β-烟酰胺单核苷酸及其在维持基因组稳态中的研究进展

β-烟酰胺单核苷酸(NMN)是辅酶Ⅰ烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))的前体,其主要通过NAD^(+)在细胞生命过程中发挥关键作用,包括DNA损伤修复信号通路、氧化还原反应和代谢反应等。补充NMN提高细胞内NAD^(+)水平以增强DNA损伤修复,已成为国内外研究的焦点。该文综述了NMN在延缓衰老、治疗疾病、维持基因组稳定性及细胞稳态方面的最新研究进展,分析了其提升宿主DNA损伤修复能力的作用机制,并对补充NMN的潜在风险进行探讨,为后续的NMN相关科学研究提供参考。

四妙勇安汤通过MEK1/2-ErK1/2途径改善尿酸钠诱导大鼠痛风性关节炎的作用

目的探讨四妙勇安汤对尿酸钠诱导的痛风性关节炎大鼠的作用机制。方法运用网络药理学方法预测四妙勇安汤干预痛风性关节炎的靶点,构建“成分-靶点-通路”关系网络。将48只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱(阳性对照,0.0003 g·kg^(-1))组及四妙勇安汤低、中、高剂量(6.075、12.150、24.300 g·kg^(-1))组,每组8只,预防性ig给药,每天1次,持续7 d,ig第3天,除了对照组,构建痛风性关节炎大鼠模型。测量并计算大鼠踝关节肿胀度,HE染色检测大鼠踝关节滑膜组织病理学改变;ELISA试剂盒法检测各组大鼠血清中炎症因子白细胞介素(IL)-17A、IL-17F、环氧化酶-2(COX-2)、趋化因子配体2(CXCL2)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF)-α的水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测关节组织中MEK1/2-ErK1/2途径基因mRNA和蛋白表达水平。结果网络药理学结果显示,AKT1、ALB、TNF、HSP90AA1、EGFR、SRC、VEGFA、CCND1、HRAS、MAPK3、MAP2K1可能是四妙勇安汤治疗痛风性关节炎的关键靶点;β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素、木犀草素可能为治疗痛风性关节炎中较重要的有效成分;生物过程(BP)中富集基因主要与炎症反应、对细胞迁移的积极调节、对外部刺激反应的负调节、小分子代谢过程的调控等过程密切相关,细胞组分(CC)分析包括分泌颗粒、细胞质囊泡、内质网、高尔基、血小板颗粒等,分子功能(MF)中富集基因靠前的有转录因子结合、蛋白激酶活性、激酶调节活性等;KEGG代谢通路主要富集于MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路、Ras信号通路等。与模型组比较,四妙勇安汤高剂量可明显改善踝关节肿胀度(P<0.05);中、高剂量可缓解痛风性关节炎大鼠滑膜组织炎性浸润;中、高剂量组炎症因子水平显著降低(P<0.05、0.01);中、高剂量组MAPK3、MAP2K1的基因mRNA表达量显著下调(P<0.01);高剂量组ErK1/2、MEK1/2蛋白的表达量显著下调(P<0.01)。结论四妙勇安汤对痛风性关节炎大鼠具有治疗作用,其可能是通过抑制MAPK信号通路关键靶点ErK1/2、MEK1/2的表达,抑制下游炎症因子IL-17、TNF-α、IL-1β表达,减轻炎性反应,从而发挥对痛风性关节炎的治疗作用。

基于RAA-CRISPR的新型冠状病毒变异位点快速检测方法的建立

目的利用逆转录酶重组酶介导的等温扩增(RT-RAA)与成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR核酸检测技术结合,并基于“消线法”CRISPR试纸,建立一种针对新型冠状病毒基因变异位点的现场快速检测方法。方法通过对新型冠状病毒基因组HV69-70del变异位点的序列分析,设计并筛选可高效扩增该变异位点的RT-RAA引物,以及可特异性识别HV69-70del变异位点的crRNA。利用RT-RAA等温扩增技术对目标核酸进行扩增,通过CRISPR-Cas13a系统对扩增产物进行检测并用ERASE试纸进行结果判读。结果该法可特异性区分含有HV69-70del变异位点与未突变的新型冠状病毒核酸,同时在不依赖荧光检测设备的情况下,可在1 h内检出含量为1拷贝/μl的新型冠状病毒HV69-70del变异位点,且与其他7种病原体核酸无交叉反应。结论基于RT-RAA恒温扩增技术以及“消线法”CRISPR检测试纸建立了一种不依赖荧光检测设备的新型冠状病毒变异位点快速检测方法——RAA-CRISPR,为新型冠状病毒变异株的快速检测与鉴定提供了新方法。

基于CRISPR系统的新型冠状病毒核酸诊断方法研究进展

由新型冠状病毒所引起的新型冠状病毒肺炎疫情仍在持续,随着疫情的持续,新型冠状病毒基因组也在不断地发生变异和进化,产生了越来越多的新冠病毒变异株,给新冠疫情的防控带来了严重压力。针对新冠疫情的传播,通过核酸检测的方法来明确新型冠状病毒的感染,以及鉴别新型冠状病毒变异株极其重要,因此迫切需要开发现场化、高通量、自动化等不同应用场景的高灵敏、高特异检测方法来实现对新型冠状病毒及其变异株的诊断。目前,研究人员利用基于成簇的规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的核酸检测技术与侧向流层析试纸等多种技术相结合建立了多种针对的新型冠状病毒以及新冠变异株的诊断方法,以应用于不同的场景及地区。本文对基于CRISPR的新型冠状病毒诊断方法研究进展进行了总结。