响应面法优化骆驼刺多糖的提取工艺

本次实验使用骆驼刺根部为原材料,为探究酸性骆驼刺多糖(Alhagi Sparsifoliashap Polysaccharide,ASP)的最佳提取工艺,提高骆驼刺多糖提取率。通过热水提取法研究提取次数、提取温度、料水比及提取时间等单因素对多糖提取率的影响,并在单因素试验基础上,采用响应面法以提取温度、提取时间和水料比等三因素为自变量,考察三因素对多糖提取率的影响,并确立最佳条件。结果显示,提取次数固定为2次,骆驼刺多糖最佳提取条件为:提取温度95℃、提取时间2.1 h、骆驼刺与水比1∶26 g/mL,多糖得率为(1.626±0.025)%。结果表明,经过优化后的骆驼刺多糖得率值与响应面法所得方程的预测值符合良好,此条件为获得骆驼刺多糖的最佳提取条件。

骆驼刺酸性多糖对小鼠脾脏淋巴细胞免疫增强作用的研究

[目的]本文旨在探讨骆驼刺酸性多糖(acidic Alhagi sparsifolia Shap polysaccharide,aASP)对小鼠脾淋巴细胞的免疫增强作用。[方法]采用醇沉法提取骆驼刺多糖,采用柱层析法对骆驼刺多糖进行分离及纯化,采用苯酚硫酸法、硫酸-咔唑法和BCA微孔酶标仪法,检测糖、糖醛酸和蛋白含量,采用红外光谱法鉴别多糖性质。采用MTT法确定aASP对小鼠脾脏淋巴细胞的安全浓度,在安全浓度范围内500、125和31.25μg·mL^(-1)3个浓度下检测单独、协同脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和植物血凝素(phytoheamagglutinin,PHA)对脾淋巴细胞的增殖效果;流式细胞术检测aASP对淋巴细胞亚群分化的影响;ELISA法检测aASP对淋巴细胞细胞因子分泌的影响。[结果]骆驼刺多糖提取物中多糖含量为(81.8±1.2)%,糖醛酸含量为(17.34±0.75)%,蛋白含量为(0.54±0.08)%;红外光谱显示aASP在1746.53 cm^(-1)处有较强的吸收峰,结合糖醛酸含量判定aASP为酸性多糖。高、中、低浓度的aASP均可促进脾脏淋巴细胞增殖,协同LPS和PHA能够更显著促进B细胞和T淋巴细胞的增殖(P<0.05)。流式细胞术和ELISA检测结果显示aASP能够促进CD4^(+)和CD8a^(+)T细胞的分化,并促进脾淋巴细胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-4。[结论]aASP可以增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖,诱导小鼠脾脏T淋巴细胞产生Th1(helper T lymphocyte 1)及Th2(helper T lymphocyte 2)混合型免疫应答,免疫细胞偏向CD4^(+)T细胞分化。

石榴花水提物的体内外抗炎作用

为检测石榴花水提物(PEW)的抗炎功效,首先测定PEW对巨噬细胞的体外安全浓度,并在安全浓度下检测PEW对脂多糖(LPS)诱导炎症模型巨噬细胞一氧化氮(NO)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌水平的影响,最后通过测定PEW对二甲苯所致的小鼠耳郭肿胀的抑制作用,观察PEW的抗炎作用。结果显示,PEW在10~100μg/mL均能够显著抑制LPS诱导炎症模型巨噬细胞NO的分泌(P<0.05),其中100μg/mL浓度时的抑制作用最强。经LPS诱导后炎症模型巨噬细胞能够分泌大量IL-6及TNF-α,PEW能够有效抑制炎症模型巨噬细胞IL-6及TNF-α的分泌。PEW对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的影响试验结果显示,高剂量(500μg/mL)PEW对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的抑制效果最佳,抑制率可高达60%,耳肿胀度和阳性药物地塞米松组无显著性差异(P>0.05)。由体内外试验可知,PEW体内外均具有良好的抗炎活性,其中高浓度PEW(500μg/mL)的活性最强。本试验为石榴花进一步开发利用提供试验依据。

黑果小檗2种提取物小鼠小肠推进作用研究

目的研究黑果小檗提取物对小鼠小肠体内运动机能的影响。方法采用2种不同极性的溶剂提取黑果小檗有效成分;每种提取物36只小鼠随机分为3组外加1组12只的1 mL/只50%墨汁双蒸水进行灌胃给药空白对照组,末次给药后30 min,取胃称全重计算胃内残留率。取幽门到回盲部的小肠测量幽门至回盲部全长及幽门至黑色圆环前沿的距离,以幽门至黑色圆环前沿的距离占幽门至回盲部全长的百分率为小肠推进率进行小肠推进功能的测定。结果黑果小檗提取物组小鼠胃残留率与肠道推进率与空白组对比有差异,尤其是高、中剂量差异显著(P<0.05)。结论黑果小檗具有抑制胃肠运动的功能。

石榴花水提物活性成分检测及抗炎作用

为检测石榴花水提物(pomegranate flower water extract,PFW)中的主要活性成分及抗炎功效,采用显色法通过紫外分光光度仪对PFW中多糖、黄酮、生物碱、皂苷、多酚、蛋白等活性成分含量进行了检测,通过急性毒性试验确定了PFW的安全性,最后通过测定PFW对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀的抑制作用、血清细胞因子分泌及HE染色切片检测,确定PFW的抗炎作用。结果显示,PFW中主要活性成分为多糖和多酚,含量分别为(43.84±1.94)%和(22.44±1.62)%,其余活性成分含量均低于10%。急性毒性试验判断PFW为无严重急性毒性的物质。PFW对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响试验。结果显示,中、高剂量PFW对二甲苯致小鼠耳廓肿胀具有良好的抑制作用,同时相对模型组和地塞米松药物组能够显著降低血清IL-6、TNF-α的分泌量(P<0.05),能够减少炎性细胞的浸润,具有良好的抗炎效果。结果表明,PFW具有良好的抗炎活性,其中高、中剂量浓度PFW的活性较好。为石榴花进一步开发利用提供了依据。