新疆北疆部分地区HPV的流行情况及高危型HPV 16、18与宫颈病变的关系

为探讨液基薄层细胞检测(TCT)与杂交捕获二代(HC2)技术在宫颈癌及癌前病变筛查中的应用价值,研究高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)16/18感染与宫颈病变的关系。本研究采用对1460位宫颈病变患者的宫颈脱落细胞样本,依次进行TCT和HC2检查,并对TCT检查结果异常且HC2检测结果为阳性的样本进行聚合酶链式反应(PCR)检测。结果显示:在1460例患者中有414例(28.4%,414/1460)患者的宫颈脱落细胞样本TCT检查结果异常,其中未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)102例(6.99%,102/1460),低度鳞状上皮内病变(LSIL)162例(11.1%,162/1460),高度鳞状上皮内病变(HSIL)/鳞状细胞癌(SCC)150例(10.2%,150/1460);414例TCT检查结果异常的样本中,有224例HC2检测为阳性,其中139例PCR检测为阳性,测序分型发现HPV 16型占10.9%,HPV18型占1.7%,并且其发生率随着宫颈病变等级的增加而升高;通过系统进化分析,发现新疆北疆地区的HPV16,18型序列具有特有的性质。由此可知,在临床宫颈病变人群中,高危型HPV 16和HPV 18的感染率较高并出现序列多样性。在HPV疫苗还没有引进和实施的新疆地区,筛查应该作为预防宫颈癌的主要手段。

伴有神经系统损害莱姆病患者血清学诊断的方法学研究

建立一种新的胶体金免疫层析诊断伴有神经系统损害的莱姆病方法,为伴有神经系统损害的严重莱姆病病例的早期诊断提供参考。方法:收集30份伴有神经系统损害的莱姆病患者血清,运用自行制备的胶体金免疫层析试纸条检测,结果与标准的Western Blot方法结果进行对比。结果:30份疑似莱姆病患者血清中有5份检测结果呈阳性,其中伴有脑膜炎、头痛、神经精神障碍和面神经炎的患者分别为1、2、1和1例,与Western Blot分析结果一致,符合率为100%。结论:胶体金免疫层析试纸条用于伴有神经系统损害的莱姆病患者的诊断具有重复性好、特异性好且简单、快速等优点,具有一定的可行性。

新疆边境地区伊宁县图兰扇头蜱形态学及分子生物学鉴定

目的对新疆边境地区伊宁县图兰扇头蜱进行形态学和分子生物学鉴定。方法在新疆边境地区的伊宁县随机采集畜牧体表寄生蜱324只,进行形态学初步筛选,从中选取6只形态差异较大的图兰扇头蜱,进行线粒体16S rRNA和线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列扩增、测序,并与GenBank登录的图兰扇头蜱参考序列进行遗传进化分析。结果形态学鉴定采集的伊宁县蜱类皆为图兰扇头蜱,两段序列的碱基组成均显示较高的A+T比例(16S rRNA基因为73.8%,COⅠ基因为70.34%),在变异程度上16S rRNA基因较COⅠ基因明显保守。结论首次应用形态学、16S rRNA和COⅠ基因测序分析表明新疆伊宁县采集蜱皆为图兰扇头蜱,并证明图兰扇头蜱具有生物多样性。

合成七肽在牛种布鲁氏菌RB51株侵染人单核细胞系THP-1过程中对MAPK通路的影响

目的观察七肽LPAAQKT在布鲁氏菌侵染人单核细胞系THP-1过程中对MAPK通路的影响。方法通过MTT法检测合成七肽对THP-1的毒性;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测七肽对感染细胞凋亡的影响;通过CFU计数分析七肽对感染细胞内细菌数量的影响;采用qRT-PCR和Western blot检测牛种布鲁氏菌RB51感染THP-1不同阶段MAPK通路中ERK1/2、JNK1/2、P38的mRNA和蛋白活化及表达情况。结果合成七肽对THP-1无毒性作用;流式细胞术检测七肽对THP-1细胞凋亡作用的影响为:感染复数50∶1组4h时对细胞凋亡有促进作用,48h时对细胞凋亡有抑制作用;CFU计数显示在感染前预先加入七肽导致THP-1细胞内布鲁氏菌数少于未加七肽组;qRTPCR和磷酸化Western blot显示,感染4h时,七肽降低感染组中erk1的转录与蛋白活化,感染48h时七肽降低jnk1/2的转录与蛋白活化。结论环化七肽CLPAAQKTC参与感染细胞的凋亡过程,因此有望用于布鲁氏菌病治疗药物的研发。

中哈边境地区艾比湖湿地硬蜱分布及鉴定

目的探究新疆阿拉山口艾比湖湿地蜱的种类、季节消长规律及其分子特征,为阿拉山口艾比湖湿地蜱的分类研究以及蜱传疾病的科学防控提供依据。方法采用布旗法和动物体表搜集法在阿拉山口禾角克边防连、乌兰达布森管护站、艾比湖湿地国家自然保护区石头房子3个采样点,自2014年4-8月连续采集蜱,对采集蜱种进行形态学鉴定,并选取代表蜱种进行线粒体16S r DNA序列扩增与测序分析。结果共采集蜱434只,其中游离蜱392只,寄生蜱42只;经体视显微镜形态学鉴定,采集样本为1科4属（扇头蜱属、璃眼蜱属、革蜱属、血蜱属）7种（亚洲璃眼蜱、边缘革蜱、银盾革蜱、血红扇头蜱、图兰扇头蜱、囊形扇头蜱、短垫血蜱）;艾比湖湿地优势蜱种为亚洲璃眼蜱、边缘革蜱;蜱活动高峰集中在5-6月,革蜱属最高峰出现在5月,亚洲璃眼蜱为6月;线粒体16S r DNA PCR测序比对结果显示,边缘革蜱与新疆石河子注册的KF547986同源性在96%-100%,亚洲璃眼蜱与新疆伊犁注册的KF527439同源性在98%-99%,血红扇头蜱与以色列注册的KF219732同源性在93%-94%。结论首次在艾比湖湿地发现图兰扇头蜱和囊形扇头蜱;在国际上首次对短垫血蜱16S r DNA序列进行了分析和报道,该蜱与美国Haemaphysalis cretica同源性最高（91.0%）;艾比湖湿地地区边缘革蜱、亚洲璃眼蜱、血红扇头蜱16S r DNA存在多样性,来自不同蜱种遗传分支。

新疆克拉玛依地区亚洲璃眼蜱中首次检测到伯氏疏螺旋体sensu stricto基因型

莱姆病是由伯氏疏螺旋体[Borrelia（B．）burgdorferi]引起，以硬蜱为主要传播媒介的人畜共患传染病。人群对莱姆病普遍易感，其中野外工作者、林业工人和牧民是莱姆病的高发人群。克拉玛依是我国重要的石油石化基地，基于亚洲璃眼蜱是克拉玛依主要蜱种之一，本研究对该区域亚洲璃眼蜱进行伯氏疏螺旋体核酸检测，以期对石油勘探区人群和石油工人的外出风险给出评价。

新疆阿拉山口艾比湖湿地蜱种莱姆病病原体检测

目的 了解新疆阿拉山口艾比湖湿地主要蜱种莱姆病螺旋体感染与基因型状况.方法 2014年4-8月,在新疆艾比湖湿地选取3个采集点,采用布旗法采集游离蜱,经形态学鉴定蜱种后,采用巢式PCR法扩增莱姆病病原5S-23S rRNA基因,将PCR产物测序并进行BLAST比对分析.结果 共检测游离蜱152只,其中血红扇头蜱12只、亚洲璃眼蜱59只、边缘革蜱81只.各蜱种莱姆病病原总体阳性率为34.87％（53/152）,其中亚洲璃眼蜱阳性率为（57.63％,34/59）,边缘革蜱阳性率为（22.22％,18/81）,血红扇头蜱阳性率为（8.33％,1/12）,亚洲璃眼蜱的阳性率高于边缘革蜱和血红扇头蜱（x2=18.328、9.694,P均＜0.05）;5S-23SrRNA基因测序比对显示艾比湖湿地莱姆病基因型为伯氏疏螺旋体.结论 首次在新疆阿拉山口艾比湖湿地硬蜱检测到伯氏疏螺旋体,提示新疆艾比湖为莱姆病病原自然疫源地.

2014年新疆温泉县人间布鲁菌病监测结果分析

目的探讨我国边境偏远地区新疆温泉县人间布鲁菌病（简称布病）流行与易感人群性别、年龄、职业以及病原种和生物型的相关性。方法2014年，对温泉县既往发病率较高的7个乡、镇、场的1148位牧工（203人）、兼牧农民（809人）和兽医（136人）进行虎红平板凝集试验初筛、试管凝集试验（SAT）确诊，采集急性期患者（未用抗生素治疗）全血12份，分离布鲁菌，将获得的疑似菌落纯化后进行进一步细菌学鉴定。结果受试人群血清总体感染率为8．97％（103／1148）；感染率男性（11．91％，71／596）高于女性（5．80％，32／552），20～29岁年龄段的感染率最高（9．56％，13／136）；布病感染的职业人群以牧民最高感染率为（10.34％，21／203），其次为农民（兼牧，感染率为8．65％，70／809）；从急性期患者分离获得4份布鲁菌纯培养物，经鉴定均为羊种布鲁菌生物3型。结论2014年温泉县流行菌株的生物型与我国布病总体流行一致，其布病疫情非常严峻，未来亟须加强政府指导下建立多部门参与的联防联控工作机制以有效遏制我国边境偏远地区布病的严峻形势。

羊种布鲁菌VirB5蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备羊种布鲁菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB5的单克隆抗体,为布鲁菌病的病原学诊断及研究提供基础。方法将纯化的VirB5蛋白以60μg/只的剂量对4只SPF级雌性BALB/c小鼠进行皮下注射免疫,以30μg/只的剂量每2周加强免疫1次,共3次;2周后,取小鼠眼眶静脉血测定抗体效价,再经腹腔注射进行第4次加强免疫;3d后,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞按5∶1的比例进行融合。对融合的细胞进行3次细胞筛选及单克隆化,建立稳定分泌VirB5抗体的杂交瘤细胞株;对1只BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞腹腔注射,待小鼠腹部明显膨大时收集腹水并进行抗体效价测定。单克隆抗体免疫学特性鉴定分别采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白免疫印迹法。结果共建立6株能够分泌VirB5抗体的单克隆细胞株(2-2、2-12、2-19、2-25、2-31和2-40)。其中,细胞株2-19能够稳定分泌特异性识别VirB5纯化蛋白的抗体,经鉴定其分泌的VirB5抗体为IgG1亚型、κ轻链,单抗亲和常数为1.6×10^8,且腹腔注射细胞株2-19的小鼠腹水抗体效价为1∶51200。结论成功制备出布鲁菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB5的高亲和性单克隆抗体,抗体能够快速与病原菌表面蛋白特异性结合,为布鲁菌病病原学诊断方法的建立提供了一种备选材料。