皮质下梗死伴白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病两家系NOTCH3基因突变分析

皮质下梗死伴白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL)是一种较少见的、以反复脑卒中发作与血管性痴呆为特征的遗传性脑小血管疾病[1]。该病多于中年起病,早期可有先兆性偏头痛、短暂性脑缺血发作等症状,随着年龄增长逐渐出现反复脑卒中发作,最终导致精神异常和血管性痴呆;头颅MRI特征包括皮层下腔隙性梗死灶、颞极、侧脑室周围和皮层下白质病变[2]。CADASIL致病基因NOTCH3位于染色体19p13.2-13.1,大部分变异为错义突变,也有少部分为缺失、插入和剪切[3]。随着分子检测技术的进步和普及,越来越多的CADASIL家系经基因检测确诊[4-5]。本文分析了两个CADASIL家系NOTCH3基因突变情况,并对其临床特点进行了总结,报道如下。

脊髓小脑性共济失调2两家系致病基因及临床特点

目的分析洛阳地区两个脊髓小脑性共济失调(SCAs)家系的致病基因及临床特点。方法收集先证者及其家系成员的临床资料。提取外周静脉血DNA,采用聚合酶链反应(PCR)结合琼脂糖凝胶电泳技术对两个家系先证者进行SCA1、2、3、6、7、12、17和DRPLA亚型的筛选。亚型初步确定后对目的片段进行Sanger测序,得到确认后对家系其他成员进行验证。结果家系1和家系2先证者经检测均为SCA2亚型,致病等位基因CAG重复次数分别为44和38次,随后的家系验证结果显示家系1中检测到致病基因携带者3人,家系2中检测到致病基因携带者1人。先证者均以行走不稳为主要症状,部分成员伴言语不清、记忆力下降。结论联合应用PCR和Sanger测序方法确诊了洛阳地区两个SCA2家系,家族性的行走不稳是其主要临床特点。

下调ERp57抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析内质网驻留蛋白57(ERp57)在食管鳞癌组织中的表达情况以及下调ERp57对食管癌细胞TE-1生物学功能的影响。方法:GEPIA数据库分析食管癌中ERp57的表达;通过荧光定量PCR和Western blot检测临床食管癌标本及细胞株中ERp57的表达;利用shRNA沉默TE-1细胞内ERp57后,通过CCK8检测细胞增殖、TUNEL检测细胞凋亡、划痕检测细胞迁移、Transwell检测细胞侵袭。结果:食管癌组织中ERp57的mRNA和蛋白的表达水平均高于癌旁组织(P<0.05),食管癌细胞中ERp57的mRNA及蛋白的表达高于食管上皮细胞(P<0.05)。沉默ERp57使TE-1细胞的增殖能力减弱、凋亡比例增加,并减弱了TE-1细胞的迁移及侵袭能力。结论:沉默ERp57表达能够抑制食管癌细胞TE-1的增殖、迁移、侵袭,可为食管癌研究提供理论依据。

人脂肪间充质干细胞来源外泌体联合黄芪多糖对心肌损伤保护机制研究

目的探索人脂肪间充质干细胞来源外泌体(Exosome-HADSCs)联合黄芪多糖(APS)对心肌损伤的保护作用机制。方法体外培养人脂肪间充质干细胞(HADSCs),提取外泌体,并通过电镜、Western blot法对外泌体进行鉴定。实验设置对照组(control组)、Exo组、APS组、Exo+APS组,采用血管形成实验和划痕实验分析Exosome-HADSCs联合APS对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成和细胞迁移的影响。在AC16心肌细胞损伤模型中,实验设置对照组(control组)、氯化钴(CoCl_(2))组、CoCl_(2)+Exo组、CoCl_(2)+APS组、CoCl_(2)+Exo+APS组,比较各组细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达水平。结果与control组相比,Exo+APS组HUVECs形成血管网格的数量显著增多(P<0.05),且Exo+APS组形成血管网格的数量多于Exo组和APS组,差异有统计学意义(P<0.05)。与control组相比,Exo+APS组细胞迁移率增高,且Exo+APS组细胞迁移率高于Exo组和APS组,差异有统计学意义(P<0.05)。Exosome-HADSCs联合APS能够显著提高CoCl_(2)损伤AC16细胞的存活率,降低细胞凋亡率,且作用效果较单独使用Exosome-HADSCs和APS更显著(P<0.05)。与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Exo+APS组凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达水平显著降低(P<0.05),抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达水平显著增高(P<0.05),磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、苏氨酸-丝氨酸蛋白激酶(Akt)蛋白表达水平均显著增高(P<0.05)。结论Exosome-HADSCs联合APS对心肌损伤具有保护作用,其机制可能与促进血管形成和内皮细胞迁移,提高细胞存活率,减少心肌细胞凋亡有关,并通过PI3K/Akt信号通路实现。

骨髓间充质干细胞对氧化应激损伤心肌细胞凋亡、自噬的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对氧化应激损伤心肌细胞凋亡、自噬的影响。方法(1)以不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、300μmol/L、500μmol/L和700μmol/L)H 2O 2处理大鼠心肌细胞H9c26 h、9 h和12 h,采用CCK-8检测细胞活力,筛选H 2O 2的最佳作用浓度及作用时间以构建氧化应激损伤心肌细胞模型。(2)将大鼠心肌细胞H9c2分为对照组、H 2O 2组、BMSC+H 2O 2组。H 2O 2组和BMSC+H 2O 2组均采用500μmol/L H 2O 2诱导12 h建立氧化应激损伤心肌细胞模型,在此基础上,BMSC+H 2O 2组加入对数生长期大鼠BMSC进行共培养。对照组正常培养而不给予干预。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,分别采用实时荧光定量PCR、Western blot检测各组细胞自噬相关基因[Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)]mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,H 2O 2组细胞凋亡率升高(P<0.05);与H 2O 2组相比,BMSC+H 2O 2组细胞凋亡率降低(P<0.05)。与对照组、H 2O 2组比较,H 2O 2+BMSC组Beclin-1、LC3B mRNA和蛋白表达水平均升高(均P<0.05)。结论BMSC可以通过抑制心肌细胞凋亡及增强心肌细胞自噬水平,以减轻氧化应激对心肌细胞的损伤,从而发挥心肌保护作用。

3种常见核酸染料的安全性和灵敏度研究

目的探讨Gold View、溴化乙锭(EB)、SYBR GreenⅠ3种实验室常用核酸染料的安全性与灵敏度,筛选出具有较高安全性和灵敏度的核酸染料。方法采用正常人胚肾细胞为研究对象,对比研究Gold View、EB、SYBR GreenⅠ对细胞增殖和细胞周期的影响;分别使用3种核酸染料对凝胶中的DNA进行染色,比较其灵敏度。结果 SYBR GreenⅠ对HEK-293细胞的周期与增殖影响最小,Gold View的影响最大。SYBR GreenⅠ和Gold View对DNA染色的灵敏度相当,略低于EB。结论 SYBR GreenⅠ具有较高安全性和较高的灵敏度。

酿酒酵母Nar1p参与寿命调控机制的初步研究

目的:酵母Nar1p是人类早老症关键蛋白prelamin A相互作用蛋白NARF在酵母中的同源蛋白,目前未见其在寿命和衰老中的功能报道。本研究以酿酒酵母为模式物种,研究Nar1p在酵母复制寿命和氧化应激中的作用。方法:首先通过基因重组的原理构建Nar1p过表达酵母菌株,然后检测其复制寿命、对强氧化剂百草枯的抵抗能力、细胞内总SOD活性。结果:相对于野生型酵母菌株,Nar1p过表达酵母菌株的复制寿命缩短,抗氧化性损伤的能力减弱,但是细胞内总SOD活性升高。结论:Nar1p很可能参与了酵母复制寿命和氧化应激能力的调节,为全面研究Nar1p的功能奠定基础。

盐酸罗哌卡因联合舒芬太尼在无痛分娩中的应用

目的探究盐酸罗哌卡因联合舒芬太尼在无痛分娩中的临床应用。方法选取我院2014年5月-2015年5月共收治的120例产妇作为研究对象,随机分成两组,给予实验组患者以盐酸罗哌卡因联合舒芬太尼进行镇痛,对照组患者进行正常分娩,不采取任何镇痛措施。分析比较两组患者的临床疗效。结果经统计分析,实验组患者在产程、出血量以及转剖宫产等指标上均优于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论使用盐酸罗哌卡因联合舒芬太尼在分娩过程中进行镇痛,操作较简便,可显著减轻分娩过程中的疼痛,对母婴影响较小。

活性氧与衰老的研究进展

活性氧是生物体内正常新陈代谢或由于环境因素而产生的具有很高生物活性的含氧化合物.ROS具有双重作用,细胞内部高浓度的ROS会引起氧化应激,损伤脂类、蛋白质、DNA等分子的结构,对细胞造成毒害作用;但在合适的生理浓度下,ROS则可通过信号转导途径触发细胞的防御保护机制.本文综述了细胞内ROS的种类以及抗氧化机制,并着重介绍线粒体自由基理论与衰老之间的关系.

科研创新能力对本科医学生就业的影响

科研创新能力是大学生重要的素质要求,但目前我国对本科医学生科研创新能力的培养相对不足,本文从就业需求的角度出发,探讨医学生科研创新能力对就业的影响,以及提高科研技能竞争力的对策。

永磁同步直线电动机电流控制方法

电流环的设计是永磁同步直线电动机(PMSLM)控制系统中非常重要的一个环节,所有的控制策略最终实质上都是对逆变器输出电流的控制,分别采用PI电流控制、滞环电流控制以及预测电流控制,三种电流闭环控制方法,实现了对永磁同步直线电动机的电流闭环控制,并分析了三种电流控制方法的优缺点。针对预测电流控制中存在的时延及参数扰动问题,引入三阶超螺旋滑模观测器实现对扰动的观测与补偿,从而提高了预测电流控制的鲁棒性。实验结果证明,预测电流控制方法能够兼顾系统的精度以及带宽要求,相较于前两者具有较好的控制特性。

DRE2基因参与酵母内质网应激调控机制的初步研究

目的初步研究DRE2基因在抗肿瘤药物衣霉素诱导的内质网应激中的作用机制。方法以质粒pRS306为模板,通过PCR扩增含有URA3开放阅读框的DRE2基因破坏元件der2::URA3,然后利用基因重组原理,构建DRE2基因杂合缺失酵母菌株,并进一步检测其对衣霉素的抗性和复制寿命。结果相对于野生型菌株,DRE2基因杂合缺失酵母菌株对衣霉素的抗性增高,复制寿命缩短(P<0.05)。结论 DRE2基因可能参与了酵母内质网应激和衰老的调控。

Rli1基因参与酵母氟康唑耐药机制的初步研究

目的初步研究Rli1基因缺失酵母菌株对氟康唑耐药的机制。方法利用基因重组原理,构建Rli1基因杂合缺失酵母菌株,检测其对抗真菌药物氟康唑的耐药性,以及其复制寿命。结果相对于野生酵母菌株,Rli1基因杂合缺失酵母菌株对氟康唑具有明显的耐药性,但是其复制寿命无明显变化。结论 Rli1基因很可能参与了酵母氟康唑耐药机制的调控。

KSP1基因参与酵母复制寿命调控机制的初步研究

目的研究KSP1基因在酵母复制寿命和衰老中的作用。方法利用基因重组原理,构建KSP1基因缺失酵母菌株,检测其复制寿命和增殖速度。结果相对于野生酵母菌株,KSP1基因缺失酵母菌株的复制寿命缩短,增殖速度减慢。结论KSP1基因很可能参与了酵母复制寿命和衰老的调控。

Nar1基因酵母表达载体的构建及表达鉴定

目的:构建Nar1基因的酵母表达载体,并纯化His-Nar1融合蛋白,为进一步研究Nar1的相互作用蛋白及其功能奠定基础。方法:通过PCR扩增Nar1全长基因;通过定向克隆的方法将Nar1片段与载体pYES2/NTC连接;通过乙酸锂转化法把重组质粒转化入野生型酵母菌株INVSc1;再通过免疫沉淀的方法纯化His-Nar1融合蛋白;通过Western blot检测靶蛋白。结果:DNA测序验证穿梭表达质粒pYES2/NTC-Nar1构建成功,Western blot检测到融合蛋白His-Nar1的表达。结论:成功构建Nar1酵母过表达载体,并且可以有效表达融合蛋白His-Nar1。

吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效分析

目的探讨吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效。方法选取2013年3月~2015年3月于我院进行治疗的NSCLC患者140例,随机均分为观察组和对照组各70例。对照组患者静脉注射吉西他滨(1 000 mg/m^2,第1 d、8 d)。观察组患者静脉注射吉西他滨(1 000mg/m^2,第1 d、8 d)和顺铂(40 mg/m^2,第1 d、8 d)。每21 d为一个疗程,共持续4个疗程。比较两组的临床疗效与不良反应发生情况。结果经研究比较,观察组总有效率优于对照组(P<0.05);不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效确切,副作用小,患者耐受性好。

紫杉醇联合顺铂治疗食道癌的临床分析

目的探究分析紫杉醇联合顺铂在治疗食道癌上的临床疗效。方法整群选取郑州大学附属洛阳中心医院自2014年5月—2015年5月共收治的120例食道癌患者为研究对象,随机分成两组实验组60例与对照组60例,给予对照组以5-氟尿嘧啶联合顺铂治疗,而给予实验组以紫杉醇联合顺铂进行治疗,分析并探讨两组患者的临床有效率。结果经统计分析,实验组患者中明显好转31例,好转24例,无效5例,总有效率为91.67%,对照组中明显好转16例,好转28例,无效16例,总有效率为73.33%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在对食道癌患者进行治疗时采用紫杉醇联合顺铂,可显著提高患者的临床有效率,大大减轻了患者的病痛,值得在临床上做进一步的推广使用。

酵母CIA2参与盐迫胁调节机制的初步研究

目的初步研究酵母CIA2基因的功能。方法构建CIA2过表达酵母菌株,研究CIA2过表达菌株的盐迫胁反应以及复制寿命等方面的作用。结果在盐迫胁条件下,CIA2过表达菌株的克隆形成能力、细胞内甘油含量的增加倍数明显高于野生型酵母菌株,而细胞内丙二醛的含量则低于野生型酵母菌株,差异均有统计学意义(P<0.01);CIA2过表达酵母菌株的复制寿命和野生型酵母菌株比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CIA2参与了酵母盐迫胁反应。

胎儿染色体非整倍体无创检测在高危孕妇产前诊断中的应用

目的探讨胎儿染色体非整倍体无创检测(NIPT)在诊断高危孕妇胎儿染色体非整倍体疾病中的临床价值及意义。方法选取697例高龄(预产期年龄>35岁)、唐氏综合征血清学筛查高危、唐氏综合征血清学筛查临界值、有不良孕产史的孕妇,对其外周血中游离胎儿DNA进行测序分析,高风险者进行羊水穿刺及染色体核型分析,低风险者进行随访。结果NIPT结果为高风险者共12例,包括7例21-三体综合征,4例18-三体综合征,1例13-三体综合征;NIPT与羊水染色体核型分析阳性符合率100%;孕妇年龄>40岁,染色体非整倍体疾病发生率高达6.3%。结论NIPT可作为高危孕妇染色体非整倍体疾病的筛查手段,从而减少不必要的侵入性产前诊断。

黄芪多糖对心肌过氧化氢损伤的保护机制研究

目的探索黄芪多糖(APS)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱发的大鼠心肌细胞H9C2的保护作用及可能机制。方法实验分为①对照组;②对照+APS组;③H_(2)O_(2)损伤组;④H_(2)O_(2)损伤+APS修复组,采用乳酸脱氢酶(LDH)漏出量测定、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]检测、免疫荧光染色、原位末端标记法(TUNEL)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及蛋白质印迹(WB)等实验方法,观察APS对H_(2)O_(2)引起的心肌细胞损伤、死亡的影响以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1(PGC-1)/肌肉因子(irisin)信号通路在其中的参与情况。结果与对照组相比,H_(2)O_(2)损伤组,细胞死亡率显著提高[(23.3±1.14)%vs.(12.81±0.71)%,P<0.001];与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)损伤+APS修复组黄芪多糖组能够显著降低过氧化氢引起的细胞死亡[(16.93±0.64)%vs.(23.3±1.14)%,P<0.001]、提高细胞生存率[(65.77±5.08)%vs.(39.95±4.90)%,P<0.05)]、减轻细胞凋亡[(18.90±1.14)%vs.(4.80±0.39)%,P<0.001]。黄芪多糖处理后,irisin及其上游调控因子PGC-1α的信使核糖核酸(mRNA)转录水平和蛋白表达量均明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪多糖对心肌细胞的保护作用至少部分是通过PGC-1α/irisin信号通路实现。