补骨脂酚对人A375细胞黑素生成及MAPK信号通路干预作用研究

目的探讨补骨脂酚抑制A375细胞的黑素合成效果及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的干预作用。方法体外培养A375细胞,经不同浓度的补骨脂酚(100μmol/L、10μmol/L、1μmol/L、10^(-1)μmol/L、10^(-2)μmol/L、10^(-3)μmol/L)干预后,采用MTT法和多巴氧化法检测细胞增殖率和酪氨酸酶(TYR)活性;氢氧化钠裂解法检测黑素含量的变化;RT-PCR法测定酪氨酸酶及相关蛋白(TRP-1、TRP-2)和MAPK通路相关蛋白激酶JNK2、ERK1、ERK2 mRNA的表达量。结果与空白组比较,补骨脂酚(10^(-1)μmol/L、10^(-2)μmol/L、10^(-3)μmol/L)对黑素合成率和TYR活性均明显降低(P<0.05,P<0.01),补骨脂酚(10^(-1)μmol/L)对TYR、TRP-1、TRP-2、JNK2、ERK1、ERK2的mRNA基因表达量均显著抑制(P<0.05,P<0.01)。结论补骨脂酚对A375细胞黑素合成及TYR活性有抑制作用,其变化可能是通过下调TYR、TRP-1、TRP-2、JNK2、ERK1、ERK2的mRNA基因表达量来实现的。

温肾降浊散对大鼠阳离子化牛血清白蛋白肾小球肾炎模型的影响

目的:观察温肾降浊散对大鼠阳离子化牛血清白蛋白(Cationic bovine serum albumin,C-BSA)肾小球肾炎模型的影响。方法:随机选取10只为正常对照组,其余大鼠制备C-BSA肾小球肾炎模型,造模成功的大鼠随机分为模型对照组9只、雷公藤多苷治疗组8只、温肾降浊散高剂量组7只和温肾降浊散低剂量组9只。温肾降浊散高剂量组给予3.3 g·(kg·d)-1混悬液灌胃,低剂量组给予0.33 g·(kg·d)-1混悬液灌胃,每日1次。雷公藤多苷治疗组给予10 g·(kg·d)-1混悬液灌胃,每日1次。正常对照组和模型对照组灌胃给予等量蒸馏水,至实验第63天。取大鼠全血和尿液标本,分别做24 h尿蛋白定量、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(serum creatinine,Scr)、三酰甘油(three acyl glycerin,TG)、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)及低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein,LDL-C)的测定。结果:与正常对照组比较,模型对照组24 h尿蛋白、Scr、TC、TG、BUN和LDL均升高,其中24 h尿蛋白、Scr、TC和TG具有显著性差异(P<0.05),BUN、LDL无显著性差异(P>0.05)。与模型对照组比较,雷公藤多苷治疗组、温肾降浊散高剂量组及低剂量组24 h尿蛋白、Scr、TC、TG、BUN、LDL均降低,其中24 h尿蛋白、Scr、TC、TG具有显著性差异(P<0.05),BUN、LDL无显著性差异(P>0.05)。与雷公藤多苷治疗组比较,温肾降浊散高剂量组及低剂量组各指标均无显著性差异(P>0.05),作用与雷公藤多苷相当。结论:温肾降浊散对大鼠C-BSA肾小球肾炎模型有较好的治疗作用。

松脂醇二葡萄糖苷对UVB诱导HDF细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨松脂醇二葡萄糖苷(PDG)对UVB诱导人真皮成纤维细胞(HDF)损伤的保护作用及机制。方法:采用MTT法测定细胞增殖率,利用Western-blot法测定细胞中胶原蛋白(COLⅠ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、ERβ、p-P38蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR法检测MMP-1 mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型组细胞增殖率及ERβ、COLⅠ蛋白表达显著降低,MMP-1、p-P38蛋白表达及MMP-1 mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,松脂醇二葡萄糖苷组细胞增殖率和胶原蛋白显著升高,同时PDG对MMP-1蛋白和MMP-1mRNA表达有抑制作用,并能显著上调ERβ蛋白表达和下调p-P38蛋白表达(P<0.01);与松脂醇二葡萄糖苷组比较,ICI182780能显著下调ERβ蛋白表达量并提高MMP-1 mRNA表达,同时SB203580对MMP-1、p-P38蛋白表达和MMP-1 mRNA表达有显著的抑制作用(P<0.01)。结论:PDG能促进HDF增殖,其机制可能是通过ER-P38MAPK信号通路实现对MMP-1的抑制,进而促进胶原合成达到预防和治疗光老化的目的。

白桦脂醇对A375细胞黑素合成及相关细胞信号通路调控机制的研究

目的:探讨白桦脂醇治疗黄褐斑的内在作用机制。方法:选择对数生长期的A375细胞,培养24 h,弃掉液体,然后分组并加入不同浓度药液200μL,组别设定为空白组、雌二醇组(1×10^(-3)μmol·L^(-1)浓度的雌二醇)和白桦脂醇组(设定浓度的白桦脂醇),每组均设置6个复孔。用白桦脂醇干预A375细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;Na OH裂解法检测黑素量;多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR)活性;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测TYR,酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的表达,及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路中关键蛋白激酶ERK1,ERK2,JNK2的mRNA表达。结果:与空白组比较,白桦脂醇在1,1×10^(-1),1×10^(-2),1×10^(-3)μmol·L^(-1)剂量下可明显抑制A375细胞黑素合成及TYR活性,1μmol·L^(-1)白桦脂醇可明显下调A375细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA表达,以及ERK1,ERK2,JNK2 mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:白桦脂醇可能是通过抑制TYR活性和/或下调TYR,TRP-1及TRP-2 mRNA表达,抑制了A375细胞中黑素的合成,并且这种作用与抑制ERK1,ERK2,JNK2的基因表达有关。