基于GC-MS的棉子糖肠球菌代谢组学样品前处理方法的优化

探究不同的样品前处理方法对气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)法检测棉子糖肠球菌(Enterococcus raffinosus)胞内小分子代谢物种类和数量的影响。通过GC-MS分析测定不同的菌体破碎方式、菌体清洗次数以及冻融时间处理后的棉子糖肠球菌样品的胞内代谢物的种类。结果显示,液氮研磨较超声破碎更有利于胞内物质的释放;清洗3次既可清洗掉菌体表面的杂质,也能够防止胞内小分子代谢物外泄;冻融3 min更利于胞内代谢物的提取。通过优化后的前处理方法处理的样品,共检测出253种胞内小分子物质,经NIST 17.0数据库可精确匹配到8类共47种物质,其中酯类5种、烯烃类1种、烷烃类2种、醇类5种、酸类30种、糖类1种、苯环类2种、其他1种。

大肠杆菌异源表达的Indigoidine与靛蓝的稳定性比较

【背景】Indigoidine是一种来源于微生物的无毒天然蓝色素。【目的】比较Indigoidine和靛蓝的色素稳定性,进而评价Indigoidine的色素稳定性。【方法】构建重组菌株Escherichia coli DH5α/p28s异源表达Indigoidine,考察可见光、紫外线、pH、温度、氧化还原剂、食品添加剂和金属离子对其与商品级靛蓝色素稳定性的影响。【结果】以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,Indigoidine和靛蓝都对可见光、紫外线敏感;2种色素在pH1.0-11.0时稳定,强碱性pH对色素破坏作用很大;Indigoidine抗Vc还原能力强于靛蓝,氧化剂可不同程度地降低2种色素的保存率;2种色素热稳定性不佳,在75℃以下时Indigoidine的色素稳定性优于靛蓝;食品添加剂中的柠檬酸和苯甲酸分别对Indigoidine和靛蓝均具有显著的护色效果;对这2种色素,Ca^(2+)、Mg^(2+)均具有护色效果,Na^(+)、K^(+)、Li^(+)总体上没有明显的破坏作用,而Zn^(2+)、Al^(3+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)、Fe^(3+)则具有显著的破坏作用。【结论】Indigoidine色素稳定性明显优于靛蓝,具有广阔的开发应用前景。