高糖诱导人肾间质成纤维细胞c-met的表达及黄芪对其的调节作用

目的:体外研究高糖对人肾脏间质成纤维细胞c-met表达的影响,并观察黄芪药物血清对其的调节作用。方法:体外培养人肾脏间质成纤维细胞,按培养液不同分为正常对照组、高糖组和甘露醇组。于作用后6、12、24、48和96h,采用逆转录-聚合酶链反应方法检测c-met和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)mRNA表达,蛋白印迹分析检测c-met蛋白的表达。制备含药血清,将成纤维细胞分高糖组、对照血清组和10%黄芪含药血清组,作用24h和48h后,检测c-met蛋白和mRNA表达情况。结果:与正常对照组比较,高糖组细胞培养12h时c-met mRNA表达增加(P<0.05),24h达高峰(P<0.01),之后表达逐渐下降;高糖组细胞培养24h时,TGF-β1的表达开始增加(P<0.05),96h达到高峰(P<0.01)。与高糖组以及对照血清组比较,黄芪含药血清可使细胞c-met mRNA和蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05)。结论:高糖刺激早期诱导c-met表达,之后表达下降。黄芪可以通过诱导c-met表达延缓糖尿病肾病的进展。

高糖对肾小管上皮细胞胶原分泌和PAI-1合成的影响以及黄芪调控作用

目的:体外研究高糖刺激肾小管上皮细胞时PAI-1和细胞外主要基质成分Ⅳ型胶原的表达,以及黄芪延缓糖尿病肾病与其的相关性。方法:将小鼠肾小管上皮细胞培养于不同浓度葡萄糖中,不同时间段采用RT-PCR方法检测PAI-1 mRNA转录水平,Westhern blot检测蛋白的表达,ELISA方法检测Ⅳ型胶原的合成。随即用黄芪药物血清刺激细胞,观察二者的表达情况。结果:高浓度葡萄糖培养的细胞PAI-1表达升高,并呈现剂量时间依赖性。说明PAI-1表达与高糖作用存在相关性。同时高糖诱导Ⅳ型胶原的合成增加。黄芪含药血清可以显著抑制细胞表达PAI-1和Ⅳ型胶原。结论:高糖可诱导PAI-1表达,抑制细胞外基质成分降解。黄芪通过抑制Ⅳ型胶原的产生,降低细胞外基质的合成,起到抗纤维化作用,从而延缓糖尿病肾病的进展。

肝细胞生长因子抑制高糖诱导肾间质成纤维细胞胶原合成和转化生长因子-β_1的表达

目的:探讨重组人肝细胞生长因子(rhHGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的影响。 方法:体外培养肾间质成纤维细胞,在高糖环境下加入rhHGF,以酶联免疫吸附法检测培养上清中 型胶原浓度,RT-PCR检测细胞HGF和TGF-b1基因表达,Western blot方法检测TGF-b1蛋白合成。 结果:高糖预处理的细胞 型胶原合成增加(同正常对照组相比,P<0.01)。高糖作用早期HGF表达升高,随着作用时间延长,其分泌量下降,而TGF-b1出现持续高表达。此外,HGF可以抑制TGF-b1基因和蛋白表达,结果显示,加入HGF后,TGF-b1基因表达显著下降,表达量下降了50%,并且HGF以剂量依赖形式抑制TGF-b1表达,相关分析证实r = —0.8726,P<0.01。同时HGF对 型胶原合成产生抑制作用。 结论:高糖环境促进 型胶原合成和TGF-b1持续高表达。rhHGF可以部分抑制 型胶原和TGF-b1表达。

黄芪促进高糖环境下肾间质成纤维细胞表达肝细胞生长因子的作用

目的体外研究高糖刺激人肾脏间质成纤维细胞时肝细胞生长因子(HGF)表达,同时进一步观测了黄芪延缓糖尿病肾病进展是否与影响 HGF 表达相关。方法将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度葡萄糖中,分不同时间段采用 RT-PCR 方法检测 HGF mRNA 转录水平,ELISA 方法检测 HGF 蛋白分泌。之后用黄芪含药血清刺激细胞,观察 HGF 表达情况。结果高浓度葡萄糖培养的细胞早期就有 HGF 表达,之后表达逐渐下降。说明 HGF 表达与高糖作用存在相关性。结果进一步证实,黄芪含药血清可以显著刺激细胞表达 HGF。结论黄芪可以通过诱导 HGF 的产生,起到抗纤维化作用,从而延缓糖尿病肾病的进展。

HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用。方法 将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中,其中25 mmol/L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF,分别于不同时间段收集细胞,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。结果 高糖作用早期细胞增殖旺盛,随着高糖的持续刺激,细胞增殖发生停滞,同时细胞出现肥大。外源性加入HGF后,对高糖造成的细胞损伤具有修复作用。结论 高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞,出现肥大。HGF可以通过促进细胞增殖,抑制由于高糖诱导的细胞肥大。

高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物 (PAI - 1)在介导肾小管—间质损伤过程中的作用。 方法采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖 ,RT -PCR方法观察PAI- 1mRNA的表达。同时将细胞培养于 2 5mmol/L甘露醇中 ,观察高糖中渗透压所起的作用。 结果培养 2 4h后 ,高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖。与正常对照组相比 ,高糖可以增加PAI- 1的表达。甘露醇也抑制细胞增殖 ,同时对PAI- 1的表达产生作用。 结论高糖可抑制成纤维细胞增殖 ,刺激PAI- 1的表达。PAI- 1在糖尿病肾病肾小管—间质纤维化过程中 。

慢性肾脏病患者肾性贫血机制与治疗展望

慢性肾脏病(CKD)的并发症之一贫血发病率高且早,然而治疗达标率远远不足,不仅影响生活质量和工作效率,而且与患者的急性住院、死亡和心血管事件等不良结局相关[1]。因此,贫血的评估和治疗被认为是整个疾病阶段的CKD整体管理的关键内容之一。随着近年来肾脏病贫血领域新型治疗药物的不断出现,以及以脯氨酰羟化酶(PHD)为靶点的缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂(HIF-PHI)等各类新药的临床试验结果展现出的应用前景,我们对于CKD贫血发病机制,影响因素以及治疗方案的选择都有了新的认知。

Syndecans与肾脏疾病

Syndecans是一种蛋白聚糖 ,可与多种多肽类生长因子结合 ,并参与细胞外基质及细胞与细胞之间的粘附。综述多位学者的研究证明 。

黄芪对高糖环境下肾间质成纤维细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂的影响

目的:体外研究高糖刺激人肾间质成纤维细胞时纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的表达,以及黄芪延缓糖尿病肾病与其相关性。方法:将人肾间质成纤维细胞培养于不同浓度葡萄糖中,24 h 后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测 PAI-1 mRNA 转录水平,免疫组化方法检测 PAI-1蛋白的表达。随即用黄芪药物血清刺激细胞,观察 PAI-1表达情况。结果:高浓度葡萄糖培养的细胞 PAI-1表达升高,并呈现剂量和时间依赖性。说明 PAI-1表达与高糖作用存在相关性。同时等渗甘露醇也可以诱导 PAI-1表达。黄芪含药血清可以显著抑制细胞表达 PAI-1。结论:高糖可诱导 PAI-1表达,抑制细胞外基质成分降解。黄芪通过抑制 PAI-1的产生,起到抗纤维化作用,从而延缓糖尿病肾病的进展。

电针头穴配合语言训练治疗中风失语症的临床观察

将 60例中风失语症患者随机分为治疗组 3 0例 ,进行针刺配合语言训练 ;对照组 3 0例 ,进行语言训练治疗。采用《汉语失语症检查法》作为诊断和疗效判定依据 ,观察患者自发谈话、口语理解、复述、命名 4项基本言语功能及言语相关症状的变化。结果表明 ,治疗组病人的言语功能明显改善 ,优于对照组 (P <0 0 1 )。其中治疗组总有效率达到 93 3 % 。

中药莲必治(穿心莲内酯)注射液致急性肾衰竭的临床病理分析

目的:探讨中药莲必治(穿心莲内酯)注射液致急性肾衰竭(ARF)的临床特点.方法:对9例中药莲必治治疗相关的ARF患者、7例非莲必治药物过敏引起的ARF患者和3例氨基糖苷类致ARF患者的临床与病理进行回顾性比较分析.结果:(1)9例中药莲必治注射液治疗相关的ARF病例中,年龄22岁～66岁,平均(38±12)岁;其中少尿型7例,非少尿型2例,少尿期为1～8 d,平均(4±2)d;入院时血清BUN平均为(12.23±4.97)mmol/L,Scr平均为(596.5±412.3)μmol/L.9例患者中,4例经肾活检证实为急性肾小管坏死(ATN),其余5例根据临床表现、实验室检查结果以及病情演变诊断为ATN.所有患者经停用莲必治注射液,内科保守治疗,其中5例患者行肾脏替代治疗(主要是血液透析)后,肾功能均恢复正常.所有患者的临床特点均与氨基糖苷类致ARF患者的相同.(2)7例非中药莲必治药物过敏的ARF病例中,年龄23岁～67岁,平均(45±13)岁;其中少尿型5例,非少尿型2例,少尿期为2～14 d,平均(6±4)d;入院时BUN平均(16.15±4.55)mmol/L,Scr(643.4±462.2)μmol/L.7例患者中,5例经肾活检证实为急性肾间质炎症(AIN),其余2例根据临床表现、实验室检查结果以及病情演变诊断为AIN.所有患者停用相关药物,均行血液透析,并须加用肾上腺皮质激素治疗,7例患者中5例肾功能恢复正常,另外2例好转.结论:中药莲必治注射液有一定肾毒性作用.

来氟米特联合中小剂量糖皮质激素治疗进展性IgA肾病的研究

目的观察来氟米特联合中小剂量糖皮质激素治疗进展性IgA肾病患者的临床效果及其对尿血管细胞黏附分子(VCAM)-1水平的影响。方法符合条件的3个月内接受肾脏活组织检查、蛋白尿>1.0g/d、Lee氏Ⅱ～Ⅳ级的IgA肾病患者随机入组来氟米特+糖皮质激素治疗组(LEF组)和糖皮质激素治疗组(激素组)。LEF组予口服来氟米特联合泼尼松治疗,来氟米特的起始剂量为40mg/d顿服,3d后减量至20mg/d顿服;泼尼松的起始剂量为0.8mg.kg-1.d-1(最大剂量40mg/d)顿服,4～6周后逐步减量,总疗程为1年。激素组予口服泼尼松治疗,起始剂量为1mg.kg-1.d-1(最大剂量60mg/d)顿服,8～12周后逐步减量。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测治疗前和治疗6个月时尿VCAM-1水平。结果共36例患者入选,LEF组和激素组各18例。LEF组治疗6个月时的尿VCAM-1水平中位数为23.5ng/L(6.1～332.3ng/L),24h尿蛋白中位数为1.1g(0.3～2.0g),显著低于治疗前的44.9ng/L(14.1～560.4ng/L,P=0.017)和2.4g(1.4～4.0g,P<0.01),血清肌酐的差异无统计学意义(P>0.05)。激素组治疗6个月时的尿VCAM-1水平中位数为10.8ng/L(3.8～78.4ng/L),虽低于治疗前的22.6ng/L(4.5～632.9ng/L),但差异无统计学意义(P=0.068),治疗6个月时的24h尿蛋白中位数为0.4g(0.1～1.1g),显著低于治疗前的2.6g(1.7～3.1g,P=0.001),血清肌酐的差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关分析结果显示,尿VCAM-1水平与血清肌酐值相关(r=0.236,P=0.046)。结论来氟米特联合中小剂量糖皮质激素治疗进展性IgA肾病的临床效果与大剂量激素治疗相仿,抑制VCAM-1的表达可能是其治疗机制之一。

高峰高原建设目标下医学研究范式的调整——加强临床医学研究

医学研究有基础生物医学研究和临床医学研究两种范式。临床医学研究目前存在思想认识不足、研究投入不够、高端人才匮乏、评价体系不完善、数据有待整合等问题。加强临床医学研究,需要着力把握以下关键环节:以研究型医师和临床专职科研人员两支队伍为依托,通过转变思路理念,变临床资源为科研资源;改革体制机制,引育人才并激发人才活力;加大资金投入,增强科研项目经费的导向作用;构筑数据平台,整合建立规范的生物样本库和统一的数据库;加强国际合作,加快构建全球范围的多中心临床研究协作网络等。

研究型医院构建过程中临床专职科研队伍建设的思考

在医院内部建立临床专职科研队伍有利于提高医院的科研水平、促进临床学科建设、提升医院整体影响力,也符合分级诊疗体制下的大型医院发展目标。目前我国大型医院中,专职科研人员占比远低于国外水平。其主要原因在于:对研究型医院的建设认识不到位,卫生人力配置总体不足,医院科研环境对高层次研究人员缺乏吸引力,相关学位培养制度不健全。未来我国发展研究型医院,需从建立专职科研队伍入手,转变医院管理理念,拓宽人才培养渠道,准确把握学科发展动态,促进临床学科与基础学科和公共卫生学科的交叉融合,并加大投资力度,多角度完善相关管理制度。

黄芪甲苷对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的:旨在探究黄芪甲苷(ASI)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤的抑制作用,并阐明其机制。方法:体外培养人肾小管上皮细胞,进行分组:正常对照组:低糖(葡萄糖浓度5.5mmol/L)环境下培养;高糖组:高糖(葡萄糖浓度25mmol/L)环境下培养;ASI各组:分别在高糖培养基内加入不同浓度ASI(包括25、50、100、200μg/ml),在处理后0、1、12、24、48、96h观察,采用TUNEL法和caspase3检测各组细胞凋亡情况,采用ELISA法检测TGF-β1和HGF蛋白含量,采用Western blot检测磷酸化p-38、磷酸化ERK和磷酸化JNK浓度。此外,另在同样高糖培养基内加入p38抑制剂SB202190,1、12、24h观察细胞凋亡情况。最后,取同样高糖环境培养细胞,依次加入HGF50、100、200μg/ml,24h后检测细胞内磷酸化p38蛋白水平。结果:ASI(25～200μg/ml)可抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡,其抑制作用呈现剂量依赖性与时间依赖性。ASI同样可抑制高糖诱导的TGF-β1蛋白表达和p38MAPK信号通路活性。此外ASI可提高肾小管上皮细胞内HGF浓度;HGF可对p38MAPK信号通路产生抑制作用。结论:ASI抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与ASI促进HGF分泌,阻断p38MAPK信号通路,进而抑制细胞凋亡以及TGF-β1的表达有关。ASI可能有助于糖尿病肾病的治疗。

慢性肾脏病住院患者合并高血压的临床研究

目的研究慢性肾脏病(CKD)住院患者合并高血压的临床特征。方法采用横断面+回顾性的流行病学研究方法,调查2009年11月—2010年2月上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科住院CKD患者的高血压患病、知晓、治疗和控制比例,研究危险因素及降压药物使用情况。2015年6—8月通过电话问卷回访调查CKD合并高血压患者的血压控制情况,有无不良事件发生。结果共纳入住院CKD患者439名,合并高血压的患病比例为69.5%(305/439),知晓比例为95.4%(291/305),治疗比例为92.8%(283/305),高血压控制比例为36.4%(111/305)。住院CKD合并高血压患者中61.3%(187/305)需要使用1种以上降压药治疗。5年后的随访发现,血压未达标患者不良事件的发生比例显著高于血压达标患者(P<0.001)。结论1CKD患者的高血压患病比例高,患者的高血压知晓及治疗比例高,但是高血压的达标比例较低。2多数CKD患者需要应用1种以上降压药物来控制血压。3有效控制血压能显著减少不良事件的发生。

血清白细胞介素-18水平升高可预测IgA肾病患者的疾病进展

目的探讨IgA肾病(IgAN)患者的血清白细胞介素(IL)-18水平与肾脏预后之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测36例IgAN患者治疗前后的血清IL-18水平,并对其进行前瞻性随访,评价IL-18与患者肾脏预后之间的关系。结果 IgAN患者血清IL-18水平为(360.3±25.2)ng/L,显著高于健康对照者的(51.2±8.9)ng/L(P<0.01)。糖皮质激素治疗后,IgAN患者血清IL-18水平为(119.6±21.8)ng/L,较治疗前显著降低(P<0.001)。对lgAN患者进行19.0～62.4个月的前瞻性随访,中位随访期为38.7个月。随访期间14例(38.9%)患者出现肾功能减退。肾功能减退组患者治疗前、后IL-18水平分别为(364.45±40.25)、(132.44±32.40)ng/L,均显著高于肾功能稳定组的(353.67±16.36)、(99.41±24.14)ng/L(P值均<0.05)。Spearman相关分析显示,与随访期间肾小球滤过率(eGFR)降低的相关因素包括治疗前患者血清IL-18(r=-0.127,P=0.045)、血清肌酐(r=0.442,P=0.007)和eGFR(r=-0.845,P<0.001)。将以上所有变量纳入Logistic回归方程进行分析,治疗前IL-18水平(β=0.346,P=0.033)、eGFR(β=-0.41,P=0.013)是预测IgAN患者eGFR减退与否的重要危险因素。Kaplan-Meier生存分析结果显示,治疗前血清IL-18水平较高者的肾脏预后较差(P=0.008)。Cox回归分析进一步证实,治疗前血清IL-18水平(β=0.984,95%CI为0.926～1.042,P<0.001)及治疗前eGFR减退(β=1.021,95%CI为0.999～1.043,P=0.045)是预测肾脏预后的独立危险因素。结论治疗前IL-18水平升高可能是预测IgAN患者肾脏疾病进展的重要生物学标志物之一。

腹腔CT影像学检查在腹膜透析相关非感染性腹腔并发症中的诊断价值

目的:初步探讨腹腔CT影像学检查在诊断持续性非卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialy-sis,CAPD)患者非感染性腹腔并发症中的应用价值。方法:前瞻性地对2005年至2007年间在我院进行CAPD治疗且临床高度怀疑为透析相关非感染性腹腔并发症的患者进行腹腔CT影像学检查。结合临床资料,综合分析患者是否存在腹腔渗漏、疝气、局部腹透液的聚集和大网膜包裹等情况,评估腹腔CT影像学检查的应用价值。结果:腹腔CT造影检查发现,11例CAPD患者中有9例出现异常情况,其中包括腹股沟疝气3例,睾丸鞘膜积液1例,脐疝1例,导管出口处渗漏2例,大网膜包裹2例;其中8例(腹股沟疝气2例,睾丸鞘膜积液1例,脐疝1例,导管出口处渗漏2例,大网膜包裹2例)有手术条件的患者经过手术均得到证实。结论:在一些存在可疑腹膜透析相关非感染性腹腔并发症的CAPD患者中,腹腔CT影像学检查可能是一种无创、可靠且灵敏度较高的检查技术,操作简便易行,有助于明确诊断,值得进一步研究。

血小板反应蛋白1通过活化转化生长因子β1促进人间皮细胞间皮间叶转化

目的探讨血小板反应蛋白1(TSP-1)对TGF-β1活性的调控在人间皮细胞间皮间叶转化(MMT)中的作用及其机制。方法体外培养人间皮细胞株(Met-5A细胞),与无血清培养基组(对照组)比较,测定外源性TSP-1刺激下(以5ng/mL的TSP-1刺激为TSP-1小剂量组,以10ng/mL的TSP-1刺激为TSP-1大剂量组)Met-5A细胞中TGF-β1的表达和活性,Smad通路活化,以及MMT标志因子纤维连接蛋白(FN)、人Ⅲ型胶原蛋白(CollⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Snail的表达。同时观察5ng/mL的TSP-1和10\mg/mL的TGF-β1中和抗体刺激下(中和组)Met-5A细胞中Smad通路活化和MMT发生的变化。结果 TSP-1小剂量组和TSP-1大剂量组对Met-5A细胞中TGF-β1表达量和活性的上调作用均呈时间依赖性(P值均<0.05),但两组间同时间点的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。故之后的实验均应用5ng/mL的TSP-1刺激细胞。TSP-1小剂量组在刺激24、48、72h时Met-5A细胞中FN、CollⅢ、Snail和α-SMA mRNA的相对表达量均显著高于对照组同时间点(P值均<0.05),FN、CollⅢ、Snail和α-SMA蛋白的相对表达量均显著高于对照组刺激0h时(P值均<0.05)。TSP-1小剂量组在刺激10、30、60、120min时Met-5A细胞中p-Smad2/3/Smad2/3蛋白的相对表达量均显著高于对照组刺激0h时(P值均<0.05)。TSP-1小剂量组在刺激24、48、72h时Met-5A细胞中的FN、CollⅢ、Snail和α-SMA mRNA相对表达量均显著低于对照组刺激0h时和中和组同时间点(P值均<0.05)。结论 TSP-1通过活化TGF-β1/Smad信号通路促进人间皮细胞MMT的发生。