高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中10种类固醇类激素残留

建立猪肉中类固醇类激素残留高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。样品经甲醇提取,固相萃取柱净化后采用LC-MS/MS进行检测分析;并对样品前处理条件和质谱参数进行研究。结果表明:这些激素物质的线性范围均为0.5～100μg/kg;低、中、高3种加标水平的加标回收率为71%～89%;最低检出限为0.2～2μg/kg。本方法快速简便、灵敏度高、选择性好、测定结果令人满意,可在各食品检测机构推广应用。

液质法测定猪肉中十种β-兴奋剂残留

建立猪肉中β-兴奋剂多残留的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。样品经酸性乙腈提取,固相萃取柱净化后采用LC-MS/MS进行检测分析,对样品前处理条件和质谱参数进行研究。结果表明:这些激素的物质的线性范围均为0.5～100μg/kg;低、中、高3种加标水平回收率为72%～87%;最低检出限为0.1～1μg/kg。本方法快速简便、灵敏度高、选择性好,测定结果令人满意,可在各食品检测机构推广应用。

液质法测定动物源性食品中肾上腺素、多巴胺

为同时测定动物源性食品中肾上腺素、多巴胺的含量,建立HPLC-MS-MS检测方法。该两种物质的线性范围均为3～1500μg/kg。低、中、高三种浓度加标回收率均为90%～101%;检出限分别为肾上腺素1μg/kg、多巴胺3μg/kg。本方法快速简便,灵敏度高,选择性好,测定结果令人满意,可在各食品检测机构推广应用。

液质法测定猪肉中八种糖皮质激素残留

建立猪肉中糖皮质激素多残留的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。样品经甲醇提取,固相萃取柱净化后采用LC-MS/MS进行检测分析。对样品前处理条件和质谱参数进行研究,这些激素的物质的线性范围均为0.5～100μg/kg。低、中、高3种质量浓度加标回收率均为78%～101%;最低检出限为0.2～2μg/kg。该方法快速简便,灵敏度高,选择性好,测定结果令人满意,可在各食品检测机构推广应用。

抗生素AGPM高产菌株选育及其蛋白差异分析

从土壤中分离得到一株能产生新型抗生素AGPM的藤黄灰链霉菌菌株.利用紫外线和硫酸二乙酯对新型抗生素AGPM产生菌藤黄灰链霉菌099菌株进行了联合诱变处理.最终得到了一株高产菌株TD0551,其抗生素AGPM产量可达到16.45mg/L,为出发菌株的2.1倍.应用蛋白质二维凝胶电泳技术分析了藤黄灰链霉菌的蛋白质组,比较了高产菌株与低产菌株在分泌AGPM过程中的蛋白质组差异.结果表明,在高产菌株的蛋白样品中有11个特异点,而在低产菌株的蛋白样品中有3个特异点,这些蛋白特异点可能与新型抗生素AGPM的合成有关.

多烯紫杉醇注射液细菌内毒素检查方法探讨

目的 :通过试验探讨采用干扰初筛法检测多烯紫杉醇注射液中细菌内毒素方法的可行性。方法 :运用干扰初筛法对供试品进行干扰试验和内毒素限量检查。结果 :选用 0 .12 5EU·ml-1以上灵敏度的鲎试剂可以消除供试品对内毒素检查的干扰 ,并且干扰初筛试验法一步就可以确定出多烯紫杉醇注射液对内毒素检查无干扰的有效稀释范围以及所需的鲎试剂灵敏度范围。结论 :采用干扰初筛法检查多烯紫杉醇注射液中细菌内毒素不但可以大大减少通常内毒素检查中的工作量 ,而且切实可行。

高效液相色谱法测定肉制品中的着色剂

采用高效液相色谱法检测肉制品中的着色剂,结果表明:在检测范围内,采用该方法有着良好的线性关系(r>0.999);回收率可达到88.5%～99.6%。采用高效液相色谱法可有效检测肉制品中常用着色剂的含量,具有重现性好、快速、准确的特点。

肉制品中苯甲酸、山梨酸检测的前处理方法研究

依据苯甲酸、山梨酸易溶于水这一特性,用蒸馏水作为提取剂,将样品中的苯甲酸、山梨酸提取出来,然后选用适宜的蛋白沉淀剂去除提取液中的大量水溶性蛋白质。该方法经济、方便、快捷,是检测肉制品中苯甲酸、山梨酸较为理想的前处理方法。

肉制品中苯甲酸、山梨酸测定方法的研究

采用高效液相色谱法可以同时完成苯甲酸、山梨酸的测定。色谱条件:流动相为甲醇∶乙酸铵=7∶93,流速1.0mL/min,于230nm波长处同时测定肉制品中苯甲酸、山梨酸。因肉制品成分复杂,在苯甲酸出峰处干扰峰多,非常容易引起误判,所以采用改变流动相pH值的方法来建立苯甲酸、山梨酸的确认方法。该法的回收率大于90%,采用气-质联机确认,二者结果一致。本方法也同样适用于其它复杂食品的测定。

抗生素AGPM发酵过程中蛋白质表达差异的研究

由土壤中筛选到一能产生新型抗肿瘤抗生素AGPM的藤黄灰链霉菌株 ,应用蛋白质双向电泳方法 ,比较了藤黄灰链霉菌在发酵 2 4h与 72h蛋白质表达的差异 ,发现在发酵 72h有17个蛋白质差异点出现 ,此外还发现一些蛋白质的含量明显高于 2 4h的同种蛋白含量 。

肉类加工废水生物处理微生物菌种的分离筛选

以肉类加工废水为被处理对象,从肉类加工废水处理装置取得活性污泥,经过驯化、分离,以对肉类加工废水中的COD降解率为主要指标筛选得到18个菌株,分别编号为BA1～18,测试结果表明这18株菌对肉类加工废水的COD均有较好的去除率初步分类鉴定:其中BA2、BA6、BA13属于芽孢杆菌属;BA15、BA16、BA17、BA18属于放线菌目;另外几株菌种为假单胞菌属。

液质联用检测鱼肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留量

建立同时测定鱼肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的液质联用检测方法(HPLC-MS/MS)。样品采用碱性乙酸乙酯提取,正己烷脱脂,电喷雾离子源正负模式切换,多反应监测(MRM),内标法定量。检出限分别为氟苯尼考1μg/kg,氟苯尼考胺5μg/kg。低、中、高3水平的加标回收率在87.0%～110.4%之间,相对标准偏差均小于6.2%。该方法前处理简便快速,分s析速度快,灵敏度高。

响应面法优化植物乳杆菌冷冻干燥保护剂配方的研究

本实验应用二水平部分因子设计和响应面中心组合设计联用的方法筛选并优化了植物乳杆菌冷冻干燥的保护剂配方。实验结果表明,众多保护剂当中脱脂乳、海藻糖、硫酸锰的作用最为突出,能够显著提高细胞对冷冻和干燥的环境的耐受能力。以冻干后的细胞存活率为响应目标,响应面法优化的结果为:脱脂乳3.34%、海藻糖1.85%、硫酸锰0.25%。用此配方保护剂冻干样品时,能使细胞存活率达到96.8%±1.3%,与理论预测值较为接近。

新型水蛭素嵌合抗栓剂的构建表达与功能研究

水蛭素(hirudin,HV)作为新一代抗凝剂,是目前已知最强的天然凝血酶抑制剂,并有望在临床上完全取代肝素。虽然水蛭素有许多优点,但出血倾向是其在临床应用上的主要副作用,尚没有好的解决办法。针对水蛭素在临床应用中所出现的这个问题,依据血栓形成的生理生化机制,构建出了含FXa识别序列水蛭素嵌合抗栓剂,来降低水蛭素在非血栓部位的活性从而减小出血的危险。小鼠尾部血栓模型实验表明,此新型嵌合抗栓剂在不减少水蛭素抗凝血活性的同时, 又大幅度地降低出血副作用,具有非常重要的临床意义。

新型抗生素AGPM产生菌藤黄灰链霉菌的诱变育种

从土壤中分离得到一株藤黄灰链霉菌的新菌株 0 99,该菌株能产生一种具有显著抗肿瘤活性的新型抗生素AGPM。产生菌经紫外线单因子诱变、紫外线加氯化锂 (LiCl)复合诱变等两种诱变方式诱变处理后 ,其AGPM产量达到了 1 8 7μg/mL ,较出发菌株提高了 1 2倍。研究发现最优的紫外辐射时间和氯化锂浓度分别是 30～ 6 0s和 0 0 5～ 0 0 9mol/L ,并且由于氯化锂的协同效应 ,菌株在经氯化锂处理后 ,对紫外线的敏感性明显增强了。 30L发酵罐发酵试验表明 ,利用高产突变株发酵 ,AGPM产量能达到 1 8 5 μg/mL ;而利用出发菌株发酵 ,AGPM产量仅为 8 5 μg/mL。

抗生素AGPM生物合成途径的初步研究

采用前体添加实验法、静息细胞培养法以及酶抑制剂法对藤黄灰链霉菌中抗生素AG PM生物合成途径进行了初步探讨。研究表明能转化成聚酮合成所需活性前体的氨基酸如异亮氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、谷氨酸等以及短链脂肪酸乙酸、丙酸、丁酸盐对抗生素AGPM合成均有明显促进作用 ;另外 ,在培养基中添加脂肪酸和聚酮生物合成途径的专一性抑制剂浅蓝菌素 (2 5μg mL)或脂肪酸合成抑制剂碘乙酰胺 (0 5mmol L)时 ,菌体生长不受影响 ,而抗生素AGPM合成受到强烈抑制 ,分别为对照的 35 3 %和 2 6 2 % ;当碘乙酰胺的浓度为 1mmol L时 ,抗生素AGPM合成几乎完全受到抑制。由此初步推断抗生素AGPM是由聚酮途径合成。

过氧化氢作用下东北红豆杉悬浮培养细胞中蛋白表达差异的研究

东北红豆杉悬浮培养体系中加入一定浓度的过氧化氢 ,染色结果表明 ,过氧化氢可以诱导植物细胞发生过敏反应。应用蛋白质双向凝胶电泳技术 ,比较过氧化氢处理细胞与正常细胞的蛋白质组差异 ,分析过氧化氢对东北红豆杉细胞蛋白质表达的影响。结果表明 ,过氧化氢 (3.5mmol/L)处理 4 8h后的样品中有 12个新增的差异蛋白点 ,而在对照中有 1个特异蛋白点。

气相色谱-质谱法测定动物性食品中三种β-激动剂的残留量

建立了用气相色谱-质谱同时测定动物性食品中克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的检测方法。样品用乙酸胺缓冲液匀浆,加入β-葡萄糖苷酸酶水解,用异丙醇-乙酸乙酯(40:60)萃取,有机相浓缩,经LC-SCX固相萃取柱进行分离,用4%氨化甲醇洗脱,洗脱液氮气吹干后,经N、O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后于气质联用仪上进行测定。检测采用选择性离子监控模式(SIM),以特征离子克伦特罗(86,262,243)、沙丁胺醇(86,369,440)和莱克多巴胺(250,267,502)定性,以试样峰(m/z86,m/z369,m/z250)的峰面积外标法定量。本方法检出限为克伦特罗和沙丁胺醇0.5ug/kg,莱克多巴胺2ug/kg;3种组分的线性相关系数均大于0.99。该方法的回收率为75%-98%,相对标准偏差为5%-14%。

反相高效液相色谱法测定抗生素AGPM发酵液中的主要成分

主要探讨了高效液相色谱法(HPLC)测定新型抗生素AGPM发酵液中主要成分的可行性,优化了反相高效液相色谱法分析发酵液组分的色谱条件。在WatersTMNova PakR ○C18色谱柱上,以甲醇 0 01mol/L乙酸铵溶液(pH5 20)为流动相,其中甲醇的体积分数按线性梯度方式在60min内从30%升至50%,流动相流速为1 0mL/min,在330nm处进行紫外检测,发酵液中各主要组分均能很好地分离。采用该方法对AGPM发酵液中5种主要组分的线性范围、检出限、相对标准偏差和回收率分析考察,结果表明其灵敏度高、定量准确、重现性好,适合于发酵液这种复杂体系中AGPM等主要组分的分离测定。

抗生素AGPM生物合成的代谢调控研究

探讨了葡萄糖、铵离子及磷酸盐对抗生素AGPM生物合成的调控作用和机理。结果表明当葡萄糖、铵离子和磷酸盐浓度分别大于20 gL-1、20mmolL-1和25mmolL-1时,对抗生素AGPM合成均产生抑制作用。加入葡萄糖衍生物进一步证明葡萄糖的调控作用主要是通过其磷酸化过程来实现的;而对比分析不同铵离子浓度下细胞内酶活力则发现铵离子抑制糖代谢中的EMP途径和HMP途径有关酶,却刺激TCA循环关键酶;若培养基存在高浓度的磷酸盐时,胞内的6-磷酸葡萄糖会大量积累,说明糖进一步代谢受阻从而抑制抗生素合成。上述结果表明抗生素AGPM形成与营养组分浓度密切相关,而葡萄糖、铵离子和磷酸盐对其合成的调控主要是通过调节初级代谢控制抗生素合成前体浓度来达到调控目的的。