噬菌体展示技术的理论基础及其在感染性疾病防治中的应用

噬菌体展示技术是一种高通量研究基因功能、蛋白质表达及其相互作用的有效方法,具有与生物芯片一样的大量快速检测、发现并鉴定功能基因及蛋白质-蛋白质相互作用的优点。我们着重介绍噬菌体展示技术的种类、原理,及其在感染性疾病防治中的应用。

大规模噬菌体DNA测序样品制备方法的改进与应用

目的优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法,提高筛选效率。方法通过PCR扩增噬菌体环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入目的片段噬菌体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定,并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较。结果PCR扩增法和经典法制备的噬菌体DNA的测序成功率分别为92.73%、93.75%,差异无统计学意义(P>0.05);两种方法制备的同一个噬菌体克隆的DNA经测序鉴定显示测序结果一致;第一轮、第二轮和第三轮淘选产物的噬菌体克隆经PCR扩增和电泳鉴定,发现无插入目的片段的噬菌体克隆检出率逐轮增加分别为1.04%、4.17%和22.69%(P<0.01)。结论PCR扩增含插入目的片段噬菌体DNA的方法可使大规模噬菌体筛选和DNA测序更加方便、快捷、实用,值得推广。

内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定

目的:利用体内噬菌体展示技术筛选能与内毒素休克小鼠肝脏血管特异性结合的短肽。方法:尾静脉注射噬菌体环七肽库至内毒素休克小鼠体内,循环10min后,回收肝脏中的噬菌体。将回收的噬菌体扩增、纯化,并以此为起始物进行下一轮筛选。经过4轮筛选后,将所得文库与正常小鼠做一次差减筛选。随机挑取噬菌体单克隆进行测序,序列分析后,进行噬菌体的体内回输实验及免疫组化分析,验证所筛得噬菌体克隆的导向情况。结果:经过4轮体内筛选,肝脏中噬菌体回收率逐步提高,证明噬菌体文库在肝脏血管中得到有效富集。DNA测序后发现,10条序列中有5条为LTTWAPA,体内回输实验和免疫组化实验均证实表达该序列的噬菌体能有效地靶向于休克小鼠肝脏血管内皮细胞。结论:筛选到的短肽LTTWAPA能特异性结合于内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞,有可能对内毒素休克的治疗具有重要意义。