蛋白质组学方法筛选早期肺鳞癌相关蛋白

目的:应用蛋白质组学技术筛选早期肺癌癌变相关蛋白。方法:利用双向凝胶电泳方法分离人早期肺鳞癌组织和相应癌旁正常组织总蛋白,选择差异蛋白质点进行质谱分析。免疫组织化学法验证部分差异蛋白质的表达差异。结果:肺鳞癌组织与癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱中平均蛋白质点数分别为626和602个。选择在癌组织中高表达的10个差异蛋白点进行质谱分析,最终鉴定为膜联蛋白1(annexin-1,Anx-A1)、热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)等与细胞周期、信号转导等功能相关的蛋白质。免疫组织化学检测结果显示,Anx-A1和HSP27蛋白在肺鳞癌组织中的阳性表达率均显著增高(P<0.05)。结论:蛋白质组学方法是一种应用于初步筛选早期肺癌相关蛋白的有效方法,所鉴定的蛋白为进一步筛选用于肺癌早期诊断及其治疗的分子标志物奠定了前期基础。

肺鳞癌组织中Annexin-1的表达及意义

目的检测肺鳞癌组织中膜联蛋白Ⅰ(Annexin-1,Anx-A1)的表达水平,探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)和Western blot方法检测22例肺鳞癌组织及其相应癌旁正常组织中Anx-A1 mRNA及蛋白的表达水平,并分析其与临床病理指标的关系。结果肺鳞癌组织中Anx-A1 mRNA和蛋白的表达水平均高于癌旁正常组织,在低分化肺鳞癌组织中的表达水平高于高、中分化肺鳞癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。Anx-A1在早期(Ⅰ期+Ⅱ期)肺鳞癌组织和非早期(Ⅲ期)癌组织中表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Anx-A1在肺鳞癌中表达上调,可能与肺癌的发生、发展相关。

CYP2D6基因G4268C单核苷酸多态性与肺癌遗传易感性

目的：研究CYP2D6（cytochromes P450 2D6）基因G4268C单核苷酸多态性与肺癌遗传易感性的关系。方法：应用病例一对照研究及聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）方法检测肺癌患者和按性别、年龄频数匹配的正常对照各118例的CYP2D6基因G4268C多态性，并应用Logistic回归分析各基因型与肺癌发病危险的关系。结果：肺癌组和对照组人群发生G4268→C的频率可高达69．49％和75．00％；非C4268／C（即G4268／G＋G4268／C）基因型与肺癌风险升高相关，经年龄、性别、吸烟情况调整OR=1．80（95％CI=1．06～3．06），尤其在腺癌中OR=2．95（95％CI=1．39～6．23）；对吸烟情况进行分层分析并经年龄、性别调整后发现，不吸烟者及轻度吸烟者中携带非C4268／C基因型的个体患肺癌的风险显著增高，其OR值分别为2．12（95％CI=1．03～4．36）和3．75（95％CI=1．15～12．22）。结论：CYP2D6C4268／C基因型可能是肺腺癌的遗传保护因素，并可降低不吸烟者、轻度吸烟者患肺癌的危险度。

细胞色素P450 2D6与吸烟所致肺癌易感性的关系研究

细胞色素P450 2D6(CYP2D6)是肝脏中重要的Ⅰ相代谢酶,参与烟草中特异性亚硝胺类如4-甲基亚硝胺-1,3-吡啶基-1-丁酮(NNK)及烟碱的代谢,可能涉及吸烟引起的肺癌变过程。对其生物学特性、结构功能和基因多态与肺癌易感性的关系等方面的研究,有助于深入理解CYP2D6基因多态性对个体肺癌易感性的重要影响,并从基因-环境交互作用的角度,更好地进行危险度评价。

CYP2D6 C188T单核苷酸多态与肺癌易感性

[目的]分析CYP2D6(cytoehromes P450 2D6)基因C188T单核苷酸多态与肺癌风险的关系,探讨肺癌的敏感基因型。[方法]以病例-对照研究方法,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP),检测118例肺癌患者和按性别、年龄频数匹配的118例正常对照者的CYP2D6基因C188T多态,分析各基因型与肺癌易感性的关系。[结果]肺癌组和对照组人群188T等位基因频率分别为53．39％和61.86％,T188／T基因型频率分别为29．66％和42．38％,差异均无统计学意义(P>0．05)。经年龄、性别、吸烟情况调整后非突变基因型T188／T(即野生基因型C188／C和杂合基因型C188／T合并)与肺癌有中等强度的关联OR=1．70(95％CI:1．01～2．92),尤其在鳞癌中关联更明显,OR=2．49(95％CI: 1．07～5．79);对吸烟程度所作分层分析结果表明,在不吸烟者及轻度吸烟者中非T188／T基因型的个体患肺癌的风险显著增高,其调整OR值分别为2．28(95％CI:1．08-4．81)和3．64(95％CI:1.13-11．79);CYP2D6非T188／T基因型与吸烟在肺癌的发生过程中不存在交互作用(x2=1．46,P=0．227)。[结论]T188／T基因型在不吸烟者、轻度吸烟者中及肺鳞癌中可能作为保护因素而降低肺癌的易感性。

CYP2D6*10多态性与肺癌易感性

目的探讨CYP2D6*10等位基因C188T和G4268C位点单核苷酸多态性与肺癌遗传易感性的关系。方法采用PCR-RFLP法检测118例肺癌患者和按性别、年龄频数匹配的118名正常对照者CYP2D6基因C188T和G4268C位点的单核苷酸多态性,Logistic回归分析各基因型与肺癌发病危险的关系以及基因多态与吸烟在肺癌发生中的联合作用。结果非T188/T(C188/C+C188/T)基因型和非C4268/C(G4268/G+G4268/C)基因型与肺癌均有中等强度关联。按照吸烟情况进行分层分析后发现,不吸烟者、轻度吸烟者中携带非T188/T基因型或非C4268/C基因型的个体患肺癌风险增高。但是CYP2D6非T188/T基因型或非C4268/C基因型与吸烟在肺癌的发生中均不存在交互作用,CYP2D6C188T、G4268C两位点之间也不存在交互作用。结论T188/T和C4268/C基因型在不吸烟者和轻度吸烟者中可能作为保护因素而降低肺癌易感性。

医学生在线学习情况及其对自主学习能力影响的调查分析

目的:了解新冠疫情期间某医学院学生在线学习情况及自主学习能力,探讨影响因素。方法:用在线学习情况调查表和大学生自主学习能力测评量表对某医学院在校生进行问卷调查。结果:有753人参与调查,本科生73.57%,男生30.68%。27.49%的学生没有电脑,25.63%的学生需要支付较高的网费,11.29%的学生喜欢线上教学方式。自主学习能力总得分(61.96±11.777)分,参与讨论情况、在线学习时长、按时完成学习计划、教师授课方式、线上学习条件、教师是否在线点评等对自主学习能力有影响(P<0.05)。结论:疫情期间医学生在线学习课程多,部分学生缺乏在线学习条件;自主学习能力总体尚可,学生参与教学活动、按时完成学习计划对自主学习能力的培养有促进作用。

NOX1 siRNA对TNF-α诱导的A549细胞凋亡的影响

目的:探讨NOX1对TNF-α诱导的A549细胞凋亡的影响。方法:将A549细胞分为3组,空白组、TNF-α组和TNF-α+NOX1 siRNA组。TNF-α+NOX1 siRNA组细胞采用瞬时转染技术转染特异性NOX1 siRNA,转染12 h后用含TNF-α(10μg/L)的培养基继续培养;空白组和TNF-α组细胞分别用培养基和含TNF-α的培养基培养。48h后,采用Annexin V-FITC和PI双染法检测细胞凋亡率,DCFH荧光标记法检测细胞中ROS的表达量,Western blot法检测NOX1及p-JNK蛋白的表达水平。结果:与空白组相比,TNF-α组细胞凋亡率和ROS表达量升高(P<0.05),NOX1和p-JNK蛋白表达水平升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+NOX1 siRNA组细胞凋亡率和ROS表达量降低(P<0.05),细胞中NOX1和p-JNK蛋白表达水平也降低(P<0.05)。结论:NOX1可能通过增加ROS的表达,进而激活JNK/MAPK信号通路,引起A549细胞的凋亡。

亲环素在非小细胞肺癌中的高表达及其与临床病理特征的关系

目的:观察亲环素A(CyPA)在非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中的分布和表达,探讨其在NSCLC发生发展中的临床意义。方法:应用组织芯片免疫组织化学技术,检测45例NSCLC手术患者切除的肺癌组织,22例相应的癌旁组织,33例相应的正常肺组织中CyPA的蛋白表达水平,分析其与NSCLC分期、病理等临床特征的关系。结果:CyPA在NSCLC癌组织和癌旁组织中表现为高表达水平,与相应的肺正常组织中CyPA的表达有显著性差异(P<0.05);CyPA的表达水平与NSCLC患者的细胞分化程度、病理分型均无明显关系。结论:CyPA在NSCLC中的高表达,提示其可能是NSCLC的发生发展中的生物特征之一,其作用及机制有待进一步研究。

纳米氧化锌对人呼吸道上皮细胞白细胞介素-8表达的影响

目的:探讨纳米氧化锌对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)及肺泡上皮细胞(A549)内炎症相关因子白细胞介素-8(IL-8)表达的影响。方法:以BEAS-2B及A549细胞作为靶细胞,应用荧光定量PCR技术及ELISA法检测分析不同剂量纳米氧化锌(0、1、2和4μg/cm2)对细胞内IL-8mRNA和蛋白表达的影响。结果:纳米氧化锌作用2、4h,BEAS-2B细胞中IL-8mRNA及蛋白的表达随纳米氧化锌作用剂量的升高而升高(mRNA:F分别为31.985、54.648,P均<0.001;蛋白:F分别为128.686、65.486,P均<0.001);A549细胞中IL-8mRNA及蛋白的表达亦随纳米氧化锌作用剂量的升高而升高(mRNA:F分别为37.652、9.173,P均<0.01;蛋白:F分别为127.299、76.354,P均<0.001)。结论:纳米氧化锌可提高人支气管和肺泡上皮细胞内IL-8mRNA及蛋白的表达水平。

纳米氧化锌对大鼠血脂和血清炎症因子水平的影响

目的:探讨纳米氧化锌对动脉粥样硬化发生发展的影响机制。方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和纳米氧化锌低、中、高剂量组,每组10只。纳米氧化锌低、中、高剂量组大鼠分别用1.25、2.50、5.00mg/kg的纳米氧化锌悬浮液气管灌注染毒,对照组大鼠同法灌注PBS溶液(1mL/kg),每周1次,共12周;染毒结束后测定各组大鼠体质量、血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血红素加氧酶-1(HO-1)水平。结果:随染毒时间延长,染毒大鼠逐渐出现毛发蓬松,活动减少,精神状态差,生长缓慢等体征。各组大鼠血清HDL、LDL、TNF-α、HO-1、TC水平比较差异有统计学意义(F=32.410、34.600、23.957、38.519、32.652,P<0.001)。纳米氧化锌中、高剂量组大鼠血清TC、LDL、HO-1、TNF-α水平均高于对照组(P<0.05);纳米氧化锌低、中、高剂量组大鼠血清HDL水平均低于对照组(P<0.05)。结论:纳米氧化锌可引起大鼠血清脂代谢紊乱和炎症因子释放,可能导致动脉粥样硬化的发生发展。

沉默NOX1表达对A549细胞增殖的影响

目的:探讨NOX1对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响。方法:通过瞬时转染技术转染特异性的NOX1小干扰RNA(siRNA),按转染情况分为Mock组、NC组、FAM-NC-NOX1 siRNA组,转染12 h后采用Western blot检测NOX1蛋白的表达,通过荧光探针DCFH-DA检测细胞ROS水平,流式细胞仪检测细胞增殖活性和凋亡率。结果:siRNA转染12 h以上,转染率稳定在80%以上,NOX1蛋白的表达量与Mock组相比下降(P<0.05);与Mock组相比,FAM-NC-NOX1 siRNA组细胞在24、36、48 h的增殖活性均下降,ROS水平也下降(P<0.05)。结论:NOX1siRNA转染A549细胞能有效抑制细胞的增殖。

外源性锌离子对大鼠肺组织中表皮生长因子受体表达及活化的影响

目的:探讨外源性锌离子对大鼠肺组织中表皮生长因子受体(EGFR)的表达与活化的影响及可能机制。方法:20只大鼠随机分为4组:二甲基亚砜(DMSO)+PBS组、DMSO+硫酸锌组、PD153035+PBS组和PD153035+硫酸锌组,每组5只。麻醉大鼠后,根据分组情况,采用支气管灌注法分别用DMSO或1μmol/L的PD153035溶液进行预灌注,灌注剂量为0.5mL/kg,约30min后同法分别灌注PBS或100μmol/L的硫酸锌溶液,灌注剂量为1mL/kg。8h后将大鼠处死,制备肺匀浆,离心收集匀浆上清中的蛋白,用Westernblot检测EGFR的表达及磷酸化水平(即活化量)。结果:预灌注PD153035可降低大鼠肺组织EGFR的表达水平及活化量,灌注硫酸锌可致大鼠肺组织EGFR的表达水平及活化量升高,二者合用,有交互作用(EGFR的表达水平:F预灌注=249.896,F灌注=242.127,F交互=305.643;EGFR的活化量:F预灌注=252.347,F灌注=264.115,F交互=294.239,P均<0.05)。结论:气管灌注外源性锌离子可致大鼠肺组织中EGFR的表达水平与活化量增加,其机制可能与酪氨酸激酶的磷酸化有关。

创造酶切位点PCR-RFLP检测PON2(rs12026)基因多态性

目的:建立简便易用的PON2基因单核苷酸多态(rs12026)的检测方法。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断PON2基因SNP位点多态性。结果:设计一对特异引物并PCR扩增含PON2多态位点的DNA片段,根据限制性内切酶BsmAI酶切结果判断PON2位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论:应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的PON2多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。

海南省电力工人抑郁现况及影响因素分析

目的了解海南省电力工人抑郁现况及影响因素。方法采用多阶段随机整群抽样的方法,以海南省2家发电厂一线电力工人为研究对象,应用抑郁自评量表(SDS)评估抑郁情况,采用多功能液相芯片分析系统(Luminex技术)检测血清白细胞介素-6(Interleukin 6,IL-6)、白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)及肿瘤坏死因子α(Tumour Necrosis Factor-α,TNF-α)水平。应用t检验、方差分析、χ^(2)检验分析不同特征电力工人抑郁指数和抑郁状况的差异,应用多因素二元Logistic回归分析抑郁状况的影响因素。结果海南省509名电力工人抑郁指数为(35.15±9.08),抑郁率为6.88%。睡眠质量不好/很差(OR=2.171,95%CI:0.781~6.034)、几乎不锻炼(OR=4.396,95%CI:1.207~16.019)、接触职业危害因素数目(OR=1.200,95%CI:1.028~1.401)及血清IL-8水平第二分位层(即7.876 pg/mL<血清IL-8水平≤16.873 pg/mL,OR=2.531,95%CI:1.047~6.121)是抑郁的危险因素(P<0.05),倒班作业(OR=0.465,95%CI:0.218~0.993)是抑郁的保护因素(P<0.05)。结论海南省电力工人抑郁率较低且抑郁程度较轻,但相关单位仍需要重视该人群心理健康。

染色质免疫沉淀技术分析肺腺癌A549细胞中p53蛋白与p21^(CIP1)和Bim基因转录启动子的结合

为了检测肺腺癌A549细胞内抑癌蛋白p53与CDK抑制蛋白p21CIP1和Bim基因转录调控区的结合情况,采用染色质免疫沉淀技术,用p53特异性抗体沉淀DNA,PCR检测p21CIP1和Bim基因5′端特异性序列。结果表明,在抗体免疫沉淀的DNA片段中扩增出p21CIP1和Bim基因5′端的特异性序列。因此证实在A549细胞内,p53蛋白可与p21CIP1和Bim基因转录启动子的特异区域结合,进而参与两基因的表达调控。

煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞环氧化酶-2mRNA表达的影响

目的:探讨煤焦沥青烟提取物(CTPE)对人支气管上皮细胞环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响。方法:应用RT-PCR方法测定不同质量浓度(2、4、8 mg/L)CTPE作用不同时间(2、4、8 h)对人支气管上皮BEAS-2B细胞COX-2 mRNA表达水平影响。使用放线菌素(Act)D(1 mg/L)作用于BEAS-2B细胞,观察其对2 mg/L CTPE作用30 min后的BEAS-2B细胞COX-2基因转录的影响。利用ZnSO4溶液刺激BEAS-2B细胞COX-2 mRNA表达,去除ZnSO4后,加入1 mg/L的Act D 30 min,检测CTPE作用不同时间点(0、2、4 h)的COX-2 mRNA表达的变化。结果:2、4、8 mg/L CTPE刺激均可以使BEAS-2B细胞COX-2 mRNA表达水平升高(F组间=71.750,F时间=93.120,F交互=17.300,P<0.001),2 mg/L是最佳剂量。用Act D(1 mg/L)预处理细胞30 min,可降低CTPE对COX-2 mRNA表达的诱导作用(FAct D=174.203,FCTPE=260.312,F交互=188.521,P<0.001)。使用ZnSO4刺激,然后使用Act D终止COX-2 mRNA合成后,不同时间点,CTPE组和对照组COX-2 mRNA的表达差异有统计学意义(F组间=365.700,F时间=37.780,F交互=6.240,P<0.001)。结论:CTPE可以通过转录水平和转录后水平诱导人支气管上皮细胞COX-2 mRNA的表达。

非小细胞肺癌组织中CD68与c-Jun蛋白的表达

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中CD68和c-Jun蛋白的表达与肺癌发生发展的关系及其意义。方法:采用免疫组化SP法检测67例人NSCLC标本(每个标本取癌、癌旁和正常组织)中CD68和c-Jun蛋白的表达,应用Spearman秩相关检验CD68阳性细胞数与c-Jun蛋白表达的相关性。结果:肺癌、癌旁及正常肺组织中CD68阳性细胞数依次为11.8±1.4、97.5±2.5和52.1±1.9,差异有统计学意义(F=52334.934,P<0.001);c-Jun蛋白的平均光密度值依次为0.25±0.03、0.23±0.02和0.20±0.01,差异有统计学意义(F=91.280,P<0.001)。癌旁组织中CD68阳性细胞数与年龄、性别、病理类型、分化程度、吸烟无关(P>0.05),与TNM分期(F=158.273,P<0.001)、淋巴结转移(F=84.985,P<0.001)、是否侵及胸膜(F=16.422,P<0.001)有关。癌旁组织中c-Jun蛋白的表达与年龄、性别、病理类型、吸烟无关(P>0.05),与TNM分期(F=19.319,P<0.001)、分化程度(F=33.918,P<0.001)、淋巴结转移(t=12.155,P<0.001)、是否侵及胸膜(F=8.318,P=0.005)有关。在癌旁组织中CD68阳性细胞数与c-Jun蛋白的表达呈正相关(rs=0.519,P<0.001)。结论:巨噬细胞主要浸润在癌旁组织中,可能通过激活蛋白-1促进NSCLC的发展转移。

表皮生长因子受体抑制剂对外源锌离子致大鼠急性呼吸道炎症的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂对外源锌离子致大鼠呼吸道急性炎症的影响。方法:将100μmol/L硫酸锌溶液经气管灌注大鼠肺部复制动物炎症模型,于灌注后4h、8h和24h处死大鼠,以PBS为对照,分别测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数、总蛋白、白细胞介素8(IL-8)以及乳酸脱氢酶(LDH)的含量,以选择炎症最明显的时间点。进一步用二甲基亚砜(DMSO)和EGFR抑制剂PD153035预灌注大鼠,观察其对硫酸锌溶液所致呼吸道炎症的影响。结果:不同灌注液作用后大鼠白细胞计数(F=12.149,P=0.002)和IL-8(F=48.680,P<0.001)等炎症反应指标不同,不同时间点白细胞计数(F=29.569,P<0.001)和IL-8(F=59.778,P<0.001)等炎症反应指标也不同,硫酸锌灌注后8h为炎症反应最强的时间。不同预灌注液作用后大鼠白细胞计数(F=37.872,P<0.001)和IL-8(F=24.347,P<0.001)等炎症反应指标不同,PD153035能抑制炎症反应的强度。结论:EGFR抑制剂能有效抑制外源锌离子所致大鼠呼吸道急性炎症。

CBL+PBL整合教学方法在《临床毒理学》中的应用研究

目的旨在加强学生对临床毒理学基础知识的掌握,培养学生临床用药及药物毒理的自主思维及创新能力。方法采取整群抽样的方法,选取347名海南医学院2016级临床医学专业本科生为研究对象,随机分组,LBL教学组107人,CBL教学组112人,CBL+PBL教学组128人。采用问卷调查结果和考核成绩来评价教学改革的效果。结果共发放339份关于教学效果的调查问卷,各教学组的有效回收率均达到90.0%以上,调查结果差异具有统计学意义(P<0.05)。CBL+PBL教学组成绩明显高于LBL教学组(U=60.25,P<0.05),三个教学组间学生的学习成绩差异具有统计学意义(U=51.76,P<0.05)。结论通过CBL+PBL整合教学方法的改革,符合临床医学教育的培养目标,具有一定的提升课程学习成绩的作用,从而提高了临床毒理学的理论教学质量。