KISS-1和MMP-9在裸鼠子宫内膜异位症模型中的表达及意义

目的探讨KISS1和基质金属蛋白酶9(MMP9)在子宫不同生长阶段异位内膜组织中的表达及两者之间的相互作用。方法将生育年龄妇女的分泌晚期子宫内膜组织种植入裸鼠的盆腹腔,建立裸鼠子宫内膜异位症(EM)模型。采用RTPCR方法,检测不同生长阶段异位内膜中KISS1mRNA及MMP9mRNA的表达相对强度。结果KISS1在5,10,15d组和对照组比较,表达降低,差异显著(P<0.05);30d组与对照组比较,无显著性差异(P>0.05)。MMP9在5,10,15,30d组与对照组比较表达增强,差异显著(P<0.05);且15d组表达最强,与5,10,30d组比较差异显著(P<0.05)。KISS1和MMP9两者表达比较呈负相关(r=-0.575,P<0.01)。结论KISS1表达减弱和MMP9表达增强可能与EM的侵袭过程有关,两者在EM发生发展中发挥重要作用。

雷帕霉素联合多西紫杉醇对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂雷帕霉素(RAPA)联合多西紫杉醇(DOC)对肺癌细胞系A549、SPC-A-1、95D和NCI-H446增殖抑制及凋亡的影响。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度RAPA组、DOC组及DOC联合20.0 nmol.L-1 RAPA组对肺癌细胞系增殖抑制作用;流式细胞仪法检测RAPA组、DOC组及DOC联合20.0 nmol.L-1 RAPA组对肺癌95D细胞凋亡的影响。结果 RAPA能抑制肺癌细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性;单独应用DOC及DOC联合20.0 nmol.L-1 RAPA均可显著抑制肺癌细胞的增殖,且联合应用抑制率显著升高(P<0.05);流式细胞仪检测显示RAPA及DOC均可增加肺癌95D细胞的凋亡率(P<0.05),联合应用明显增加细胞的凋亡率(P<0.05)。结论 mTOR信号通路参与肺癌细胞的增殖与凋亡,mTOR信号通路抑制剂RAPA可增强DOC的抗肿瘤效应。

RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌细胞中的相关性研究

目的探讨肿瘤转移相关因子RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌侵袭转移过程中的作用及相关机制。方法利用PI3K/Akt/mTOR信号通路上特异性的抑制剂,采用MTT法,伤口愈合实验及侵袭实验观察不同浓度药物对肺癌95D细胞生长侵袭转移能力的影响,通过Western Blot方法观察RhoGDI2蛋白水平的变化。结果PI3K抑制剂LY294002及mTOR抑制剂Rapamycin都能抑制肺癌细胞95D的侵袭转移能力,联合应用抑制作用更强。PI3K抑制剂LY294002处理组RhoGDI2蛋白的表达量增加,且随浓度增加RhoGDI2蛋白表达也增加。mTOR抑制剂Rapamycin组,在低浓度时增加RhoGDI2蛋白的表达,但增大Rapamycin的浓度,RhoGDI2蛋白的表达反而降低。低浓度LY294002组和Rapa-mycin组联合应用可以明显增加RhoGDI2蛋白的表达。结论PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt的活化与RhoGDI2密切相关,RhoGDI2可能直接或间接通过与Akt的相互作用参与调节肺癌的侵袭转移的过程。

RhoGDI2在肺鳞癌、腺癌组织和肺癌细胞系中的表达及其临床意义

目的本研究探讨RhoGDI2在肺鳞癌和腺癌组织及肺癌细胞系中的作用及其临床意义。方法采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测112例肺癌组织标本中RhoGDI2蛋白和20例新鲜肺癌组织中RhoGDI2 mRNA的表达,结合肺癌的临床病理特点进行分析。同时应用Western blot和RT-PCR方法检测肺癌细胞系中RhoGDI2蛋白和mRNA水平的表达情况。结果肺鳞癌和腺癌组织中RhoGDI2的表达与组织分级有关,随着分化程度的降低,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01);与TNM分期有关,随着分期级别的升高,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01);与是否淋巴结转移有关,存在淋巴结转移的标本,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01)。RhoGDI2蛋白的表达与组织类型、患者的年龄和性别无关。在选取的肺癌细胞系A549、95D、SPC-A-1和NCI-H446中,无论mRNA水平还是蛋白水平RhoGDI2都有表达,但表达水平不尽相同,在A549、NCI-H446细胞系中表达较低,在SPC-A-1、95D细胞系中表达相对较高。结论RhoGDI2与肺癌的发生发展和转移过程有关,进一步研究RhoGDI2与其作用因子之间的相互作用,将有助于进一步揭示肺癌发生发展及转移过程。

Metastin和基质金属蛋白酶-9在裸鼠子宫内膜异位症模型中的表达及意义

目的:通过建立裸鼠子宫内膜异位症模型,探讨Metastin和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在不同生长阶段的异位内膜组织中的表达及两者之间的相互作用。方法:将生育年龄妇女的分泌晚期子宫内膜组织种植入裸鼠的盆腹腔,建立裸鼠子宫内膜异位症(EMs)模型,分别于5d、10d、15d、30d随机处死裸鼠,取异位生长的内膜组织作为研究组,以非EMs生育年龄妇女的子宫内膜组织作为对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法(SP法),检测不同生长阶段异位内膜中Metastin及MMP-9mRNA和蛋白的表达特性。结果:Metastin基因在5d、10d和15d组与对照组比较,表达降低,差异显著(P<0．05);30d组与对照组比较,无显著差异(P>0．05)。MMP-9基因在5d、10d、15d和30d组的表达与对照组比较,表达增强,差异显著(P<0．05);且15d组表达最强,与5d、10d、30d组比较差异显著(P<0．05)。Metastin和MMP-9两者mRNA表达比较成负相关(r=-0．575,P<0．01)。Metastin蛋白在进展期病灶组(5d、10d和15d)和晚期病灶(30d组)表达率分别为29．2%和75．0％,低于对照组人正常子宫内膜的表达率(100％);MMP-9蛋白在进展期病灶组(5d、10d和15d)和晚期病灶(30d组)表达率分别为87．5％和75．0％,高于对照组人正常子宫内膜的表达率(30．O％)。结论:Metastin表达减弱和MMP-9表达增强可能与内异症的侵袭过程有关,两者在。EMs发生发展中发挥重要作用。

雷帕霉素联合多西紫杉醇诱导肺癌95D细胞凋亡的机制研究

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路抑制剂雷帕霉素(rapamycin,Rapa)联合多西紫杉醇(docetaxel,DTX)对肺癌95D细胞系凋亡的影响。方法:流式细胞仪检测雷帕霉素及联合多西紫杉醇对95D细胞凋亡的影响,RT-PCR方法和Western blot检测凋亡基因survivin mRNA和蛋白的表达。结果:mTOR抑制剂雷帕霉素和多西紫杉醇单独处理组均能促进肺癌细胞的凋亡,下调凋亡基因survivin mRNA和蛋白的表达;联合应用雷帕霉素和多西紫杉醇促凋亡作用更强,survivin mRNA和蛋白的表达下降更明显。结论:雷帕霉素联合多西紫杉可以降低survivin的表达,从而起到促进肿瘤细胞凋亡的作用,为临床寻找新型抗肿瘤药物及治疗肺癌的新化学治疗方案提供了理论和实践基础。

PI3K/Akt/mTOR信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的恶性肿瘤,每年有超过100万人死于肺癌。PI3K/Akt通路在肿瘤治疗方面已经有了比较广泛的研究,活化受体酪氨酸激酶和它们下游信号递质的研究也已经为肺癌的治疗打开了一个非常有前景的领域。由于PI3K/Akt通路在下游多点活化受体酪氨酸激酶,因此被广泛地研究并开发新的抗肿瘤制剂。mTOR已经被确定是PI3K/Akt的下游靶点。雷帕霉素及其衍生物具有高度选择性,mTOR的抑制剂对于多种肿瘤的治疗效果已取得了很好的研究结果。在此我们将对肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号通路的分子基础做一综述,并进一步讨论有关肺癌的多靶点治疗策略。

PLT、CRP变化及SIRS评分对老年感染中毒症患者预后的影响

目的探讨血小板计数(PLT)、C反应蛋白(CRP)的变化及SIRS评分对老年感染中毒症患者预后的影响。方法将126例老年感染患者按照国际感染中毒症会议制定的诊断标准分为感染中毒症患者96例(观察组)和单纯感染患者30例(对照组),比较两组血清PLT、CRP的变化及SIRS评分。结果观察组PLT明显低于对照组,CRP明显高于对照组。观察组死亡者(36例)PLT明显低于生存者(60例),随SIRS评分分值增高,病死率有增加趋势。结论PLT、CRP及SIRS评分可用于评估老年感染中毒症预后并指导治疗。

细胞外信号调节激酶蛋白参与雷帕霉素诱导的肺癌95D细胞凋亡的机制研究

目的观察雷帕霉素(Rapa)及联合多西紫杉醇(DTX)对肺癌95D细胞系凋亡的作用,并进一步探讨其对细胞外信号调节激酶蛋白(ERK1/2)表达的影响。方法流式细胞仪方法检测单独应用雷帕霉素和多西紫杉醇及两药联合应用对95D细胞凋亡的影响,Western Blot方法检测ERK1/2蛋白及p-ERK1/2蛋白的表达。结果雷帕霉素和多西紫杉醇单独处理组均能促进肺癌细胞的凋亡,且随着浓度的增加其促凋亡作用明显增加;联合应用雷帕霉素和多西紫杉醇促凋亡作用更强,并能显著降低p-ERK1/2蛋白的表达。结论雷帕霉素联合多西紫杉能进一步促进肺癌95D细胞凋亡,ERK1/2信号通路参与其诱导的肺癌95D细胞的凋亡过程。

肝细胞生长因子对肺癌95D细胞系增殖和侵袭的影响

目的探讨人类重组肝细胞生长因子(rhHGF)对人肺癌95D细胞系侵袭、增殖的影响及其机制。方法应用细胞培养技术培养95D细胞,分别用10,30,50μg/L不同浓度rhHGF作用95D细胞48h,以MTT法检测rhHGF对95D细胞增殖的影响;以过河实验、Transwell方法及RT-PCR方法检测rhHGF对95D细胞的运动侵袭能力和对MMP-9基因表达的影响。结果rhHGF可明显增加95D细胞的增殖和生长,且随浓度提高作用增强,呈剂量效应关系。过河实验、Transwell方法显示rhHGF能增强95D细胞的体外侵袭和运动能力,随浓度提高,过河时间缩短,细胞侵袭力增加(P<0.05);RT-PCR测定显示rhHGF作用48h后,95D细胞中MMP-9基因表达上升。结论rhHGF可促进人肺癌95D细胞的生长和增加其体外侵袭能力,其机制与直接增加95D细胞迁移运动,及MMP-9表达增加有关。

雷帕霉素对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

将不同浓度雷帕霉素作用于肺腺癌A549细胞。用MTT比色法测定细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果雷帕霉素对肺腺癌细胞有显著的抑制作用,呈剂量—效应和时间—效应关系;流式细胞仪检测示雷帕霉素可将肺腺癌细胞阻滞于G1期,S期合成减少;同时细胞凋亡率随着雷帕霉素浓度增加而增加。认为雷帕霉素能有效地抑制肺腺癌细胞A549增殖,阻滞细胞周期并诱导其发生凋亡。

肿瘤转移相关因子RhoGDI2蛋白在肺癌95D细胞侵袭转移中的作用

目的研究肿瘤转移相关因子RhoGDI2蛋白在肺癌95D细胞侵袭转移中的作用。方法应用细胞培养技术培养95D细胞,分别10,30μg/L不同浓度rhHGF作用95D细胞48 h后收集细胞沉淀,利用蛋白印迹方法检测RhoGDI2蛋白表达情况。结果无血清培养的95D细胞中RhoGDI2蛋白的表达,高于正常10%胎牛血清培养的细胞组,而10%胎牛血清培养的细胞组与10ng/mL rhHGF组RhoGDI2蛋白的表达水平相当,但30ng/mL rhHGF组RhoGDI2蛋白表达明显降低。结论促进肺癌95D细胞生长、侵袭转移的因素与RhoGDI2的表达成负相关。

鸟苷酸解离抑制因子-2真核表达载体构建及稳定转染A549细胞株的建立

目的构建Rab蛋白鸟苷酸解离抑制因子-2(GDI2)真核表达载体并建立稳定转染A549细胞株。方法聚合酶链反应(PCR)扩增GDI2基因片段,构建pcDNA3.1-GDI2真核表达载体,经酶切、PCR、测序验证其正确性,脂质体法转染真核细胞A549,G418筛选建立稳定转染的细胞株。免疫印迹法检测稳定转染的细胞株。结果构建了真核表达载体并建立了稳定转染的A549细胞株,成功表达GDI2蛋白。结论 GDI2真核表达载体成功构建及稳定转染A549细胞株的建立,为研究GDI2过度表达对肿瘤侵袭和转移的影响奠定了实验基础。

3种肺炎支原体感染检测方法的临床效果比较

目的比较实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法、培养-增强套式PCR(培养-增强nPCR)法和培养法检测肺炎支原体感染的临床应用价值。方法分别采用实时FQ-PCR法、培养-增强nPCR法和培养法对临床诊断为肺炎支原体肺炎和疑似肺炎支原体肺炎的97例患儿的咽拭子标本进行检测。结果实时FQ-PCR法检测的阳性率明显高于培养法(P<0.001),实时FQ-PCR法的检出率和培养-增强nPCR法比较无显著差别(P>0.05),但实时FQ-PCR法更加简便、快速。结论实时FQ-PCR法较培养-增强nPCR法和培养法更适用于肺炎支原体的早期快速诊断。

西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的探讨西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响。方法通过Transwell小室分析西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测西瑞香素对肺癌A549细胞迁移能力的影响;Western blotting检测西瑞香素作用于A549细胞后MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。结果 Transwell小室实验结果提示,西瑞香素对A549细胞侵袭能力有抑制作用;划痕实验结果提示,西瑞香素对A549细胞迁移能力有抑制作用;Western blotting结果提示,西瑞香素抑制MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。随着药物浓度增加,MMP-2、MMP-9表达减少,具有剂量依赖性。结论西瑞香素对A549细胞体外侵袭及迁移有抑制作用,这种作用与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。

P38 MAPK信号通路在金黄色葡萄球菌诱导U937细胞凋亡中的作用

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡模型,探讨p38 MAPK信号转导通路在此凋亡过程中的作用。方法采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测金黄色葡萄球菌感染不同时间时U937细胞的凋亡率;利用Western blotting检测p38MAPK的磷酸化水平;预先用不同浓度的SB203580(p38 MAPK途径抑制剂)处理U937细胞,采用Annexin V FITC/PI双染分析感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果金黄色葡萄球菌可以诱导U937细胞凋亡,并且随着感染时间的延长,细胞凋亡率也逐渐增高。p38 MAPK在加入金黄色葡萄球菌15min后表达明显增高,30min时达高峰,随后,逐渐降低。总的p38 MAPK水平在整个实验期间内几乎无变化。用SB203580抑制p38 MAPK通路,引起抑制剂浓度依赖性的细胞凋亡率降低。结论金黄色葡萄球菌呈时间依赖性诱导U937细胞凋亡,p38 MAPK信号转导通路的激活在金黄色葡萄球菌诱导的U937细胞凋亡过程中起到了重要的作用。

人子宫内膜异位症小白鼠模型的建立及雌、孕激素受体的表达(英文)

目的 为子宫内膜异位症 (EM)的临床研究提供实验动物模型。方法 选择成熟雌性小白鼠 ,切除卵巢。实验组 :取EM患者和正常育龄妇女分泌晚期子宫内膜 ,剪碎 ,随机置入小白鼠盆腹腔 ;对照组 :同法置入人大网膜。实验Ⅰ组和对照组给雌激素支持 ,实验Ⅱ组不给雌激素。各组小白鼠分别于 5、10、15、2 0d脱颈椎处死 ,观察异位病灶生长情况。免疫组化法检测异位病灶雌、孕激素受体表达。结果 子宫内膜种植第 5天 ,腹膜等部位即见异位病灶生长 ,可见腺体细胞及散在间质细胞 ,时间越长 ,病灶与小白鼠组织融合越明显 ,粘连越重。用EM患者和正常育龄妇女内膜种植的异位病灶无差别 ,实验Ⅰ组和Ⅱ组所形成的异位病灶亦无差别 ,它们的雌、孕激素受体表达未显示差别 ,多数呈弱表达。结论 小白鼠做为EM早期动物模型科学、简便、可行 ,雌激素对早期异位病灶发生无影响 ,EM是与多因素相关的全身性疾病。

人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立及雌、孕激素受体的表达

目的 为子宫内膜异位症 (EM)的临床研究提供实验动物模型。方法 实验组 :取EM和正常育龄妇女分泌晚期子宫内膜 ,剪碎 ,随机置入裸鼠盆腹腔 ,实验Ⅰ组切除卵巢 ,实验Ⅱ组不切除卵巢 ;对照组 :同法置入人大网膜。术后给雌激素支持。各组裸鼠分别于 5、10、15、2 0、2 5、3 0d脱颈椎处死 ,观察异位病灶生长情况。免疫组化SP法检测异位病灶雌、孕激素受体表达。结果 子宫内膜种植 5d即见异位病灶牢固粘附 ,主要发生在腹壁(56% )、膀胱旁脂肪 (2 1% )等部位 ,可见腺体细胞及散在间质细胞 ,时间越长 ,病灶与裸鼠组织融合越明显 ,盆腹腔粘连越重。用EM患者和正常育龄妇女内膜移植的异位病灶无差别 ,实验Ⅰ组和实验Ⅱ组的裸鼠所形成的异位病灶亦无差别 ,它们的雌、孕激素受体表达未显示差别 ,多数呈弱表达。结论 裸鼠做为EM早期动物模型科学、简便、可行。

丝裂原活化的细胞外信号调节激酶在金黄色葡萄球菌诱导的U937细胞凋亡中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用。方法采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞凋亡,用Western blotting方法分析不同作用时间MEK和ERK1/2的磷酸化水平。预先用不同浓度的PD98059(ERK途径抑制剂)处理U937细胞1h,观察金葡菌感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果U937细胞经过金葡菌处理后,发生凋亡,细胞凋亡率呈时间依赖性升高;随着感染时间的延长,MEK和ERK1/2的磷酸化水平逐渐增加,尤以ERK2比较明显。U937细胞的凋亡可被PD98059抑制。结论金葡菌以时间依赖的方式诱导U937细胞凋亡;金葡菌诱导U937细胞凋亡的效应与激活ERK1/2信号转导通路有关。

肠致病性大肠杆菌感染时血清TNF-α和IL-1β含量的检测及意义

目的研究肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic escherichia coli,EPEC)感染人单核白血病细胞系THP-1细胞时,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-1β水平的动态变化及与其THP-1细胞凋亡的关系。方法以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测THP-1细胞凋亡率,以MTT法测定细胞存活率;并用酶联免疫吸附测定法动态检测感染24h内细胞培养上清中TNF-α和IL-1β浓度的变化。结果EPEC感染THP-1细胞后TNF-α和IL-1β活性均显著增加,峰值分别出现在感染后6及12h,而后逐渐下降,IL-1β活性至感染后24h仍高于对照组;THP-1细胞凋亡率在感染后逐渐增高,至24h达高峰。结论EPEC可激活多种炎症介质和诱导THP-1凋亡,EPEC感染THP-1细胞后TNF-α和IL-1β水平的升高具有重要作用。