NF-κB和P38MAPK在BMSCs肝向分化中的作用

目的探讨信号转导分子核因子κB(NF-κB)和P38MAPK在肝细胞生长因子(HGF)、肝组织液(LTF)介导下骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肝样细胞定向分化过程的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs,利用HGF、LTF两种诱导剂以及NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082对第3代BMSCs进行分组培养。采用吲哚靛青绿(ICG)摄取实验检测肝向分化的细胞,免疫组化染色检测NF-κB蛋白表达,Western Blot法检测NF-κB、p-P38和AAT表达。结果经HGF、LTF诱导20d后的细胞可摄取ICG。免疫组化检测显示,BMSCs经HGF、LTF两种诱导剂诱导后,细胞核内有NF-κB蛋白表达,添加抑制剂BAY 11-7082后细胞核内NF-κB蛋白表达减弱(F=572.2、280.9,P<0.01)。Western Blot检测显示,经HGF、LTF两种诱导剂诱导后,细胞内NF-κB和p-P38蛋白表达量显著增加,且细胞能够表达AAT蛋白,加入抑制剂BAY 11-7082后随着培养时间的延长,NF-κB、p-P38和AAT蛋白表达量均出现不同程度的降低(F=280.8~3 028.2,P<0.01)。结论 HGF、LTF均可诱导BMSCs向肝细胞分化,P38MAPK和NF-κB信号通路均参与了BMSCs的肝向分化,P38MAPK信号通路的调控主要出现在肝向分化的前期,NF-κB的抑制在前期对其无明显影响。

LPS和NNK对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响

目的观察炎性刺激因子脂多糖(LPS)、4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)及LPS联合NNK对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及核因子κB(NF-κB)、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响。方法应用全骨髓贴壁法体外培养纯化BMSCs。采用MTT法检测不同浓度的炎性因子对BMSCs增殖的影响,选择最佳刺激浓度。应用免疫细胞化学法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白表达的影响,采用Western blot法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响。结果不同浓度的炎性因子均能促进大鼠BMSCs增殖,其中以12.5 mg/L LPS、10 mg/L NNK、12.5 mg/L LPS联合10 mg/L NNK对大鼠BMSCs增殖的促进作用最为明显。免疫细胞化学法检测显示,炎性刺激后BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白的表达量显著增加,差异有显著性(F=165.1~481.8,P<0.01)。Western blot法检测显示,炎性刺激后NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白的表达量增加,差异有统计学意义(F=38.1~1 531.0,P<0.01)。结论炎性因子可能通过激活P38MAPK和NF-κB信号途径促进大鼠BMSCs的增殖。长时间的炎性因子刺激,促进了NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白在细胞核中的表达。