胶原蛋白对胃蛋白酶消化DNA的影响

为丰富胃蛋白酶消化核酸的理论,研究了同为胃蛋白酶底物的胶原蛋白对DNA消化的影响。在体外模拟胃液条件下,探究不同浓度的胶原蛋白、多肽和特征氨基酸对胃蛋白酶消化λDNA的影响。电泳结果表明,在生理pH3.8下反应2 h,胶原蛋白与DNA的质量比为100:1时胶原蛋白即显示出对DNA降解明显的抑制效果。胶原蛋白的消化产物——胶原蛋白肽仍能部分抑制胃蛋白酶对λDNA的消化,但是抑制程度弱于胶原蛋白。而特征氨基酸(甘氨酸、羟脯氨酸和谷氨酸)对λDNA的消化无明显影响。研究表明,胶原蛋白可抑制胃蛋白酶对DNA的消化,抑制作用与蛋白分子聚合度相关。抑制产生的原因可能是胶原蛋白阻碍DNA与胃蛋白酶的结合,从而对DNA消化产生抑制作用。

转运过程中Caco-2细胞对外源miR-133a摄取规律探究

[目的]探究外源miR-133a在Caco-2细胞转运过程中细胞摄取的规律。[方法]建立Caco-2细胞模型以探究miR-133a在体内吸收情况;以Cy3标记的miR-133a对细胞摄取miR-133a的状态和过程进行探究;以细胞破碎液来评价被摄入的miR-133a在胞内的稳定性;通过细胞在不同温度下摄取miR-133a状态来评价细胞摄取miRNA途径。[结果]通过RT-q PCR检测到24 h内外源miR-133a能够以完整片段地形式被Caco-2细胞所转运,最大转运量占加入的总片段量的5.51×10^(-3)%;Caco-2细胞能够摄取外源miR-133a,24 h后达到饱和状态,吸收率达7.2%;被摄入的miR-133a主要分布于细胞质,且部分会围绕细胞核分布;摄入胞内的外源miR-133a在24 h后残留量占总量的0.04%;miR-133a的细胞摄取过程需要消耗能量。[结论]证明了Caco-2细胞能够主动摄取外源miR-133a,孵育24 h的吸收率为7.2%,且摄取为能量依赖过程。