姜黄素通过Wnt2/β-catenin通路逆转食管癌Eca-109/VCR细胞多药耐药性研究

目的研究姜黄素(curcumin,Cur)对人食管癌耐药细胞株Eca-109/VCR多药耐药的逆转作用,并探讨其可能的逆转机制。方法 CCK-8法检测不同浓度Cur和VCR对Eca-109/VCR细胞增殖的影响,以及Cur(20μmol·L^(-1))对Eca-109/VCR细胞多药耐药的逆转作用;FCM检测细胞凋亡率;ELISA法检测P-gp蛋白的表达水平;实时荧光定量PCR分析Wnt2、β-catenin mRNA的相对表达量;Western blot检测Wnt2、β-catenin、MMP-2、HMGB1的蛋白表达水平。结果随着Cur浓度的增加,细胞抑制率逐渐升高,呈剂量依赖性。Cur(20μmol·L^(-1))与不同浓度VCR联合作用可明显提高细胞增殖抑制率,逆转倍数为3.49。Cur(20μmol·L^(-1))与VCR(2.0 mg·L^(-1))联合作用可明显提高细胞凋亡率,降低P-gp蛋白含量,下调Wnt2、β-catenin mRNA的相对表达,并抑制Wnt2、β-catenin、MMP-2、HMGB1蛋白的表达。结论 Cur具有逆转食管癌细胞多药耐药的作用,其作用机制可能与下调Wnt2、β-catenin的表达,抑制Wnt2/β-catenin通路活性,以及下调侵袭相关蛋白MMP-2、HMGB1的表达有关。

姜黄素通过抑制Notch1信号通路逆转人食管癌Eca-109/VCR细胞对长春新碱的耐药性

目的:研究姜黄素(curcumin,Cur)对人食管癌Eca-109/长春新碱(vincristine,VCR)细胞耐药性的逆转作用,并探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测不同浓度的Cur对Eca-109/VCR细胞增殖的影响,以及Cur浓度为25μmol/L时对Eca-109/VCR细胞耐药性的逆转作用。将Cur(25μmol/L)、VCR(2μg/mL)单独及联合作用于Eca-109/VCR细胞24 h后,分别采用FCM法和Hoechst 33258荧光染色法检测对细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR法检测Eca-109/VCR细胞中Notch1、Jagged1和发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split 1,Hes1)mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测Eca-109/VCR细胞中Notch1、Jagged1、Hes1及P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达水平。结果:25μmol/L的Cur作用于Eca-109/VCR细胞24 h后,细胞的增殖抑制率为(8.82±0.80)%;Cur(25μmol/L)与不同浓度VCR联合作用后,VCR对Eca-109/VCR细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))由(7.70±0.63)μg/mL下降为(2.55±0.12)μg/mL,耐药逆转倍数为3.02倍。Cur(25μmol/L)单药、VCR(2μg/mL)单药以及Cur(25μmol/L)联合VCR(2μg/mL)作用于Eca-109/VCR细胞24 h后,FCM法和Hoechst 33258荧光染色检测结果均显示,Cur联合VCR组细胞的凋亡率均明显高于Cur单药组和VCR单药组(P值均<0.05);Cur联合VCR组细胞中Notch1、Jagged1和Hes1 mRNA的表达水平较Cur单药组和VCR单药组明显下调(P值均<0.01);Notch1、Jagged1、Hes1及P-gp蛋白的表达水平亦均明显下调(P值均<0.05)。结论:Cur能明显逆转人食管癌VCR耐药细胞株Eca-109/VCR对VCR的耐药性,其机制可能是通过抑制Notch1信号通路和降低P-gp的表达及功能而实现的。

姜黄素逆转食管癌Eca-109/VCR细胞耐药性的研究

目的探讨姜黄素(Cur)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路对人食管癌耐药Eca-109/VCR细胞耐药的逆转作用。方法实验分为空白组、实验A组、实验B组、联合组和低、中、高剂量对照组。空白组给予不含药物的完全培养基进行培养;实验A组给予含20μmol·L^-1 Cur的完全培养基进行培养;实验B组给予含2μg·mL^-1长春新碱(VCR)的完全培养基进行培养;联合组给予含20μmol·L^-1 Cur和2μg·mL^-1VCR的完全培养基进行培养;低、中、高剂量对照组分别给予含10,20和40μmol·mL^-1 SB203580的完全培养基进行培养。干预24 h后,用蛋白质印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、切除修复交叉互补蛋白1(ERCC1)和P糖蛋白(P-gp)的表达情况。结果实验A组、实验B组、联合组和低、高剂量对照组的p38MAPK蛋白灰度值分别为1.94×10^4±2927.88,2.09×10^4±651.32,1.50×10^4±1101.53,1.99×10^4±1520.01和1.95×10^4±1875.74,p-p38MAPK蛋白灰度值分别为1.56×10^4±1829.24,1.78×10^4±1718.27,7049.47±1609.40,1.56×10^4±1178.13和4802.11±1842.59,ERCC1蛋白灰度值分别为1.79×10^4±1180.51,1.98×10^4±1245.39,1.34×10^4±1151.07,1.45×10^4±1273.49和6475.16±1293.79,P-gp蛋白灰度值分别为1.42×10^4±996.42,1.64×10^4±1349.59,9614.54±664.98,1.28×10^4±1164.95和6793.34±911.56。实验A组、实验B组和联合组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、高剂量对照组的p-p38MAPK、ERCC1和P-gp蛋白表达量与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);联合组的上述指标与实验B组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论有Cur逆转食管癌细胞多药耐药的作用可能与下调p38MAPK通路相关的p38MAPK、p-p38MAPK、ERCC1和P-gp蛋白表达有关。