基于转录组的欧美杨Pnd-WRKY3基因克隆及其抗锈菌表达

为探究欧美杂交杨转录调控因子Pnd-WRKY3在落叶松-杨栅锈菌(Melampsora larici-populina)E4生理小种侵染欧美杨(Populus nigra×P.deltoides)后不同时间点的具体功能,根据转录组测序结果设计特异性引物进行Pnd-WRKY3基因CDS区克隆,应用生物信息学预测Pnd-WRKY3调控的靶基因,采用荧光定量Q-PCR研究PndWRKY3基因抗锈菌表达特性。结果表明:Pnd-WRKY3基因蛋白编码区全长1 779 bp,预测具有W盒的靶基因49条,其中杨树动力蛋白表达量与Pnd-WRKY3基因表达量正相关。Q-PCR结果表明,锈菌菌丝生长期及生物量大量增长时期,Pnd-WRKY3基因表达量上调。在锈菌完成一个生长周期形成夏孢子时,Pnd-WRKY3基因表达量开始下降。

C14族R2R3-MYB基因调控杨树抗锈菌过敏性反应

由落叶松-杨栅锈菌引起的杨树叶锈病分布广泛,危害严重。为探究杨树C14族R2R3-MYB基因在杨树抗锈菌过敏性反应中的调控作用,对接种了落叶松-杨栅锈菌E4强致病性生理小种的2种杨树叶片进行症状观察、感病指数判定并对2种杨树C14族共6条R2R3-MYB基因表达量变化情况进行分析。接种7 dpi后,弱感病性树种杂交杨叶片产生的夏孢子堆数量显著少于感病树种欧美杨。杂交杨叶片4 dpi开始出现过敏性反应症状,欧美杨未观察到类似症状。表明过敏性反应可有效阻止锈菌夏孢子堆形成,降低杨树感病性。杂交杨与欧美杨R2R3-MYB基因表达量变化趋势相反,预测杨树C14族R2R3-MYB基因为杨树与病原互作过程中调控过敏性反应的正向调控因子。本研究为进一步系统研究杨树R2R3-MYB基因与过敏性反应的调控机理及杨树抗病育种工作提供理论依据。

注射用硫普罗宁致过敏性休克1例

1临床资料 患者，女，45岁，因“乙状结肠癌术后5月余。要求化疗”，与2011年2月22日入院；查体：ZPS评分0～1分，浅表淋巴结无肿大，腹平坦，脐上可见一约3cm腔镜切口，愈合良好，查体未见明显异常；辅助检查：电解质肝肾功能正常，肿瘤标志物正常，血常规正常，大便常规正常，尿常规正常。

2011年我院中心药房精神药品使用情况分析

通过计算机管理系统检索2011年我院精神药品的临床使用数据,以限定日剂量(DDD)和药物利用指数(DUI)为指标,分析其临床使用情况。9种药物的DUI<1.0,1种DUI>1.0。说明我院精神药品的应用基本合理。

欧美杂交杨Pnd-LRR3基因克隆及其抗锈菌侵染表达

为深入探究欧美杂交杨(Populus nigra×P.deltoides)感病的分子机理,以及抗病基因在发病过程中所起的作用,克隆了欧美杂交杨LRR3蛋白编码基因Pnd-LRR3。对Pnd-LRR3基因进行了生物信息学分析,并对其在抗锈菌过程中的功能进行了研究。Q-PCR结果显示,强致病性的落叶松-杨栅锈菌(Melampsora larici-populina)E4菌株接种6 h,Pnd-LRR3基因表达量上调增幅较大,168 h为显著下调。说明Pnd-LRR3基因在E4侵染过程中起到一定抗性作用,但最终无法阻止锈菌的侵染。

MicroRNA转录后调控欧美杨R2R3-MYBs抗锈菌表达

[目的]强致病锈菌亲和型树种欧美杨适合做寄主感病分子机理研究。研究表明转录因子及其调控miRNA在杨树抗/感病过程中起重要的信号传导和调控作用,决定杨树与锈菌的亲和性。为深入研究杨树感病性,对欧美杨R2R3-MYB转录因子及其调控miRNA进行研究。[方法]构建锈菌侵染和未侵染miRNA组、降解组文库和基因表达谱文库,进行高通量测序。对基因表达谱结果进行生物信息学分析鉴定R2R3-MYBs,根据miRNA组和降解组数据确定R2R3-MYBs调控miRNA。应用定量PCR技术鉴定候选R2R3-MYBs和其调控miRNA的表达量。[结果]共鉴定到230个欧美杨R2R3-MYBs,其中55个R2R3-MYBs在锈菌侵染和未侵染叶片间表达量差异显著,其余表达量变化不显著。基于降解组,共鉴定到由22个miRNA调控18个R2R3-MYBs的86个转录后调控关系。定量PCR结果表明PC-3p-2521022_1与Pnd MYB173存在转录后负调控关系。预测的R2R3-MYB靶基因涉及水杨酸、茉莉酸、乙烯和脱落酸等多个植物激素抗性路径。[结论]E4强致病锈菌侵染导致亲和型树种欧美杨23.9%的R2R3-MYBs表达量发生变化,锈菌侵染不但可以影响R2R3-MYBs的表达量,还可以启动或关闭R2R3-MYBs的表达。欧美杨在E4强致病锈菌胁迫条件下,R2R3-MYBs转录后主要受miR159和miR858家族的miRNA调控。

杂交杨转录因子Pdt-ERF3抗锈病基因表达

落叶松-杨栅锈菌(Melampsora larici-populina)严重危害多种杨树。为探究转录调控因子ERF3在杂交杨抗锈菌反应中的分子机理,克隆到弱感病性树种杂交杨(Populus deltoides×P.trichocarpa)和感病树种欧美杨(Populus×euramericana)ERF3基因:Pdt-ERF3和Pnd-ERF3。采用荧光定量Q-PCR技术对接种E4强致病性落叶松-杨栅锈菌前后PdtERF3和Pnd-ERF3基因表达量变化进行分析。落叶松-杨栅锈菌接种后,Pdt-ERF3表达量在12 hpi达到高峰期,PndERF3表达量在24 hpi显著上调,在96 hpi达到高峰期。Pnd-ERF3比Pdt-ERF3表达量高峰期推迟84 h。除168 hpi时Pnd-ERF3与Pdt-ERF3表达均有下降外,2个基因表达量在锈菌侵染的多个阶段均存在差异。根据拟南芥(Arabidopsis thaliana)同源基因预测Pdt-ERF3受丝裂原活化蛋白激酶MAPK6调控。本研究为进一步系统研究杨树ERF基因与抗性反应的调控机理及杨树抗病育种工作提供理论依据。

羟基积雪草酸对烧伤创面愈合及内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨羟基积雪草酸对小鼠烧烫伤模型以及过氧化氢(H2O2)诱导血管内皮细胞氧化损伤的保护作用和机制。方法:75只小鼠分为正常对照组及模型组、羟基积雪草酸低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组,每组15只,建立小鼠烧烫伤模型,观察药物对烧伤创面愈合的影响,检测皮肤组织中羟脯氨酸的含量;另采用H2O2体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤的方法,建立人脐静脉内皮细胞损伤模型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度羟基积雪草酸对内皮细胞增殖的影响,并检测LDH、MDA、GSH含量,以及细胞凋亡率观察药物对过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的保护作用。结果:羟基积雪草酸高剂量组小鼠的伤口面积显著缩小,皮肤组织中羟脯氨酸的含量显著升高;H2O2(500μmol/L)引起HUVEC活力下降,LDH外漏增加,胞内MDA含量升高、GSH含量下降,TUNEL检测发现H2O2处理组细胞凋亡率显著升高。羟基积雪草酸(5、10、20μmol/L)能浓度依赖性抑制脂质过氧化,上调细胞活力;显著改善H2O2引起的内皮细胞凋亡现象,降低胞内Caspase-3活性。结论:羟基积雪草酸对烧伤愈合具有显著的促进作用,为积雪草治疗烧烫伤的主要活性成分之一,其作用机制与抑制脂质过氧化、促进胶原合成和抑制凋亡有关。

欧美杨再生体系的建立

黑杨派的杂交后代欧美杨(Populus nigra×P.deltoides)在杨树叶锈病研究领域具有重要价值。本研究以叶柄、叶片和茎段作为外植体进行组织培养,构建欧美杨再生体系。分别优化了初代培养、继代培养、抽茎培养和生根培养的培养条件。正交试验结果表明,最优初代培养培养基配方:MS+0.5 mg/L6-BA+0.05 mg/L NAA。最优继代培养培养基配方:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA。最优抽茎培养培养基配方:MS+0.1 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA。最优生根培养培养基配方:1/2MS+0.25 mg/L NAA+20 g/L蔗糖。以上培养基培养分别得到叶柄分化率为86.7%,不定芽诱导率为96.7%,抽茎率为91.7%,生根率为85%。再生苗移栽成活率为91.5%。所获得的欧美杨再生苗扩繁简便,可用于杨树抗叶锈病相关基因转化等研究。欧美杨再生体系为揭示欧美杨的感病机理提供物质基础。

‘大白谷’CC-NBS-LRR蛋白编码基因抗干尖线虫侵染时空表达研究

为深入探究‘大白谷’(Oryza sativa L.ssp.Indica)感病的分子机理,以及抗病基因在发病过程中所起的作用,克隆了‘大白谷’CC-NBS-LRR蛋白编码基因Os11g RGA8,对Os11g RGA8基因进行了生物信息学分析,并对其在水稻抗干尖线虫侵染过程中的功能进行了研究。Os11g RGA8基因位于11号染色体,其编码蛋白含有733个氨基酸,等电点为5.99,相对分子质量为84355.07。序列分析表明该氨基酸序列含有RX-CC、AAA_22、NBS和LRR_4这4个结构域,Os11g RGA8基因编码抗病蛋白属于CC-NBSLRR抗病蛋白家族。Q-PCR结果显示,接种水稻干尖线虫SAMN02420038的籼型常规稻‘大白谷’,与CK组‘大白谷’相比,Os11g RGA8基因表达量表现为上调,且24 h内上调增幅较缓,48 h时上调增幅突然上涨,72 h时上调增幅又出现下降,表明该基因参与‘大白谷’天然免疫反应过程,在水稻干尖线虫侵染过程中起到一定抗性作用。

基于收益共享契约的三级供应链如何应对突发事件

本文针对一个由供应商-制造商-零售商构成的三级供应链,在考虑随机性需求基础上,探讨突发事件对三级供应链的影响,同时改进了协调供应链的收益共享契约,使之能够应对突发事件。

贝西滑刃线虫糖苷水解酶16基因克隆及功能

为研究线虫寄生相关基因,基于贝西滑刃线虫转录组高通量测序数据,筛选并克隆了贝西滑刃线虫糖苷水解酶16基因,对该基因进行了功能分析;应用Mega 5.05选用WAG模型所构建的最大似然树进行分析比对;通过原位杂交,定位了糖苷水解酶16基因在线虫体内的表达部位,分析了糖苷水解酶蛋白的三维空间结构。结果表明:贝西滑刃线虫糖苷水解酶16基因与真菌亲缘关系近,是通过基因平移解说的一个重要佐证。

α-烯醇化酶基因干扰表达对籽鹅卵泡颗粒细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究α-烯醇化酶(ENO1)基因干扰表达对籽鹅卵泡颗粒细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:原代培养籽鹅F1级卵泡颗粒细胞(复合培养),将ENO1基因干扰表达重组质粒转染至籽鹅卵泡颗粒细胞。实验分为四组:ENO1干扰表达组(RNAi)、无关序列干扰组(NC)、培养液组(Control)、转染试剂组(Lip)。流式细胞术检测干扰组和对照各组的凋亡率、细胞周期时相性。结果:ENO1基因干扰表达使籽鹅卵泡颗粒细胞增殖速度变慢,凋亡率增加,G2/M期颗粒细胞比例增高。结论:ENO1基因干扰表达可使籽鹅卵泡颗粒细胞周期发生G2/M期阻滞,诱导细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。

长链非编码RNA生物学特性和功能研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是近年来备受关注的长度大于200 nt的内源性非蛋白编码RNA。大量资料显示其参与了哺乳动物许多重要生理、病理过程,并在其中起到非常重要的生物学作用。主要针对lncRNA的基本概念、生物学特性及主要生物学功能进行综述,为lncRNA的相关研究提供参考。

基于光谱信息的空间碎片材料种类数目估计方法仿真研究

在观测空间碎片时,受碎片结构紧凑、组成材料复杂,以及地基观测设备空间分辨率的限制,同一像元中通常会包含多种材料的信息,即产生"混合像元"。目前国内外对混合像元的研究主要集中在获取混合像元的纯物质光谱以及丰度上,往往忽略了高光谱数据中纯物质个数的确定对于没有任何先验信息的混合像元分析是至关重要的。如果估计的材料数目过少,将会导致解混出的材料光谱仍然是混合状态的像元;如果估计的材料数目过多,提取出的端元中将很有可能包含冗余噪声成分。基于光谱线性混合模型,提出一种改进的p范数纯像元辨识算法。主要利用光谱数据具有近似于低维流形的特性,首先采用正交投影的原理,将提取的端元扩充至正交投影算子中,然后分析投影后各个像元向量的p范数值,最终将p范数值高于阈值的向量个数作为材料种类数目。对实测碎片常用材料和美国地质勘测局数据库分别进行仿真实验,实验结果表明:提出的方法在估计材料种类数目的同时,还能提取出目标所包含的材料光谱,这在一定程度上提高混合光谱分解过程的自动化程度;相对于现有的一些主流算法,该方法有较强的鲁棒性,并且在信噪比不高的情况下仍能正确地估计空间碎片材料种类数目。

lncRNA NONRATT021477.2对氧化应激条件下BRL细胞增殖和凋亡的影响

以H_(2)O_(2)诱导BRL细胞建立氧化应激型模,通过ROS和MDA试剂盒检测氧化应激的发生状态。过表达和干扰表达lncRNA 77.2后,通过流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖情况。结果显示,过表达lncRNA77.2后,BRL细胞内ROS和MDA含量均极显著下降(P<0.01),细胞增殖能力增强(P<0.01),细胞凋亡率下降(P<0.01);而干扰表达lncRNA77.2后,细胞内ROS显著升高(P<0.05),MDA含量极显著升高(P<0.01),细胞增殖能力下降(P<0.01),细胞凋亡率上升(P<0.01)。结果表明,lncRNA 77.2可作为抗氧化调控因子通过抑制凋亡和氧化损伤对大鼠肝细胞起到一定的保护作用。

高倍率大视场细胞内镜成像系统研究

细胞内镜是一种具有超高放大倍率的内窥镜,能够在体内直接观察到染色的细胞核,对早期癌症的诊断具有重要意义,目前仅日本奥林巴斯公司拥有相应的技术。细胞内镜的核心是其头端部的光学成像系统,现有的细胞内镜成像系统在高倍率成像时视场范围较小,检查效率低。本文提出了一种高倍率大视场细胞内镜成像系统,采用6片球面系统实现了高性能低成本的大视场变焦内窥物镜,并基于此搭建了细胞内镜成像系统。实验结果表明:该系统的物方分辨率达到了181.0 lp/mm,放大倍数约为500倍,显微成像视场范围显著增大至1200μm×670μm,是现有细胞内镜成像系统的2倍以上。在此基础上,采用深度学习方法为系统增添了细胞核分割功能,分割准确度达到了96.58%,验证了所搭建的成像系统对细胞核形态细节的成像能力。

急性冷刺激对大鼠骨骼肌和7个内脏器官的组织结构影响

冷刺激是北方寒区常见的应激原,可对机体多个内脏器官组织学结构产生影响。本试验采用病理学观察方法,研究急性冷刺激处理对大鼠骨骼肌和7个内脏器官的组织结构影响。将10只Wistar大鼠随机均分为对照组和冷刺激组。对照组在(24.0±0.1)℃温度下饲养;冷应激温度为(4.0±0.1)℃,冷刺激时间为12h。冷刺激后,采集两组大鼠骨骼肌、心脏、脾脏、肝脏、肾脏、胃、十二指肠及肺脏8种样品,制作成组织切片,镜下观察。结果显示,急性冷刺激对大鼠骨骼肌、心肌、胃壁黏膜及肾脏均有不同程度的损伤;肝脏、十二指肠组织结构未见病理变化;脾脏可见淋巴小结体积增大,反应性增生。结果表明,急性冷应激可造成大鼠机体骨骼肌及内脏损伤,但免疫功能增强。

lncRNA生物学功能研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是缺乏开放阅读框架,长度约为200 nt～100 000 bp,且不编码蛋白质的转录本。lncRNA的表达受到发育调控,具有组织及细胞特异性。目前认为,lncRNA执行重要的生物学功能,涉及转录调控、细胞内物质运输和染色体重塑,参与细胞分化、生长发育、应激反应和疾病发生发展等多种生物学进程。本文在介绍lncRNA的特征、分类、调控机制的基础上,重点对lncRNA的生物学功能进行综述。

大鼠肝细胞系lncRNA NONRATT021477.2过表达及干扰表达条件优化

试验分别以带有目的基因的重组慢病毒质粒(pSllV-CMV-zsGreen-puro-lncRNA77.2)和3条反义核苷酸质粒转染BRL细胞,根据绿色荧光蛋白(GFP)表达情况评估转染效率;优化过表达慢病毒的最佳感染复数,并通过嘌呤霉素筛选以得到高表达稳转株。应用荧光定量PCR方法检测lncRNA NONRATT021477.2的表达量,验证过表达效果及初步确定干扰效率最高的质粒,并进一步优化ASO质粒的转染浓度和时间曲线。结果显示,重组慢病毒以感染复数(MOI)=4转染BRL细胞48 h时,lncRNA NONRATT021477.2表达量比空病毒NC组极显著升高(P<0.01),过表达效果为17倍,成功获得高表达稳转株;并且确定了干扰质粒ASO-2以250 nmol/L浓度转染BRL细胞24 h时,对靶基因水平的干扰效率最高,为78%。本试验建立了lncRNA NONRATT021477.2过表达和干扰表达质粒转染BRL细胞的最佳条件,为后续深入研究lncRNA NONRATT021477.2的生物学功能奠定基础。