盐酸石蒜碱通过Akt/Smad通路抑制肝星状细胞增殖与活化

目的探索并验证盐酸石蒜碱(LH)抗肝纤维化活性,并初步阐明其机制,为LH研发成为抗肝纤维化药物提供理论支持。方法利用I型胶原α1(COL1A1)启动子-荧光素酶报告系统筛选LH抗肝纤维化活性,利用SRB方法检测LH对人肝星状细胞LX2增殖的影响。通过TGF-β1诱导LX2细胞活化建立体外肝纤维化模型,运用q RT-PCR和Western blot方法检测不同浓度LH对肝纤维化标志基因转录水平以及蛋白表达水平的抑制作用。Western blot方法检测肝纤维化相关信号通路的蛋白表达变化。结果 LH可剂量依赖性地抑制COL1A1基因启动子活性,提示其可能有抗肝纤维化活性。LH显著抑制肝星状细胞LX2的增殖,其对LX2细胞的IC_(50)值为(9.79±1.02)μmol/L;LH可以抑制活化的LX2细胞肝纤维化相关基因的mRNA和蛋白的水平;LH可以抑制Akt/Smad信号通路的活性。结论 LH可能通过Akt/Smad信号通路抑制肝星状细胞增殖与活化,从而发挥抗肝纤维化的作用。

胆酸二聚体化合物的设计、合成及抑制肝细胞凋亡研究

目的通过设计合成胆酸二聚体化合物及评价其体外抑制肝细胞凋亡活性,发现新型治疗慢性肝病的候选化合物。方法以熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸和奥贝胆酸为起始原料,经亲电取代、脱水缩合、氢化等反应制备目标化合物。通过测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、7的活性水平评价目标化合物体外抑制肝细胞凋亡的活性。结果合成胆酸二聚体化合物24个,体外活性结果表明部分目标化合物具有较好的抑制肝细胞凋亡活性,12个化合物(1a、1e、1h、2a、2c、2e、2f、2g、3a、3c、3d、5a)在20μmol/L浓度下抑制肝细胞凋亡的活性优于阳性对照物牛磺熊去氧胆酸(40.94%)。化合物1a、1e、2a和5a的抑制率分别为75.60%、88.56%、83.25%和105.24%,是阳性对照的2倍。结论熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸二聚体具有抑制肝细胞凋亡的活性,奥贝胆酸二聚体无抑制肝细胞凋亡的活性;连接胆酸骨架的连接链长度对活性有明显的影响,其中具有较短连接链(N,N’-二甲基乙二胺、四甲基乙二胺、乙二醇二甲醚)的化合物(1a、1e、2a)的活性优于具有较长连接链(N,N’-二甲基-1,8-辛二胺、2,5,8,11,14,17-六氧十八烷)的化合物(1g、3e)的活性。

Pepstatin Pr通过YAP-TGFβ-Smad通路发挥体外抗肝纤维化作用

肝纤维化是各种慢性因素引起的肝脏损伤后组织修复代偿反应,其进一步恶化会导致肝硬化、肝功能衰竭甚至是肝细胞癌。肝星状细胞的异常活化是肝纤维化发生发展的细胞学基础。化合物pepstatin Pr是从链霉菌CPCC 202950中分离得到的pepstatin A衍生物。本实验目的在于研究pepstatin Pr的抗肝纤维化活性并探索其分子机制。通过给予TGFβ1诱导人肝星状细胞LX-2活化并进行不同浓度的pepstatin Pr处理后,应用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B, SRB)比色法检测pepstatin Pr对LX-2细胞的细胞毒性,应用real time PCR和Western blot方法检测pepstatin Pr对COL1A1、α-SMA、组织蛋白酶D (cathepsin D)、TGFβ、Smad以及YAP/TAZ蛋白表达与磷酸化水平的影响。结果显示pepstatin Pr对LX-2细胞无明显细胞毒性,并且可显著降低肝纤维化标志物COL1A1及α-SMA的mRNA和蛋白表达,同时在蛋白水平上抑制cathepsin D、TGFβ1、YAP和TAZ的表达, Smad2的磷酸化水平,以及YAP核转位。综上, pepstatin Pr可通过调控YAP-TGFβ-Smad通路抑制由TGFβ1诱导的肝星状细胞活化,具有良好的体外抗肝纤维化活性。