酶联免疫法与胶体金层析法对HIV抗体检测结果的比较

目的评估酶联免疫法与胶体金层析法对HIV抗体的检测性能。方法2021—2022年对3423份血液样本同时用酶联免疫法和胶体金层析法检测,以免疫印迹法为金标准确证结果。结果酶联免疫法检出有反应样本5份,胶体金层析法检出有反应样本9份,经免疫印迹实验确证阳性4份。酶联免疫法假阳性1份,假阳性率0.03%;胶体金层析法假阳性5份,假阳性率0.15%,2种方法差异无统计学意义(χ^(2)=2.64,P=0.26)。2种方法检测HIV抗体的灵敏度均为100%,酶联免疫法的特异度(99.97%)略高于胶体金层析法(99.85%),Kappa值均≥0.6,检测一致性较好。结论酶联免疫法和胶体金层析法均可用于HIV抗体检测,酶联免疫法的假阳性率更低,胶体金层析法操作更为简便,可结合实际需要选择合适的方式进行HIV筛查。

江苏省淮安市蚊虫感染沃尔巴克氏体的调查

目的了解淮安市蚊种自然感染沃尔巴克氏体Wolbachia的特点及Wolbachia种群遗传多样性研究,为蚊媒及蚊媒传染病的生物防治提供科学依据。方法用诱蚊灯法采集蚊虫,对采集的蚊种进行DNA提取,采用PCR扩增细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mt COI)基因及wsp基因、测序及系统进化分析。结果在淮安市捕获蚊种5种共计1 640只,Wolbachia在蚊虫样本组的总感染率为28. 05%(23/82)。淮安市蚊种携带的Wolbachia的核苷酸序列相似性为71. 5%~99. 9%,氨基酸序列相似性为70. 7%~99. 9%。系统进化分析显示淮安蚊种携带的Wolbachia被划分为Mors、Dei和Pip组。淮安蚊种携带的Wolbachia种群有4个单倍型,Wolbachia的单倍型多样性Hd=0. 597,核苷酸多样性π=0. 120,多态性位点S=151。结论淮安市蚊虫普遍存在Wolbachia的感染,其基因型为Mors、Dei和Pip。

脂肪酶产生菌的筛选及鉴定研究

为寻找合适的产脂肪酶野生菌,以期能高效的催化合成生物柴油。通过添加橄榄油作为惟一碳源进行富集培养,然后以透明圈平板筛选法从油污土壤样品中成功地筛选到了一株酶活力值为10.12U/ml产脂肪酶菌株。通过对该菌株表型、生理生化特征分析及16S rRNA部分序列的系统进化发育分析鉴定该菌为芽胞杆菌属,定名为BacilluspumilusB2。

核酸检测与抗体检测在HIV感染中的应用

目的比较核酸检测与抗体检测在人类免疫缺陷病毒（HIV）感染诊断中的准确性。方法回顾性分析2005~2014年124例确诊HIV感染者的抗体检测与核酸检测资料,并分别比较两种方法在早期感染者（76例）与中晚期感染者（48例）中的检出阳性率。结果早期感染者核酸检测阳性率（94.74%）高于抗体检测（84.21%）,中晚期感染者抗体检测阳性率（97.92%）高于核酸检测（81.25%）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论核酸检测在HIV感染早期准确性高于抗体检测,而在HIV感染中晚期,抗体检测准确性较高。

基于mt COI基因序列的DNA条形码技术在江苏沿江长角血蜱鉴定中的应用

目的了解长角血蜱在盱眙地区(JS种群)的遗传多样性和不同地理种群间的分子进化关系,为该地区长角血蜱及其携带的病原体防控提供理论依据。方法采集盱眙县1例发热伴血小板减少综合征(SFTSV)确诊病例家附近的长角血蜱,并对其mt COI基因序列进行系统进化分析、种群遗传多样性分析及遗传结构分析。结果采集寄生蜱20只,游离蜱23只。JS种群的mt COI基因的核苷酸同源性为97.00%~100.00%,属"Compound"进化谱系枝。JS种群共有5个单倍型,单倍型多样性Hd=0.917,核苷酸多样性为π=0.005,多态性位点S=9。Tajima's D值为-1.456,核苷酸错配分布图为单峰。结论江苏沿江地区长角血蜱JS种群可能经历种群的扩张。

淮安市男男性行为人群HIV感染情况及影响因素分析

目的分析淮安市男男性行为者HIV感染情况及其影响因素,为制订防治对策和干预措施提供依据。方法采用滚雪球、网络等方法招募对象,由经过专业培训的调查员对其进行面对面的问卷调查,并采血样进行艾滋病病毒(HIV)抗体检测。结果共监测男男性行为者1752人,其中艾滋病知晓率为91.64%,HIV阳性率为5.19%。最近6个月有肛交行为的占61.36%,最近1次发生肛交没有使用安全套的占33.93%,最近6个月发生同性商业性行为3.10%,最近1次商业性行为时没有使用安全套占28.13%。吸毒的占1.90%,没有研究对象与别人共用过针头。干预服务接受率为74.35%,同伴教育接受率为60.17%。除最近6个月是否有肛交行为(χ2=6.85,P<0.05),其他情况下HIV抗体检测阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论应继续加强淮安市男男性行为人群的健康教育和干预措施。

汉城病毒的TaqMan-BHO探针实时荧光定量检测方法的建立

目的建立一种汉城病毒实时荧光定量RT-PCR快速的检测方法。方法用专业软件设计引物和TaqMan-BHQ探针,以人工合成L基因的片段作为模板,进行实时荧光定量RT-PCR研究。结果模板的Ct值与模板稀释浓度的对数存在良好的线性关系,标准曲线为Y=-3.607 X+41.84,r2=0.998,PCR扩增效率为108.1%,其最低检出限为53.2copies/μL。结论应用TaqMan-BHQ1探针的实时荧光RT-PCR检测汉城病毒核酸,具有耗时短、灵敏度高等特点。

2010-2014年淮安市男男性行为人群安全套使用及HIV和梅毒感染情况

目的分析淮安市男男性行为者安全套使用情况及艾滋病和梅毒检测阳性情况,为制订防治对策和干预措施提供依据。方法采用"滚雪球"、网络招募等方法招募对象,由经过专业培训的调查员对其进行面对面的问卷调查,并采血样进行艾滋病病毒(HIV)、梅毒和丙型病毒性肝炎病毒(HCV)抗体检测。结果 2010-2014年共监测男男性行为者1 752人,HIV和梅毒抗体检测阳性率分别为5.24%和6.51%,各年份间HIV阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05);但梅毒阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。最近一次同性肛交及同性商业性性行为安全套平均使用率分别为66.11%和70.59%;最近一次异性性行为安全套使用率为34.91%,不同年份间使用率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。除最近一次同性肛交人群中是否使用安全套对梅毒抗体检测阳性率的影响有统计学意义(P<0.05)外,其他性行为特征人群不同安全套使用间梅毒及HIV抗体检测阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。男男性行为者接受安全套宣传及艾滋病咨询检测和同伴教育分别占74.54%和60.39%,各年份间两种干预措施接受率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论淮安市男男性行为人群安全套使用率较低,HIV和梅毒阳性率较高,应继续加强健康教育和干预措施。

2010-2014年淮安市男男性行为人群艾滋病哨点监测

目的 分析淮安市男男性行为者艾滋病流行趋势,为制订防治对策和干预措施提供依据。方法 2010-2014年,采用滚雪球、网络等方法招募男男性行为者进行面对面的问卷调查,并采血样进行HIV、梅毒和丙型肝炎病毒（HCV）抗体检测。结果 共监测男男性行为者1 752人,艾滋病知晓率为89.8%-93.7%;HIV阳性率为4.1%-5.9%;梅毒阳性率为3.7%-10.3%,HCV阳性率为0-0.3%。最近一次同性肛交安全套使用率为58.4%-69.3%;最近一次同性商业性性行为安全套使用率为55.6%-100.0%;最近一次异性性行为安全套使用率为25.4%-43.6%。干预服务接受率为69.8%-78.0%,同伴教育接受率为46.0%-78.7%。结论 淮安市男男性行为人群HIV和梅毒阳性率较高,应继续加强健康教育和干预措施。

淮安市艾滋病异性性传播方式及分子流行病学研究

目的了解淮安市经异性性传播感染的HIV/AIDS人群的性传播构成方式以及病毒亚型分布情况。方法对艾滋病病例报告系统中,现住址为淮安市的经异性性传播病例进行面对面问卷调查,内容包括社会人口学特征和高危行为史。从经异性性传播感染的HIV/AIDS病例血液中提取DNA或RNA,用巢式PCR或RT-PCR方法扩增gag、env基因区片段,测定序列并分析。结果共调查HIV/AIDS病例166例,经商业异性性传播者占38.0%,经婚内或者固定性伴侣性传播者占40.4%,经非婚非商业异性性传播者占21.7%。结合gag和env 2个基因片段,最终确定了103分样本的基因亚型,发现有6种HIV-1亚型和重组型,其中,CRF01_AE占52.4%、CRF07_BC占20.4%、CRF08_BC占11.7%、B'(泰国B)占9.7%、B(欧美B)占3.9%、CRF55_01B占1.9%。结论淮安市HIV经异性性传播方式以经婚内或固定性伴传播为主;感染HIV-1流行株较为复杂,存在6种亚型和重组型,其中CRF01_AE重组型是主要流行株。

淮安市2014—2015年艾滋病筛查实验室质量考评结果分析

目的了解淮安市艾滋病网络筛查实验室HIV抗体检测工作的质量、实验室管理水平及在日常工作中存在的问题,为提高检测和管理水平提供依据。方法根据《全国艾滋病检测技术规范》(2009版)和《全国艾滋病检测工作管理办法》的要求制定督导检查表,进行现场调查及血清学检测考核,并对结果进行综合分析。结果 2014—2015年,淮安市58家艾滋病筛查实验室均参加质量考评,2年均分差异无统计学意义(P>0.05)。不同机构综合得分差异均无统计学意义(P>0.05);评分为优秀、良好、合格的实验室2年分别为46、8、4家和47、10、1家,差异无统计学意义(P>0.05)。现场检查不规范项目主要有:仪器设备检定/校准不及时、洗眼设备和高压灭菌设备配备及使用不到位、工作人员的健康监护不健全等;质控血清考核不规范项主要有:临界值计算、原始记录、室内质控、报告书写、检测程序等。结论淮安市艾滋病筛查实验室管理水平、检测能力均达到国家要求,基本满足艾滋病检测工作的需要,但实验室的质量控制和日常管理还需进一步提高。

某市2013～2015年男男性行为人群人类免疫缺陷病毒新发感染研究

目的了解淮安市男男性行为(MSM)人群中人类免疫缺陷病毒(HIV)新发感染情况及其影响因素。方法 2013~2015年通过网络招募MSM,进行问卷调查以及实验室检测;检出的HIV阳性样本再应用BED HIV Ig G捕获酶免疫法(BED-CEIA)检出其中的新发感染样本,计算新发感染率。以HIV阴性为对照,采用Logistic回归分析探讨其影响因素。结果 2013~2015年共招募1 202名调查对象,新发感染率分别为1.81%、1.89%和3.18%,3年间差异无统计学意义(P>0.05)。多因素分析显示在本地居住时间和梅毒感染是HIV感染的主要危险因素。结论淮安市MSM人群HIV新发感染率较其他地区低,但仍在不断增长,影响新发感染的主要因素为本地居住时间和梅毒感染,应加强MSM人群的干预力度,同时开展多种疾病联合监测,遏制疾病扩散。

未分类黄病毒研究进展

对未分类黄病毒的发现过程、结构特征、与其他黄病毒关系等方面做了介绍,并重点对未分类黄病毒的研究进展进行了综述。

淮安市新报告HIV-1感染者的分子传播网络特征研究

目的 了解淮安市新报告人感染HIV-1毒株的流行特征、亚型及分子传播网络特征。方法 采集淮安籍HIV-1确证阳性感染者血液标本,利用巢式(RT-)PCR方法扩增pol基因片段,测序并构建分子传播网络。结果 淮安市新报告人感染的HIV-1基因亚型有9种,分别为CRF01_AE (38.5%,47/122)、CRF07_BC (38.5%,47/122)、CRF67_01B (8.2%,10/122)、CRF68_01B (4.9%,6/122)、B (3.3%,4/122)、CRF08_BC (3.3%,4/122)、CRF55_01B (1.6%,2/122)、CRF85_BC (0.8%,1/122)和CRF52_01B (0.8%,1/122)。60条pol基因序列形成10个分子传播簇,入网率为49.2%,其中最大的分子传播网络由CRF07_BC基因型构成。logistic回归分析显示已婚有配偶(与丧偶相比,OR=0.242,95%CI:0.006-0.972)、同性传播(与异性传播相比,OR=2.113,95%CI:1.020-4.377)、基因型CRF07_BC (与其他重组型相比,OR=5.972,95%CI:1.655-21.554)更容易进入HIV-1分子传播网络并传播流行。结论 淮安市新报告人感染HIV-1的基因型具有多样性,分子传播网络中存在耐药株传播风险,因此应加强HIV-1的分子流行病学调查,全面开展基线耐药监测,防止耐药毒株在人群中的进一步传播和扩散。

长白县黑线姬鼠携带汉坦病毒的S基因特征研究

为了解长白县黑线姬鼠中汉坦病毒流行情况及病毒型别,采用巢式RT-PCR方法筛查鼠肺RNA,并对PCR阳性样本进行全S基因的扩增、克隆及测序;构建系统发生树并进行分子进化分析。结果显示:共捕获黑线姬鼠58只,共检测出4份阳性标本,阳性率6.90%。经过序列测定及进化分析显示黑线姬鼠所携带的病毒与汉滩病毒第6基因亚型标准株核苷酸的同源性为95.8%～96.3%,氨基酸同源性为98.6%～99.5%。同时发现,长白县黑线姬鼠携带的汉滩病毒的NP蛋白共有1个特异性氨基酸位点为S387。

淮安市男男性行为人群感染HIV-1的分子特征研究

目的了解江苏省淮安市男男性行为(men who have sex with men,MSM)人群感染HIV-1的基因亚型分布和分子特征。方法以现住址为淮安的HIV-1确证感染者为研究对象,利用巢式逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法扩增env基因片段,测序并进行分子进化分析。结果淮安市MSM人群感染的HIV-1基因亚型有5种,分别是CRF01-AE(68.21%,118/173)、CRF07-BC(16.76%,29/173)、CRF08-BC(0.58%,1/173)、CRF55-01B(1.16%,2/173)及B亚型(13.29%,23/173)。系统进化分析显示淮安流行的毒株与云南、辽宁、广西、江苏及湖南分离的同源性高,在进化树上与对应亚型的参考株聚集成簇。流行的优势亚型CRF01-AE中共检测出58个单倍型,单多样性指数(0.999)和核苷酸的多样性指数(0.150)显示淮安市株具有较高的遗传多样性。结论淮安市MSM人群感染的HIV-1存在多样性,其中CRF55-01B为首次在淮安市MSM感染人群发现,CRF01-AE是淮安市MSM人群中感染的主要流行株。

基孔肯雅病毒的纳米金实时荧光PCR方法的建立

目的建立一种检测基孔肯雅病毒纳米金实时荧光定量PCR的方法。方法以课题组建立的普通实时荧光PCR方法为基础,在PCR体系中添加不同大小粒径的纳米金进行体系优化,评价优化后的体系。结果添加纳米金的实时荧光PCR较不添加的扩增效率高;优化后的纳米金实时荧光PCR产物的Ct值与模板稀释浓度存在良好的线性关系,回归方程:y=-3.31x+41.78,R2=0.9997,PCR扩增效率为99.5%。结论纳米金能提高实时荧光PCR的反应效率。

淮安市异性性传播途径感染HIV-1毒株的流行特征及分子进化研究

目的了解淮安市经异性性传播途径感染HIV-1流行毒株的流行特征、亚型分布及进化特点。方法以淮安籍HIV-1感染者为对象,收集相关流行病学资料,用巢式（RT-）PCR方法扩增env基因片段,测序并进行分子进化分析。结果淮安市经异性性传播途径感染的HIV-1基因亚型有5种,分别是CRF01_AE（53.68%,73/136）、CRF07_BC（18.38%,25/136）、CRF08_BC（0.09%,12/136）、B（14.71%,20/136）和A1（0.04%,6/136）。env基因的核苷酸同源性分析显示,淮安市流行毒株与广东、湖南、安徽、江苏分离株的同源性高。分子进化及遗传距离分析提示淮安市流行的CRF01_AE重组株分为2簇（Clade A和Clade B）。其中,Clade A的组内遗传距离在淮安市流行株HIV-1的各基因亚型中最大。同时发现,淮安市流行的CRF01_AE重组株的进化速率为3.82×10-3（95%HPD 3.49~4.18×10-3）替换/位点/年,tMRCA为14.3年。结论淮安市经异性性传播途径感染的HIV-1毒株存在多样性,CRF01_AE重组株是淮安市HIV-1的主要流行株,于1999年8月传入。

江苏省淮安市啮齿动物感染正汉城病毒的基因特征研究

目的了解淮安市啮齿动物携带正汉城病毒(Seoul orthohantavirus,SEOV)的分布特点及SEOV的种群遗传多样性特征,为肾综合征出血热防治提供科学依据。方法用夹夜法采集啮齿动物,提取肺组织RNA,采用PCR法扩增SEOV的S基因,对S基因序列进行系统进化及遗传多样性分析。结果在淮安市捕获鼠类4种125只,褐家鼠(Rattus norvegicus)为优势鼠种,构成比为62.4%。褐家鼠携带的SEOV(XuyiRn43、XuyiRn68)S基因片段的核苷酸序列同源性为98.1%,推导的氨基酸序列同源性为97.5%,与江苏省赣榆株(GanyuRn20、GanyuRn66及GanyuRn137)的核苷酸序列同源性为98.4%~98.7%,推导的氨基酸序列同源性为96.7%~99.2%。系统进化分析显示淮安市褐家鼠携带的SEOV的基因亚型为S1型,有2个单倍型。结论褐家鼠为淮安市优势鼠种,携带的SEOV为S1基因亚型。

应用TaqMan-BHQ探针实时荧光RT-PCR法定量检测马秋波病毒核酸

〔目的〕建立一种适应口岸马秋波病毒实时荧光定量RT-PCR快速的检测方法。〔方法〕用专业软件设计引物和TaqMan-BHQ探针,以人工合成马秋波病毒S基因的片段作为模板,进行实时荧光定量RT-PCR研究。〔结果〕模板的Ct值与模板稀释浓度的对数存在良好的线性关系,标准曲线为Y=-3.281X+50.975,R2=0.999361,PCR扩增效率为101.0%,其最低检出限为28 copies/μl。〔结论〕应用TaqMan-BHQ1探针的实时荧光RT-PCR检测马秋波病毒核酸,具有耗时短、灵敏度高等特点。