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S-腺苷甲硫氨酸通过hepaCAM抑制膀胱癌细胞增殖迁移
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作者 牛凌芳 余朝文 +5 位作者 李罗 范佳鑫 高英英 范砚茹 吴小候 罗春丽 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期858-866,共9页
目的:探究S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)通过hepaCAM对膀胱癌(bladder cancer,BCa)细胞增殖和迁移的影响及其可能的分子机制。方法:不同浓度SAM作用于体外培养的T24和BIU细胞,四甲基偶氮唑盐(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-... 目的:探究S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)通过hepaCAM对膀胱癌(bladder cancer,BCa)细胞增殖和迁移的影响及其可能的分子机制。方法:不同浓度SAM作用于体外培养的T24和BIU细胞,四甲基偶氮唑盐(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法检测SAM对细胞增殖的影响。用不同浓度的SAM(0、0.8、1.6 mmol/L)处理T24和BIU细胞72 h后,Real-time PCR和Western blot法检测甲基结合蛋白-2(methyl DNA-binding domain protein,MBD2)、组蛋白去乙酰化酶-1(histone deacetylases,HDAC1)以及肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)的表达;划痕及Transwell实验检测各组细胞的迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力。结果:SAM抑制T24和BIU细胞生长且与药物浓度和作用时间呈正相关。与0 mmol/L组相比,0.8 mmol/L的SAM处理T24和BIU细胞72 h后MBD2 m RNA表达明显降低(P=0.048;P=0.038),蛋白表达明显降低(P=0.001;P=0.000);0.8 mmol/L的SAM处理T24细胞72 h后HDAC1mRNA和蛋白水平明显降低(P=0.000;P=0.001);0.8 mmol/L的SAM处理BIU细胞72 h后HDAC1 m RNA水平无统计学差异(P=0.140),蛋白表达明显降低(P=0.004);0.8 mmol/L的SAM处理T24和BIU细胞72 h后hepaCAM m RNA水平明显增加(P=0.003;P=0.008),蛋白表达无统计学差异(P=0.770;P=0.381);1.6 mmol/L的SAM处理T24和BIU细胞72 h后MBD2 m RNA水平明显降低(P=0.003;P=0.000),蛋白表达明显降低(P=0.001;P=0.000);HDAC1 m RNA水平明显降低(均P=0.000),蛋白表达明显降低(P=0.001;P=0.000);hepaCAM mRNA和蛋白表达均明显增加(均P=0.000)。划痕及Transwell实验结果显示SAM处理T24和BIU细胞72 h后迁移能力受到明显抑制(P<0.05)。克隆形成实验结果显示SAM处理T24和BIU细胞72 h后细胞克隆形成能力明显降低(P<0.05)。结论:SAM可通过MBD2/HDAC1逆转hepaCAM的表达,抑制BCa细胞的增殖及迁移能力。 展开更多
关键词 S-腺苷甲硫氨酸 肝细胞黏附分子 膀胱癌 增殖 迁移
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运用Westgard 6σ规则评估血细胞分析仪的性能
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作者 牛凌芳 《现代仪器与医疗》 CAS 2023年第4期31-34,共4页
目的运用韦斯特加氏六西格玛(Westgard 6σ)规则对血细胞分析仪的检测性能进行评价,并对质控方案进行优化。方法收集北京核工业医院检验科SysmexXS-1000i血细胞分析仪2023年1月4日—2023年6月30日室内质控及2023年第1次室间质量评价数据... 目的运用韦斯特加氏六西格玛(Westgard 6σ)规则对血细胞分析仪的检测性能进行评价,并对质控方案进行优化。方法收集北京核工业医院检验科SysmexXS-1000i血细胞分析仪2023年1月4日—2023年6月30日室内质控及2023年第1次室间质量评价数据,计算变异系数(Coefficient of Variation,CV)及偏倚(Bias)。按照临床血液学常规项目分析质量要求(WS/T406-2012)中允许总误差(Allowed Total Error,TEa)标准,采用σ=(TEa-|Bias|)/CV公式计算各实验室指标的σ水平,根据σ范围进行性能评价并依据质控品Westgard 6σ规则选择合适的质控方案。计算未达6σ项目的质量目标指数(Quality Goal Index,QGI),查找需改进问题,指导质量改进。结果SysmexXS-1000i血细胞分析仪各实验室指标不同质控浓度的σ值水平均明显不同,HCT的中值σ在3~4,性能评定为临界,实验室需选择质控方案1_(3s)/2_(2s)/R_(4s)/4_(1S)/8x;RBC的中值σ及HCT的高值σ在4~5,性能评定为良好,实验室需选择质控方案1_(3s)/2_(2s)/R_(4s)/4_(1S);PLT的中值和高值σ在5~6,性能评定为优秀,需选择质控方案1_(3s)/2_(2s)/R_(4s);WBC和HGB的中值和高值σ及RBC的高值σ均大于6,性能评定为世界级,需选择质控方案1_(3s)。σ<6的项目中需改进精密度的占80%;准确度和精密度均需改进的占20%。结论Westgard 6σ规则可以有效地应用于SysmexXS-1000i血细胞分析仪性能评价,极好地指导我们日常工作中个体化质控方案的选择。 展开更多
关键词 血细胞分析仪 性能评价 质量控制
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shPLCε通过下调CDC25A抑制T24细胞的瓦伯格效应 被引量:4
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作者 郝燕妮 李婷 +5 位作者 范佳鑫 李罗 牛凌芳 欧俐苹 吴小候 罗春丽 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期33-39,共7页
目的:探讨shPLCε对膀胱癌T24细胞瓦伯格效应的影响及其相关机制。方法:(1)慢病毒感染T24细胞,葡萄糖测定试剂盒和乳酸测试盒分别检测细胞葡萄糖利用和乳酸生成情况;q-PCR、Western blot分别检测PLCε、CDC25A及瓦伯格效应相关分子... 目的:探讨shPLCε对膀胱癌T24细胞瓦伯格效应的影响及其相关机制。方法:(1)慢病毒感染T24细胞,葡萄糖测定试剂盒和乳酸测试盒分别检测细胞葡萄糖利用和乳酸生成情况;q-PCR、Western blot分别检测PLCε、CDC25A及瓦伯格效应相关分子的表达。(2)转染sh CDC25A质粒,q-PCR、Western blot检测CDC25A的表达;Western blot检测瓦伯格效应相关分子的表达情况。结果:(1)慢病毒干扰PLCε后,T24细胞利用葡萄糖和生成乳酸的能力降低,同时下调CDC25A、PKM2、GLUT1、LDHA的表达。(2)干扰CDC25A的表达后可抑制PKM2、GLUT1、LDHA的表达。结论:shPLCε通过下调关键分子CDC25A的表达抑制膀胱癌T24细胞的瓦伯格效应,从而为膀胱癌的治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 PLCε CDC25A 膀胱癌 瓦伯格效应
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PLCε沉默后通过Wnt/β-catenin信号通路抑制比卡鲁胺耐药的前列腺癌细胞增殖 被引量:3
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作者 李罗 范佳鑫 +4 位作者 牛凌芳 范砚茹 高英英 张尧 罗春丽 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期761-771,791,共12页
目的:探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cε(phosphoinositide-speci c phospholipase Cε,PLCε)对前列腺癌细胞增殖和比卡鲁胺敏感性的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:采用比卡鲁胺浓度递增及间歇诱导法建立对比卡鲁胺... 目的:探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cε(phosphoinositide-speci c phospholipase Cε,PLCε)对前列腺癌细胞增殖和比卡鲁胺敏感性的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:采用比卡鲁胺浓度递增及间歇诱导法建立对比卡鲁胺耐药的前列腺癌B-LNCAP细胞。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测前列腺癌LNCAP和B-LNCAP细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)和PLCεmRNA和蛋白的表达,CCK-8法检测LNCAP和B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的敏感性。将干扰PLCε表达的重组慢病毒LV-shPLCε或阴性对照(negative control,NC)LV-NC感染B-LNCAP细胞(称为LVshPLCε/B-LNCAP或LV-NC/B-LNCAP),Wnt/β-catenin信号通路激活剂AZD2858处理LV-shPLCε/B-LNCAP细胞,以未进行任何干预的B-LNCAP细胞作为空白组。应用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况及对比卡鲁胺的敏感性,应用克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力,蛋白质印迹法检测各组细胞的细胞质和细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中c-myc、cyclin D1mRNA和蛋白表达水平。结果:B-LNCAP细胞中PLCε、AR mRNA和蛋白的表达水平均高于LNCAP细胞(P值均<0.05),B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的耐药系数为132.87,成功构建前列腺癌耐药细胞B-LNCAP。LV-shPLCε/B-LNCAP细胞增殖和克隆形成能力均弱于空白组和LV-NC/B-LNCAP组(P值均<0.01),比卡鲁胺对LV-shPLCε/B-LNCAP细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值均低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组(P值均<0.05),LV-shPLCε/B-LNCAP细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平明显低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组(P值均<0.01),LVshPLCε/B-LNCAP细胞中c-myc、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平均低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组(P值均<0.01);AZD2858处理的LVshPLCε/B-LNCAP细胞增殖和克隆形成能力强于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞(P值均<0.05),比卡鲁胺对AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞IC50值高于未处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞(P<0.05),AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平均高于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞(P值均<0.05),AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞中c-myc、cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平均高于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞(P值均<0.05)。结论:PLCε下调后通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,增强前列腺癌B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的敏感性,抑制前列腺癌B-LNCAP细胞的增殖。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 抗药性 肿瘤 细胞增殖 WNT信号通路 比卡鲁胺 PLCε
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shPLCε通过PPARβ/twist1抑制前列腺癌细胞的迁移和EMT过程 被引量:2
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作者 范佳鑫 李罗 +4 位作者 牛凌芳 范砚茹 高英英 吴小候 罗春丽 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第5期665-674,共10页
该研究旨在探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C epsilon(phospholipase C epsilon,PLCε)对前列腺癌细胞上皮–间充质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及迁移能力的影响。用LV-sh PLCε感染前列腺癌细胞,q-PCR和Western blot检测... 该研究旨在探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C epsilon(phospholipase C epsilon,PLCε)对前列腺癌细胞上皮–间充质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及迁移能力的影响。用LV-sh PLCε感染前列腺癌细胞,q-PCR和Western blot检测PLCε、过氧化物酶体增殖物激活受体β(peroxisome proliferator activated receptorβ,PPARβ)、twist1和EMT相关分子m RNA和蛋白质水平,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果表明,感染LV-sh PLCε可显著下调PLCε、PPARβ和twist1的m RNA和蛋白质水平,同时降低前列腺癌细胞株PC3和DU145的迁移能力以及EMT过程。而在sh PLCε组细胞中加入PPARβ的激动剂能一定程度逆转PPARβ和twist1的下调,促进细胞的迁移能力和EMT过程;而PPARβ的抑制剂产生相反作用。该研究说明,PLCε可通过PPARβ/twist1影响前列腺癌细胞的迁移能力和EMT过程。 展开更多
关键词 前列腺癌 磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C EPSILON TWIST1 EMT
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