软枣猕猴桃EST-PCR体系建立及品种遗传关系

以25份软枣猕猴桃健康幼嫩叶片为材料,改良传统CTAB法提取高质量的基因组DNA,建立适合软枣猕猴桃的EST-SSR反应体系,即20μL反应体系:d NTPs(2.5 mmol·L^(-1))2μL,引物(10μmol·L^(-1))各1.5μL,DNA(50~100 ng·μL^(-1))1μL,Taq DNA聚合酶(5 U·μL^(-1))0.2μL,Mg Cl2(1.5 mmol·L^(-1))1.5μL,10×缓冲液2.5μL,加dd H2O至20μL;采用该体系对25份软枣猕猴桃进行遗传关系分析。结果可见:21对引物共扩增133条带,多态性位点百分率为96.2%;在遗传相似系数0.69处,25份种质资源分为2支,基本上是红肉和绿肉软枣猕猴桃各分1支,在遗传相似系数0.78处分为4支,遗传相似性最高的为LD133和LD241,珍玉2号和珍玉3号,佳绿和LD237。

传统奶酪中产转糖基活性β-半乳糖苷酶乳酸菌的筛选鉴定及其合成低聚半乳糖条件

分离筛选产转糖基活性β-半乳糖苷酶的乳酸菌新菌株,为酶法高效合成低聚半乳糖(galactooligosaccharides,GOS)提供新的酶源。以乳糖为唯一碳源,碳酸钙溶钙圈和添加5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal)的MRS培养基筛选平板进行初筛,以产酶菌株粗酶液催化乳糖反应产物的薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)分析复筛,从新疆伊犁地区牧民手工制作的奶酪样品中筛选产转糖基活性β-半乳糖苷酶的乳酸菌。结合其形态学、生理生化特征及16S rRNA序列同源性分析对产转糖基活性β-半乳糖苷酶菌株进行鉴定。单因素试验确定产酶条件和转糖基反应条件,TLC结合高效液相色谱分析转糖基反应产物各组分含量。筛选获得产转糖基活性β-半乳糖苷酶的菌株6株,其中Lactobacillus plantarum YLBGNL-S7所产β-半乳糖苷酶的转糖基活性最强。单因素试验结果表明,在温度50℃、pH 6.0、乳糖质量浓度300 mg/mL的条件下反应4 h,GOS得率可达质量分数43.40%,其中转移二糖和转移三糖质量分数分别为18.29%和12.95%。以上结果表明,L.plantarum YLBGNL-S7是一株产转糖基活性β-半乳糖苷酶的新菌株,在益生性GOS的合成领域具有应用前景。