病育种提供依据。

基于SRAP分子标记的11份柑橘种质材料遗传多样性分析

为分析11份柑橘种质材料的遗传多样性,本研究以7份沙糖橘种质以及4份其他柑橘种质为试验材料,利用SRAP分子标记进行分析,并用UPGMA法进行聚类。结果表明:160对引物组合筛选出20对引物组合扩增条带清晰,11份种质材料两两之间遗传相似系数在0.322 1~0.931 6之间。沙糖橘和金葵蜜橘间的遗传相似系数最大,为0.931 6;姑婆山野生元橘和宫川间的遗传相似系数最小,为0.322 1。聚类结果显示,在相似系数为0.861 9时,早熟沙糖橘、沙糖橘、金葵蜜橘、灯笼沙糖橘、八月橘聚为一组,在0.810 8时与红皮酸橘聚为一组,继而再与别的柑橘品种聚为一组。金葵蜜橘与沙糖橘间不同引物扩增的电泳条带存在特异性,证实了金葵蜜橘是沙糖橘的芽变品种。灯笼沙糖橘是沙糖橘变异新类型,二者间遗传相似系数为0.921 1,不同引物扩增结果存在特异性条带,证实了灯笼沙糖橘是沙糖橘的芽变新类型,可以登记为新品种;根据遗传相似系数、聚类分析、不同引物扩增产物的电泳结果推测沙糖蜜柑是沙糖橘和温州蜜柑的自然杂交后代,可以登记为新品种;姑婆山野生元橘与其它柑橘材料亲缘关系较远,也佐证了姑婆山野生元橘比道县野橘更为原始,是一个独特的、原始的宽皮柑橘类型;在7份沙糖橘材料及4份其它柑橘材料中,沙糖橘与红皮酸橘亲缘关系最近,二者在遗传相似系数0.822 5处聚为一类,由此推测沙糖橘有可能由红皮酸橘进化而来。目前关于沙糖橘遗传多样性方面的研究较少,本研究结果可为沙糖橘的遗传多样性以及不同沙糖橘品种的来源和亲缘关系研究提供理论依据。