液氮冻融洗涤血小板对人牙髓细胞增殖的影响

目的:与牛凝血酶激活富血小板血浆方式比较,观察液氮冻融洗涤血小板促进人牙髓细胞增殖的效果。方法:取健康志愿者因正畸需要拔除的牙齿,原代培养牙髓细胞,传代培养至第4代后分别加入不同浓度冻融激活的洗涤血小板和牛凝血酶激活的富血小板血浆,细胞定量测定试剂盒测定细胞增殖情况。结果:10～100mL/L的洗涤血小板明显促进了人牙髓细胞的增殖,而且该作用明显优于相同浓度的牛凝血酶激活的富血小板血浆。200mL/L的洗涤血小板和富血小板血浆促进人牙髓细胞增殖的作用均较100mL/L浓度组明显降低。结论:液氮冻融激活的洗涤血小板、牛凝血酶激活的富血小板血浆在一定浓度下均可以明显促进人牙髓细胞的增殖,而且前者的作用效果较后者更好。

液氮冻融促进血小板源性生长因子AA与转化生长因子β1的释放

背景:血小板被认为是人体自身的生长因子库,目前多采用牛凝血酶激活血小板,促进释放其富含的多种生长因子,牛凝血酶的临床应用存在一定的风险。目的:与牛凝血酶激活方式比较,观察液氮冻融促进血小板释放血小板源性生长因子AA、转化生长因子β1的作用效果。方法:抽取5名健康志愿者静脉血,采用二次离心法制备富血小板血浆及乏血小板血浆,洗涤去除富血小板血浆中的血浆成分,制成洗涤血小板。洗涤血小板采用液氮反复冻融的方法促进其释放生长因子,而富血小板血浆采用1000,500,250,125,62.5,31.25U/mL的牛凝血酶-氯化钙溶液进行激活。应用酶联免疫吸附试验法定量检测洗涤血小板、富血小板血浆及乏血小板血浆中血小板源性生长因子AA、转化生长因子β1的质量浓度。结果与结论:液氮冻溶促进血小板释放血小板源性生长因子AA和转化生长因子β1的质量浓度分别为(8.973±1.213),(27.445±2.273)μg/L,与500～1000U/mL牛凝血酶激活血小板促进其释放血小板源性生长因子AA和转化生长因子β1的质量浓度差异无显著性意义(P>0.05)。提示液氮冻融作为一种安全、有效的激活洗涤血小板方式可以替代目前使用的牛凝血酶。

血小板血浆对人牙髓细胞增殖的影响

目的:观察血小板血浆及其细化成分对人牙髓细胞增殖的影响。方法:使用因正畸而拔除的人牙的牙髓细胞,用细胞定量测定试剂盒测定细胞增殖情况。结果:5%的多血小板血浆(p latelet-rich p las-m a,PRP)、5%和10%的洗净血小板(washed p latelet,WPLT)均明显地促进了人牙髓细胞的增殖,而且WPLT的作用较PRP更显著。乏血小板血浆(p latelet-poor p lasm a,PPP)呈浓度依赖性地抑制了人牙髓细胞增殖,5%WPLT促进人牙髓细胞增殖的作用。结论:去除血浆成分的WPLT对培养的人牙髓细胞增殖有明显的促进作用;血浆中可能存在对抗血小板生长因子作用的因子。

人富血小板血浆及其细化成分对小鼠成骨细胞增殖的影响

目的:观察人富血小板血浆(PRP)及其细化成分对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响。方法:抽取年轻男性志愿者静脉血制备富血小板血浆,并提取洗涤血小板(WPLT)和乏血小板血浆(PPP)等细化成分,使用细胞定量测定试剂盒测定细胞增殖情况。结果:50ml/L的PRP对MC3T3-E1细胞的增殖没有明显影响,而50ml/L的WPLT显著促进了MC3T3-E1细胞的增殖,但是,这种促进增殖的作用效果会随着WPLT浓度的倍比增加而显著降低,并且当其浓度为150ml/L时反而会显著抑制细胞的增殖。另外,50ml/L的PPP对MC3T3-E1细胞的增殖有明显的抑制作用,而且倍比添加PPP会显著抑制50ml/LWPLT促进的MC3T3-E1细胞增殖。结论:人WPLT促进小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖的作用具有浓度特异性,PPP对MC3T3-E1的增殖有显著的抑制作用。

富血小板血浆与洗涤血小板对人牙髓细胞矿化的作用

背景:此前课题组的研究表明富血小板血浆和洗涤血小板在一定浓度范围内均可促进人牙髓细胞的增殖。目的:进一步观察不同浓度富血小板血浆和洗涤血小板对人牙髓细胞矿化的作用效果。方法:实验使用健康志愿者正畸拔除牙齿内牙髓培养的4～6代牙髓细胞。将由该志愿者采集的静脉血制备富血小板血浆和洗涤血小板作用于牙髓细胞,使用碱性磷酸酶及蛋白定量试剂盒测定矿化诱导7d后牙髓细胞的碱性磷酸酶活性,并通过茜素红染色观测牙髓细胞经矿化诱导10d及20d后的矿化结节形成情况。结果与结论:10%～30%的洗涤血小板与富血小板血浆均明显提高了牙髓细胞碱性磷酸酶活性,其中,以20%浓度尤为明显;10%～30%的洗涤血小板与富血小板血浆均明显促进了矿化诱导后10d的牙髓细胞矿化结节形成,其中,10%浓度在矿化诱导后20d促进牙髓细胞形成的矿化结节最大。但相同浓度的洗涤血小板与富血小板血浆之间在作用效果上没有明显差异。

人洗涤血小板促进成骨细胞增殖与前列腺素E2的作用

背景:对于富血小板血浆促进组织再生的理想血小板浓度、哪些成分担当重要作用以及通过何种机制发挥作用等基础问题目前还不是很清楚。目的:观察洗涤血小板对小鼠成骨细胞株——MC3T3-E1的增殖及其产生前列腺素E2作用的相关性。方法:将从健康成人男性志愿者身上采集并制备的洗涤血小板经反复液氮冻溶后作用于小鼠成骨细胞株MC3T3-E1,分别加入体积分数5%-15%的洗涤血小板、富血小板血浆、乏血小板血浆或和其他样品(消炎痛、肿瘤坏死因子α和转化生长因子β抑制剂SB431542)培养。采用细胞和前列腺素E2测定试剂盒测定细胞增殖与前列腺素E2的生成量,采用RT-PCR测定环氧酶2mRNA的表达。结果与结论:体积分数5%洗涤血小板作用于MC3T3-E1细胞1h后开始表达环氧酶2mRNA、并诱导产生前列腺素E2,作用3h时环氧酶2mRNA的表达达到峰值,而前列腺素E2的产生量在作用后6h达到峰值(40.5μg/L)。随着体积分数的升高,洗涤血小板对MC3T3-E1细胞增殖的促进作用逐渐降低,并且当其体积分数达到15%时呈现对MC3T3-E1细胞增殖的显著抑制作用,而洗涤血小板对MC3T3-E1细胞产生前列腺素E2的作用随着其浓度的倍比增加而显著增强。添加消炎痛会明显抑制5%洗涤血小板对MC3T3-E1细胞增殖及前列腺素E2产生的促进作用,而添加肿瘤坏死因子α(100μg/L)则会明显增大洗涤血小板对MC3T3-E1细胞产生前列腺素E2的促进作用。另外,SB431542(15μmol/L)可明显抑制体积分数5%的洗涤血小板对MC3T3-E1细胞增殖及前列腺素E2产生的促进作用。提示洗涤血小板促进MC3T3-E1增殖与其诱导该细胞生成前列腺素E2有密切的相关性。