晚期非小细胞肺癌患者外周血中多个驱动基因和TP53基因检测

目的:研究晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中多个驱动基因和抑癌基因TP53的变异情况,探讨它们在晚期肺癌靶向治疗中的作用及临床意义。方法:采用cSMART技术检测96例NSCLC患者外周血中常见驱动基因[表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、鼠类肉瘤病毒致癌基因(KRAS)、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌基因同源体B(BRAF)、人表皮生长因子受体2(HER2)、磷脂酰肌醇激酶-3催化亚基α(PIK3CA)、间质上皮转化因子(MET)、转导重排基因(RET)、肉瘤致癌因子1受体酪氨酸激酶(ROS1)]和TP53基因的变异,分析上述基因变异与NSCLC患者临床病理指标的关系,并分析突变检出率最高的EGFR ctDNA与NSCLC患者临床病理指标的关系。结果:96例患者中64例在外周血中检出基因变异,总检出率66.7%,64例中单基因突变占65.6%(42/64),多基因突变占34.4%(22/64)。在检测的10个基因中,检出率最高的为EGFR,占44.8%(43/96),其次是TP53、KRAS和PIK3CA,分别占14.6%(14/96)、10.4%(10/96)和9.4%(9/96)。EGFR、TP53、KRAS和PIK3CA突变检出率与NSCLC患者临床病理因素无关(P>0.05)。43例EGFR基因突变中,65.1%(28/43)的患者发生EGFR基因单突变、双突变或三突变,34.9%(15/43)的患者发生EGFR基因合并其他热点基因突变,其中EGFR合并KRAS突变2例,合并PIK3CA突变6例,合并TP53突变7例。43例EGFR基因突变阳性的患者中≤60岁年龄组外周血EGFR ctDNA浓度高于>60岁年龄组(P=0.042)。结论:在晚期NSCLC的治疗中,多基因联合检测优于单基因检测。

冬凌草甲素抗食管鳞癌转录的组学研究

目的:探索冬凌草甲素对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用的组学研究。方法:取食管鳞癌细胞系EC109和TE1细胞,分别用0、10、20、40、80和160μmol/L的冬凌草甲素处理,采用MTT法和流式细胞仪检测冬凌草甲素对EC109和TE1细胞增殖及凋亡的影响;冬凌草甲素处理食管鳞癌细胞后提取总RNA,采用全转录组分析技术(RNA-seq)探索食管鳞癌细胞转录组的变化;运用GO聚类分析对差异表达的基因进行功能分析。结果:冬凌草甲素可抑制食管鳞癌EC109和TE1细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05);RNA-seq分析结果显示,在EC109细胞中冬凌草甲素可使463个基因表达上调,419个基因下调,在TE1细胞中冬凌草甲素可使2023个基因表达上调,1642个基因下调;其中,共同上调的基因284个,共同下调的基因176个。冬凌草甲素处理后细胞出现明显的热激反应,HSPA1A、HSPA1B、BAG3、HSPH1、DNAJB1、HSPA8、HSP90AA1、DNAJA4和DNAJA1等基因表达升高,同时作为调节GSH-ROS的TRIM16、SLC7A11、TXNRD1、SRXN1、GCLM和GCLC等的基因表达也升高。GO聚类分析显示,差异表达基因为热激反应基因、蛋白错误折叠相关基因和神经投射发生基因。结论:冬凌草甲素抑制食管鳞癌细胞的增殖并促进其凋亡,其分子机制与热激反应及GSH-ROS系统密切相关。

盐酸安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效及相关预测指标

目的探讨盐酸安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效及相关预测因素。方法回顾性分析83例二线治疗后进展的非小细胞肺癌患者的临床资料。采用Kaplan-Meier法计算PFS率,Log rank法进行生存率曲线统计学检验,Cox回归模型分析多因素对无进展生存期影响,ROC曲线分析多项指标对预后的预测价值。结果83例晚期非小细胞肺癌患者中,0例完全缓解,10例部分缓解,56例疾病稳定,17例疾病进展。不良反应可控。客观缓解率与疾病控制率分别为12.0%和79.5%。中位无进展生存期(mPFS)为4.43月。单因素分析结果显示,ECOG评分≥2分、合并胸腔积液、低白蛋白血症、谷酰胺转肽酶GGT升高、非小细胞肺癌抗原21-1(CYFRA21-1)升高、血小板压积(Pct)降低、合并肺脉管癌栓患者的PFS明显缩短。Cox多因素回归分析显示,ECOG体力状况评分、胸腔积液、低白蛋白血症、CYFRA21-1、肺脉管癌栓是PFS的独立预后因素。结论对于二线治疗后进展的非小细胞肺癌患者,三线应用安罗替尼治疗安全有效。ECOG评分≥2分、CYFRA21-1升高、低白蛋白血症、合并肺脉管癌栓及胸腔积液的患者预后较差,且CYFRA21-1具有较高的预测价值。

上调环状RNA_8199表达对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨上调环状RNA_8199表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:RT-PCR检测ESCC细胞系KYSE520中环状RNA_8199的表达;Sanger测序对环状RNA_8199反向剪接位点的PCR产物进行验证;将KYSE520细胞中提取的RNA分为RNase R处理组与对照组,RNase R处理组用20 U RNase R处理,对照组用等量双蒸水替代,qRT-PCR法分别检测两组环状RNA_8199和ATXN10 mRNA的表达情况;采用细胞免疫荧光法和核浆分离法观察环状RNA_8199在ESCC细胞系KYSE520和KYSE270中的亚定位;将高表达环状RNA_8199的质粒载体(环状RNA_8199-OE)或阴性对照(环状RNA_8199-NC)分别转染到KYSE30和KYSE70细胞中,采用CCK-8和平板克隆形成实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞迁移和侵袭能力。结果:RT-PCR实验证明环状RNA_8199通过发散引物只能扩增出细胞的反转录产物cDNA,而线性转录本通过聚合引物能同时扩增出cDNA和基因组DNA;Sanger测序证实环状RNA_8199反向剪接位点;RNase R处理后环状RNA_8199的表达水平与对照组相比无改变(P=0.184),而ATXN10 mRNA的表达水平与对照组相比下降(P=0.003);细胞免疫荧光显示环状RNA_8199主要定位于细胞浆中,核浆分离实验显示环状RNA_8199在细胞浆水平高于细胞核水平(P<0.001);与环状RNA_8199-NC组相比,环状RNA_8199-OE组ESCC细胞OD值、克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数均下降(P<0.05)。结论:环状RNA_8199在ESCC细胞中表达,主要定位于细胞浆中且高度稳定。上调环状RNA_8199表达可抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力。