菌核病防治研究进展

菌核病是一种寄主种类广泛的重大植物病害,可侵染450多种重要作物和草类,在我国每年给油菜、大豆以及多种蔬菜带来10～30亿元的损失.介绍了菌核病的症状、危害以及致病机理等,概述了主要的防治措施,并报道了国内外在关于菌核病生物防治、转基因育种、分子机理等方面的研究进展.

农杆菌介导脂滴包被蛋白基因8-3转化烟草的研究

为开发新的抗菌核病基因,针对抗病相关的脂滴包被蛋白基因8-3,设计了分别带有酶切位点XbaI和BamHI的1对引物,从克隆载体pMD19-T-8-3中扩增到基因8-3,双酶切8-3并连接到植物表达载体pBI121上;将重组质粒导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中,通过其介导将8-3基因转化到烟草中;获得了35株抗性转化株,PCR及测序分析鉴定阳性植株为21株,RT-PCR检测到基因8-3在其中能够表达;通过接种核盘菌和草酸处理试验,表明8-3基因可使烟草提高了草酸耐受水平,从而对菌核病具备一定的抗性。本实验研究了潜在功能基因8-3的抗病性,为植物抗菌核病的研究奠定了基础。

紫茎泽兰提取物对番茄青枯菌的抑菌作用及其机理

用紫茎泽兰70%的乙醇提取物及其氯仿萃取物,对番茄青枯菌生理、生化、细胞形态等方面进行抑菌试验。乙酸乙酯、正丁醇、乙醚、氯仿萃取物具有较好的热稳定性,在pH9时抑菌圈最大;通过透射电镜观察,菌体经紫茎泽兰提取物作用后,鞭毛消失,中央出现空腔。SDS-PAGE显示紫茎泽兰氯仿萃取物处理番茄青枯菌后,菌体内蛋白质减少,随着作用时间的延长,完全抑制或破坏了小分子蛋白质的合成,对大分子蛋白质也有一定的抑制作用。POD、CAT、SDH酶活测定显示,随着加入的紫茎泽兰氯仿萃取液浓度的增大,酶活显著降低。以上试验结果表明,紫茎泽兰氯仿萃取液对番茄青枯菌有明显的抑制作用,对于番茄青枯病防治的应用有一定的指导意义。

农杆菌介导的紫茎泽兰遗传转化研究

以紫茎泽兰为受体材料,GUS基因为报告基因,对农杆菌介导的遗传转化条件及影响因素进行研究,建立了农杆菌介导的紫茎泽兰遗传转化体系。结果表明,将未经过预培养的幼叶外植体在OD600为0.4的稀释菌液中浸泡12min,共培养3d后,转移到加有卡那霉素50mg/L(筛选压)和羧苄青霉素250mg/L的分化培养基上,经过20d外植体直接分化出不定芽,诱导生根成苗。经PCR和组织化学染色鉴定,可稳定获得较高的阳性转化率。