副结核分枝杆菌map0862基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为探索MAP0862蛋白在分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,研究构建了MAP0862的原核表达map0862-pET32a(+)质粒,并对其进行了诱导表达。以副结核分枝杆菌P10基因组DNA为模板,经PCR方法扩增副结核分枝杆菌map0862基因片段,将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中。将重组子转化到大肠杆菌BL21(DE3),在E.coli中诱导表达带组氨酸标签的map0862-pET32a(+)的融合蛋白。结果显示,经IPTG诱导表达出约55 kD的融合蛋白,用副结核阳性血清进行Western blot检测,证明MAP0862重组蛋白具有良好的免疫原性。

牛结核病诊断用特异性抗原的研究进展

本文综述了牛结核病诊断中几种特异性结核蛋白的研究进展。牛结核病的诊断方法主要是基于细胞免疫的皮肤变态反应和基于抗原抗体反应的血清学方法。目前牛结核病的主要诊断试剂为牛型提纯结核菌素(PPD),由于PPD与卡介苗及环境分枝杆菌存在交叉反应,导致特异性较低。根据这一情况,各种特异性抗原不断被发现并用于诊断。

一起仔猪慢性猪瘟与水肿病混合感染的报告

报告了一起死亡率达62%的仔猪慢性猪瘟与水肿病混合感染的发病症状、剖检情况及防治。

布鲁氏菌S2 WboA基因缺失株的构建及免疫效果

【目的】WboA基因编码光滑型布鲁氏菌脂多糖(LPS)O-侧链合成必须的糖基转移酶,该基因的缺失或破坏会影响布鲁氏菌光滑型表型的形成。本研究拟构建WboA基因缺失的重组粗糙型布鲁氏菌,以使布鲁氏菌弱毒疫苗与野毒株布鲁氏菌感染相区分。【方法】以猪源光滑型布鲁氏菌S2株为研究对象,通过同源重组将氯霉素抗性基因(Cmr)完全替代S2株的WboA基因,获得重组粗糙型布鲁氏菌rS2-WboA株。【结果】rS2-WboA株在适宜的培养基(TSA)上传50代后仍保持对氯霉素的抗性。用1×107 CFU rS2-WboA免疫Balb/c小鼠和豚鼠,1个月后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体。1×1011 CFU rS2-WboA菌攻毒Balb/c小鼠后,不会引起死亡,并且能抵抗200 CFU强毒M28的攻击。小鼠试验显示了rS2-WboA与原始株S2相似的保护性和更高的安全性,其保护性也略高于另一重组株rS2-WbkC。【结论】WboA可作为构建重组粗糙型布鲁氏菌疫苗株缺失的靶基因。

猪圆环病毒2型分子流行病学及疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)在世界范围内广泛分布,主要以PCV2a和PCV2b两种基因型为主,PCV2b亚型为当前流行基因型。现有商品化疫苗主要针对PCV2a型病毒,也可对PCV2b型病毒产生部分交叉保护,但不能显著控制PCV2b型病毒在猪群中的传播。除此之外,由于已有的商品化疫苗以传统疫苗为主,存在种毒增殖难、疫苗生产周期长等缺点。因此,研发PCV2b新型疫苗可能成为未来PCV2疫苗研制的主要方向。对PCV2的分子流行病学及疫苗研究现状进行了综述,以期为PCV2疫苗的研究提供参考。

猪场繁殖母猪饲养的几个重要环节

我国近年来由国外引进了大量的种猪，这些种猪大多都是经过高强度选育品种，具有较高的市场经济价值。但现在的母猪与其祖先比较对营养变得更加敏感，所以母猪营养供给要求更严格。

玉米乙烯应答元件结合蛋白基因启动子克隆与功能验证

为了给玉米转基因研究提供更多的非生物逆境诱导启动子,寻找只在逆境胁迫条件下适当驱动外源抗逆基因的表达,在生物信息学分析的基础上,克隆与水稻DREB1B转录因子基因同源的玉米乙烯应答元件结合蛋白基因sb CBF6的启动子psb CBF6,在非生物逆境应答元件分析和实时定量PCR验证其非生物逆境胁迫响应特性后,用以构建驱动报告基因GUS的表达载体,并使用基因枪法转化玉米愈伤组织,通过愈伤组织的GUS荧光值与荧光素酶发光值的比值,评价psb CBF6启动子在非生物逆境胁迫及激素诱导条件下的驱动活性。结果表明,sb CBF6基因在各种非生物逆境胁迫下差异表达。psb CBF6启动子长1 479 bp,存在多种与非生物逆境胁迫应答相关的调控元件,可在非生物胁迫条件下驱动外源抗逆基因在转基因植物中诱导表达。试验结果为研究抗逆转基因玉米提了供参考。

鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗的研制

为研制鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗,以鸭疫里默氏菌血清1型RAf63株和2型RAf34株为菌种,培养,灭活,浓缩,混合后制成二价灭活疫苗。2倍量接种6d樱桃谷鸭测定疫苗的安全性;接种6d樱桃谷鸭,免疫后5、10、14、21、35、49、63、70d,进行攻菌试验,测定疫苗的免疫原性。结果表明,该疫苗安全,免疫后14d产生保护,保护率为90%,免疫持续期可达60d。研制成功可用于预防由血清1型和2型鸭疫里默氏菌引起的鸭传染性浆膜炎。

鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗制苗用菌株的筛选

选取鸭疫里默氏菌血清1型和2型菌株各6株进行毒力比较,结果发现不同菌株的毒力略有差异。选择毒力较强的鸭疫里默氏菌血清1型和2型菌株各3株制备灭活油乳剂疫苗,免疫6日龄鸭后14d以同血清型菌株进行攻毒保护试验,RAf63株和RAf34株制备的疫苗免疫保护率最高,是理想的制苗用菌株。

肉毒中毒症实验室诊断的研究进展

肉毒中毒症是一种潜在的致死性瘫痪疾病,快速准确的诊断对该病的治疗显得尤为必要。本文综述了肉毒中毒症毒素检测、细菌培养、分子检测、遗传鉴定等实验室诊断的进展情况,以期对本病的快速诊断有所启示。

玉米HVA22基因启动子的克隆与功能验证

利用转基因技术转化利用外源抗性基因,可提高玉米对非生物逆境的抵抗能力,改良其在不良环境下的稳产性。但是,在过去的研究中,大多采用组成型启动子启动外源抗逆基因过量表达,虽然可以改良转基因株系的抗逆性,但其生长发育受到不同程度抑制,适应性代价较大。用非生物逆境诱导启动子,可培育出只在逆境胁迫下表达的转基因抗逆品种,避免正常条件下抗逆基因过量表达的不良影响。本研究以水稻HVA22蛋白质的氨基酸序列为探针,搜索玉米基因组同源mRNA序列HVA22,用PlantCARE软件分析并同源克隆其上游启动子序列,实时荧光定量PCR验证HVA22基因在非生物逆境胁迫下的差异表达,构建HVA22基因启动子HVA22s启动GUS基因的表达载体,基因枪法转化玉米愈伤组织,GUS染色检测启动活性。结果表明,玉米HVA22s启动子长度1478 bp,含有多种与非生物逆境应答相关的调控元件。HVA22基因在高温胁迫,以及脱落酸和乙烯诱导下上调表达。用HVA22s启动GUS基因转化的玉米愈伤组织,在脱落酸诱导、甘露醇模拟高渗处理、低温和高盐胁迫条件下,GUS染色均可显现靛蓝色斑点,说明HVA22s启动子确有非生物逆境启动功能,进一步验证其启动活性后可运用于玉米抗逆转基因研究。

玉米胚胎发生后期丰富蛋白基因的启动子克隆与功能验证

该研究在生物信息学分析的基础上,克隆玉米胚胎发生后期丰富蛋白基因(MGL3)的启动子序列(pMGL3),进行非生物逆境应答元件分析以及实时定量PCR验证其非生物逆境胁迫响应特性,构建了pMGL3启动子驱动报告基因(GUS)表达载体,基因枪法转化玉米愈伤组织,通过GUS染色验证pMGL3启动子在非生物逆境胁迫下的驱动活性。再根据启动子序列分析结果,去除不同的顺式作用元件,构建不同长度pMGL3启动子驱动报告基因GUS表达载体,农杆菌介导法转化烟草叶盘,以确定pMGL3启动子的最短活性序列。结果显示:pMGL3启动子长1 554bp,存在多种与非生物逆境胁迫应答相关的调控元件,在干旱、高盐、低温胁迫及脱落酸、乙烯诱导下驱动MGL3基因增量表达,用以驱动GUS基因转化玉米愈伤组织,在高渗、高盐、低温胁迫及脱落酸诱导下具有驱动活性,且截短至325bp仍可保持驱动活性。研究表明,pMGL3启动子的确有非生物逆境诱导启动活性,进一步验证其作用机理后可运用于玉米抗逆转基因研究。

玉米钼辅助因子硫酸化酶基因启动子的克隆与功能验证

为克服组成型启动子启动外源基因过量表达引起的诸多问题,同源克隆(Mo-molybdopterin cofactor sulfurase)基因(ABA3)的启动子(ABA3s)序列,并用PlantCARE软件分析其非生物逆境应答元件,实时定量PCR检测ABA3基因在非生物逆境诱导下的差异表达后。然后,用该启动子构建启动GUS(β-glucuronidase)基因的表达载体,基因枪法转化玉米愈伤组织。经组织化学染色法检测其表达后,在高渗、高盐、低温胁迫处理及ABA诱导下检测GUS酶荧光值与荧光素酶(内参)发光值的比值(GUS/LUC),以此评价ABA3s启动子在非生物逆境胁迫下的启动活性。结果表明,ABA3基因在模拟干旱、低温、高温、高盐胁迫及ABA、乙稀诱导下差异表达,说明该基因的启动子(ABA3s)具有非生物逆境诱导活性。序列分析表明,ABA3s启动子全长777 bp,含有ARE、HSE、MBS、TGA、Circadian等多种非生物逆境胁迫应答元件。用ABA3s启动GUS基因构建的表达载体转化的玉米愈伤组织,响应干旱、低温、高温、高盐胁迫等多种非生物逆境胁迫,及ABA和乙稀诱导,GUS检测呈阳性。在8%甘露醇高渗条件下,GUS/LUC比值比空白对照高6倍。上述结果表明,ABA3s启动子具有非生物逆境诱导特性,经进一步验证其功能后,可用于玉米抗逆转基因研究。

母猪各阶段的精细饲养

科学合理的饲养方案应使后备母猪在220。240日龄体重达到130～140千克，膘厚达18～20毫米，有过2次正常的发情，从而在第3个发情期配种。要实现此目标，应采用如下的饲养方案：45～75千克体重阶段饲喂生长育成猪饲粮，自由采食；75～100千克体重阶段饲喂小母猪育成期饲粮。适当限制饲喂。100千克体重配种前2星期继续饲喂小母猪专用饲粮，限制饲养，控制日喂量在2．5～3．0千克，防止后备母猪过肥。

我国税制“低碳化”改革措施

经过30多年的快速发展．我国经济社会在取得巨大成就的同时．也正面临着环境污染、资源枯竭带来的严峻挑战。加强生态环境保护，节约资源已被确立为基本国策。绿色发展、低碳发展的理念正逐步深入人心，

工程设计对造价的影响因素分析及应对策略

从工程设计与造价之间的关系进行梳理,指出影响因素并提出控制造价的措施及合理建议,同时从工程立项、评审、投资、建设、施工等体系的制度完善提出相关建议。其中设计成果是在相关法律法规要求及规划需求框架内对业主单位项目需求的具体实施、规划、描述等的具体化过程,是工程建设的关键环节,同时为处理技术和经济关系的重要一环,对于控制工程造价起着重要的作用。结合四川省巴中市工程实际,从设计方案选择、主要建筑材料、功能合理、“四新技术”运用及从业企业、人员专业素养方面等工程造价的影响因素分析,并提出相应的对策。此外,施工图预算是施工阶段控制工程造价的主控依据及设计成果深度是否达到国家标准,功能是否满足使用要求,不仅关系到投资,对工程能否顺利实施及竣工验收后经济使用效果及投资控制也产生较大的影响。

上市公司会计信息披露的质量探讨——信息不对称视角

会计信息披露是投资者与被投资单位之间信息沟通的重要桥梁,提高信息披露的质量可以有效降低信息不对称的程度,缓解经营者与外部利益相关者的矛盾冲突。信息披露水平偏低是当前上市公司普遍存在的现象,本文旨在分析上市公司普遍存在的信息披露等问题,并针对相关的问题提出一系列的改进措施。

税制“低碳化”改革的政策措施

一、进一步改革资源税制。1．扩大资源税的征税范围。目前，资源税的征税范围主要包括：原油、天然气、煤炭、其他非金属矿原矿、黑色和有色金属矿原矿、盐等七个应税产品。现行资源税制仅主要将部分不可再生资源纳入到了征税范畴，而对水、土地、草原、森林等具有重大生态价值的可再生资源的开发利用缺乏税收调节，造成了对这些资源的不合理开发和浪费。同时，这些可再生资源对应对气候变化和发展低碳经济有着不可或缺的作用。

母畜几种乳房疾病及诊治

1乳房创伤乳房创伤乳房及乳头的创伤,有表层创及深层创之分,常见于乳用家畜卧地时乳房被邻近母畜踏伤,或被钉子、铁叉尖及树枝等尖锐物体刺伤。临床表现为从创口有乳汁流出,如为乳头壁的穿透创,则经常流乳。乳腺深层创,由于乳汁不断流出,不易愈合,并易受感染而发生蜂窝织炎及脓性乳房炎。预防措施：（1）乳房深层创：首先切除创缘坏死组织,然后消毒创口并撒布青霉素粉,以结节缝合法缝合创口;创口下角应开放,以利排液,待炎症开始消退时,再缝合。