miR-155在过氧化氢诱导晶状体上皮细胞氧化应激损伤中的作用及靶向SIRT1调控机制

目的探讨微小RNA(miR)-155对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤的作用及其调控沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)的机制。方法取对数生长期HLE-B3细胞株,分别于0、50、100、200、400、800μmol/L H_(2)O_(2)条件下培养24 h,采用MTT法检测细胞存活率,筛选构建氧化应激损伤模型的H_(2)O_(2)最佳作用浓度。将细胞分为6个组,其中空白对照组不作处理,模型对照组细胞于100μmol/L H_(2)O_(2)条件下培养,miR-155拟似物组、miR-155拟似物对照组、miR-155抑制剂组和miR-155抑制剂对照组细胞分别转染miR-155拟似物、miR-155拟似物对照、miR-155抑制剂、miR-155抑制剂对照并于100μmol/L H_(2)O_(2)条件下培养。各组细胞培养24 h,倒置显微镜下观察细胞形态;采用荧光定量PCR法检测细胞miR-155和SIRT1 mRNA相对表达量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测活性氧簇(ROS)含量;采用ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)浓度;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-155对SIRT1的靶向性;采用Western blot法检测细胞SIRT1、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸酶3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达。结果随H_(2)O_(2)浓度增加,细胞存活率逐渐降低,各不同浓度间细胞存活率比较差异均有统计学意义(均P<0.05),选取100μmol/L作为H_(2)O_(2)的实验浓度。空白对照组细胞贴壁生长良好;模型对照组细胞数量减少,部分存活细胞形态发生改变,边界模糊不清;miR-155拟似物组细胞数量少于模型对照组,细胞固有形态发生改变;miR-155抑制剂组细胞数量多于模型对照组,细胞生长状态良好。与模型对照组比较,miR-155拟似物组细胞miR-155相对表达量明显升高,SIRT1 mRNA相对表达量明显降低,细胞凋亡率、ROS含量和MDA浓度升高,SOD活性降低,SIRT1、bcl-2蛋白相对表达量及bcl-2/bax明显降低、bax、cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-155抑制剂组细胞miR-155相对表达量明显降低,SIRT1 mRNA相对表达量明显升高,细胞凋亡率、ROS含量、MDA浓度明显降低,SOD活性明显升高,SIRT1、bcl-2蛋白相对表达量及bcl-2/bax明显升高、bax、cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染miR-155拟似物细胞的野生型SIRT1相对荧光素酶活性为0.41±0.07,明显低于转染miR-155拟似物对照细胞的1.00±0.11,转染miR-155抑制剂细胞的野生型SIRT1相对荧光素酶活性为1.98±0.17,明显高于转染miR-155抑制剂对照细胞的1.00±0.12,差异均有统计学意义(t=7.838、8.157,均P<0.05);各转染细胞对突变型SIRT1相对荧光素酶活性无明显影响。结论miR-155参与H_(2)O_(2)诱导的LECs氧化损伤,其过表达可靶向抑制SIRT1表达,发挥细胞损伤作用。

青白联合术后前房注射曲安奈德对前葡萄膜炎的效果评价

目的研究青白联合术后前房注射曲安奈德对于前葡萄膜炎的治疗效果。方法选择山西省人民医院于2011年1月至2013年12月收治的172例前葡萄膜炎患者作为研究对象，利用随机数字表法均等分为观察组与对照组，前者给予青白联合术和曲安奈德进行联合治疗，后者给予青白联合术进行常规治疗，统计检测数据，评价两种不同治疗方法对于前葡萄膜炎患者的临床效果。结果采用青白联合术和曲安奈德进行联合治疗的86例患者中，显效58例（67．44％），有效12例（13．95％），无效6例（6．97％），总有效率为93．03％；采用青白联合术进行常规治疗的86例患者中，显效37例（43．02％），有效20例（23．25％），无效29例（33．72％），总有效率为66．28％。两组患者术后的眼压、视力和眼前节炎症分级差异也有统计学意义（P〈0．05）。结论青白联合术后前房注射曲安奈德能有效控制前葡萄膜炎患者的眼部炎症，能降低眼压和恢复视力，值得推广借鉴。