粉尘螨HSP16-1原核表达体系构建与温度应激响应功能鉴定

目的建立原核表达体系,在蛋白水平确认粉尘螨HSP16-1蛋白的温度应激响应功能。方法基于前期RNA-seq获得的粉尘螨HSP16-1基因序列,设计特异性引物,PCR扩增克隆测序;利用生物信息学软件,分析理化性质,预测亚细胞定位和三维结构;通过构建p ET32a/HSP16-1原核表达质粒,转化大肠杆菌感受态细胞BL21;采用1 mmol/L IPTG在16、28和37℃三个温度诱导HSP16-1重组蛋白表达,分别在2、4、6和8 h取样进行SDS-PAGE分析;绘制热胁迫和冷胁迫下重组菌与空载菌生长曲线。结果测序获得粉尘螨HSP16-1完整CDS为462 bp,编码153个氨基酸;BLAST比对显示粉尘螨与近缘物种屋尘螨核苷酸和氨基酸序列相似度分别为84.63%和87.58%;亚细胞定位在细胞核;保守区预测含有α晶体HSP23超家族保守区。菌落PCR及双酶切鉴定p ET32a/HSP16-1重组质粒构建成功。SDS-PAGE分析显示,HSP16-1蛋白被成功诱导表达,37℃诱导6 h是最佳诱导条件。细菌生长曲线显示,p ET32a/HSP16-1重组菌在热胁迫下的生长均优于p ET32a空载菌,而冷胁迫下则相反,空载菌生长要优于重组菌。结论粉尘螨HSP16-1蛋白仅在热胁迫下发挥应激响应功能,而在冷胁迫未表现出相似的功能。

单细胞转录组测序在糖尿病视网膜病变中的应用

糖尿病视网膜病变(DR)是致工作人群眼盲的首位病因,发病机制错综复杂,尚未阐明。单细胞转录组测序(scRNA-seq)通过深入分析细胞异质性、功能变化及相互作用,为在单细胞分辨率上探讨DR发病机制提供了有力工具。现笔者对新兴的scRNA-seq技术及其在DR中的应用,包括揭示DR的细胞类型和基因表达特征、解析DR发病机制、挖掘新的诊疗靶点和生物标志物的研究等进行综述。